正交試驗(yàn)優(yōu)化暴馬丁香枝條中紫丁香苷提取了藝

李雯 邢躍 呂世存 秦佳梅

摘要：為了充分利用暴馬丁香資源，以暴馬丁香枝條為材料，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)化浸提液濃度、超聲功率、超聲時(shí)間的最佳提取工藝條件。結(jié)果為60%的乙醇、超聲頻率180w、超聲60min，提取率達(dá)2.268mg/g。

關(guān)鍵詞：暴馬丁香枝條;紫丁香苷;超聲;正交試驗(yàn)

暴馬丁香為亞喬木，樹(shù)皮人藥，有清肺、祛痰、消炎、止咳、平喘、利尿等功效。中國(guó)藥典將紫丁香苷為藥材評(píng)價(jià)指標(biāo)。紫丁香苷具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、保肝、抗炎、降血壓、提高耐受能力等藥理活性。在藥材采收時(shí)大量的暴馬丁香枝條被修剪下來(lái).造成了資源的浪費(fèi)。而王化等研究表明，暴馬丁香樹(shù)干、枝條均含有紫丁香苷，故選擇暴馬丁香枝條為材料，通過(guò)正交設(shè)計(jì)法，探究超聲提取暴馬丁香中紫丁香苷的最佳工藝，為暴馬丁香資源的綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1供試材料

于2018年春采自吉林省白山市臨江區(qū)，經(jīng)鑒定為暴馬丁香[Syringa reticulata，（BL）Hara var amureneis（Maxim.）Hara]枝條，烘干粉碎過(guò)40目篩，裝袋備用。

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。準(zhǔn)確稱量5mg紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)品（純度HPLC≥98）加純凈水定容得100ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，準(zhǔn)確移取2.5、5.0、7.5、10.0、12.5mL分別放置于5個(gè)50mL容量瓶中，用純凈水定容并搖勻，稀釋100倍，在265nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。標(biāo)準(zhǔn)線性方程為Y=0.0457X+0.0133（R²=0.9993），表明紫丁香苷濃度在5～25ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2供試溶液的提取與測(cè)定。精確稱取暴馬丁香粗粉1g，以乙醇濃度、超聲時(shí)間、超聲頻率為考察因素，以紫丁香苷提取率為指標(biāo)進(jìn)行超聲波提取的正交優(yōu)化。選用L9（3）4正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1。以純化水為溶劑配制成不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇，量取一定體積并浸泡1h，用KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器在不同功率下超聲提取一定時(shí)間，將得到提取液在轉(zhuǎn)速為12000r/min TGL-20bR離心機(jī)下離心25min，精密移取lmL提取液稀釋100倍后，用1.2.1方法測(cè)定吸光度，并計(jì)算含量。

1.3數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用IIV3.1正交設(shè)計(jì)助手對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)、結(jié)果與分析

由表2中極差R可得到，各因素對(duì)紫丁香苷含量的影響順序?yàn)镃>A>B，即超聲功率>乙醇濃度>超聲時(shí)間。綜合直觀分析3個(gè)因素的紫丁香苷含量的平均值K₁、K₂、K₃，確定最佳提取工藝的條件組合為A₂B₂C₂，即超聲提取正交試驗(yàn)最佳提取工藝為：乙醇濃度60%、超聲時(shí)間60min、超聲頻率180w。由分析結(jié)果可知，超聲功率對(duì)紫丁香苷含量的影響較顯著，乙醇濃度和超聲時(shí)間對(duì)紫丁香苷含量的影響則不顯著。根據(jù)得出的最優(yōu)條件進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，經(jīng)3次平行試驗(yàn)所得紫丁香苷提取率的平均值為2.268mg/g，紫丁香苷含量數(shù)據(jù)穩(wěn)定.提取工藝穩(wěn)定可靠。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)考察的4個(gè)主要因素——料液比、乙醇濃度、超聲功率、超聲時(shí)間，其中料液比和乙醇濃度的結(jié)果與蔡恩博等的研究一致，而超聲功率的影響與文獻(xiàn)結(jié)果有差異，超聲時(shí)間的影響尚無(wú)資料可參閱，因此，本項(xiàng)目確定液料比為1：20（mg/mL），正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)考察乙醇濃度45%、60%、75%;超聲功率120w、180w、240w、超聲時(shí)間45min、60min、75min的交互作用對(duì)超聲輔助提取暴馬丁香枝條中紫丁香苷的影響，結(jié)果影響順序?yàn)槌暪β?浸提液濃度>超聲時(shí)間，最佳提取工藝為乙醇濃度60%、超聲時(shí)間60min、超聲頻率180w。其中超聲條件認(rèn)為時(shí)間延長(zhǎng)可使提取物溶解到溶劑的總量在不斷增多，過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致部分提取物結(jié)構(gòu)被破壞。超聲功率較低不足以使物料充分受到超聲波的作用，而過(guò)高則可能對(duì)紫丁香苷產(chǎn)生破壞作用。

正交試驗(yàn)法是根據(jù)正交性從全面試驗(yàn)中挑選出部分有代表性的點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)試驗(yàn)涉及的因素在3個(gè)或3個(gè)以上，而且因素間可能有交互作用時(shí)，試驗(yàn)工作量就會(huì)變得很大甚至難以實(shí)施，針對(duì)這個(gè)困擾，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)無(wú)疑是一種好的選擇，其優(yōu)點(diǎn)是高效率、快速、經(jīng)濟(jì)。