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    排毒養(yǎng)顏膠囊對(duì)尿酸酶缺失大鼠的降血尿酸作用*

    2020-11-20 02:01:50董鮮祥段為鋼
    關(guān)鍵詞:排泄量養(yǎng)顏排泄物

    董鮮祥,范 楠,云 宇,陳 歡,段為鋼△

    (1.昆明醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系,云南 昆明 650500;2.云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省中醫(yī)藥學(xué)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南 昆明 650500)

    尿酸是人類嘌呤代謝的終產(chǎn)物,高尿酸血癥已成為危及人們身體健康的“第四高”[1]。經(jīng)典的降尿酸途徑主要是抑制黃嘌呤氧化酶減少尿酸合成,和/或促進(jìn)尿酸腎臟排泄,但這種全身式的用藥容易導(dǎo)致全身性的安全問題[2]。有報(bào)道稱腸道也是尿酸分布的重要器官,具有很強(qiáng)的排泄尿酸潛力[3]。排毒養(yǎng)顏膠囊是一種通便排毒的中成藥,該藥的通便排毒作用是否包括“促尿酸腸道排泄”尚不清楚,本研究試圖回答該問題。

    1 材料方法

    1.1 材料 雄性尿酸酶基因敲除(Uox-/-)大鼠,即Kunming-DY大鼠,體質(zhì)量180~220 g,由實(shí)驗(yàn)室自制[4]。排毒養(yǎng)顏膠囊(0.4 g/粒)由云南盤龍?jiān)坪K帢I(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào)180321;尿酸試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)(貨號(hào):C012-1-1);Tecan酶標(biāo)儀(Infinity 200Pro)由奧地利生產(chǎn)。

    1.2 分組及給藥 取13粒排毒養(yǎng)顏膠囊,去膠囊殼,加125 mL蒸餾水,攪成混懸液。取7只Uox-/-大鼠,置于代謝籠中。給藥前于30℃斷尾取血制備血清樣品,收集24 h排泄物。隨后按體重灌胃排毒養(yǎng)顏膠囊混懸液(0.42 g/kg),連續(xù)給藥5 d,末次給藥2 h后斷尾脈取血,并收集第5天24 h的排泄物。排泄物置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 尿酸測(cè)定 尿酸測(cè)定采用磷鎢酸法,操作按照說明書進(jìn)行。血清樣品直接測(cè)定。排泄物樣品先自然解凍。尿液搖勻后,取10 μL,用50 mmol/L的NaHCO3[5]稀釋10倍后檢測(cè)。糞便樣品加2倍重量的100 mmol/L的氨丁三醇溶液[5],搖勻,離心取上清液檢測(cè)。

    2 結(jié)果

    2.1 血清尿酸水平 正常情況下,雄性Uox-/-大鼠的血尿酸處于較高水平;給予排毒養(yǎng)顏膠囊5 d后,大鼠的血清尿酸水平下降了近一倍。與給藥前相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 大鼠給藥前后的血尿酸濃度(±s,μg/mL)

    表1 大鼠給藥前后的血尿酸濃度(±s,μg/mL)

    注:與給藥前相比,*P<0.05。

    鼠號(hào) 給藥前 給藥后 后-前1 67.45 25.48 -41.97 2 121.11 17.73 -103.38 3 62.83 45.26 -17.57 4 60.04 56.35 -3.69 5 11.45 12.90 1.45 6 120.26 49.95 -70.31 7 88.64 39.14 -49.5(x ± s)75.97±38.34 35.27±16.73* -40.71±37.78436 P 0.029

    2.2 大鼠給藥前后24 h排泄物中的尿酸總量變化正常情況下,Uox-/-大鼠的尿酸排泄以尿液為主。給予排毒養(yǎng)顏膠囊后,大鼠糞便中的尿酸排泄量明顯增加(P<0.05),尿液中的尿酸排泄總量呈現(xiàn)減少趨勢(shì)(P=0.109)。與給藥前相比,糞便的尿酸排泄量增加了83.7%,腎臟排泄減少了50.8%,見表2。

    表2 大鼠給藥前后的24 h尿酸排泄量(±s,μg)

    表2 大鼠給藥前后的24 h尿酸排泄量(±s,μg)

    注:與給藥前相比,*P<0.05。

    鼠號(hào) 尿液糞便給藥前 給藥后 后-前 給藥前 給藥后 后-前1 9386.6 14327.7 4941.1 1278.0 2564.7 1286.7 2 15550.5 5067.8 -10482.7 1210.8 2968.6 1757.8 3 16890.0 9871.3 -7018.7 1356.8 3583.2 2226.4 4 20270.2 5416.4 -14853.8 1295.2 1744.5 449.3 5 2908.8 4513.1 1604.3 963.6 1081.2 117.6 6 7126.8 6448.8 -678.0 1227.6 1704.8 477.2 7 27214.1 3200.0 -24014.1 1673.2 2899.3 1226.1(x± s)14192.4±8326.3 6977.9±3853.7 -7214.6±10161.7 1286.5±211.4 2363.8±879.7* 1077.3±766.5 P 0.1090.010

    2.3 大鼠給藥前后24 h排泄物尿酸相對(duì)量變化大鼠幾乎不排汗,尿液和糞便排泄的尿酸總量可視為尿酸的總排泄量(100%)。將表2數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化后可見:正常情況下,雄性Uox-/-大鼠的尿液尿酸排泄量約占90%,糞便排泄量約10%;給予排毒養(yǎng)顏膠囊后,大鼠的尿液尿酸排泄量減少到約70%,糞便排泄量升高到約30%;差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表3。

    表3 大鼠給藥前后尿液糞便的占比(±s,%)

    表3 大鼠給藥前后尿液糞便的占比(±s,%)

    注:與給藥前相比,*P<0.05。

    尿液 糞便鼠號(hào)給藥前 給藥后 給藥前 給藥后1 88.0 84.8 12.0 15.2 2 92.8 63.1 7.2 36.9 3 92.6 73.4 7.4 26.6 4 94.0 75.6 6.0 24.5 5 75.1 80.7 24.9 19.3 6 85.3 79.1 14.7 20.9 7 94.2 52.5 5.8 47.5(x ± s)88.9±6.9 11.1±6.9* 72.7±11.3 27.3±11.3*P 0.040 0.040

    2.4 大鼠給藥前后的排泄量變化 排毒養(yǎng)顏膠囊具有促進(jìn)排便的作用。正常情況下,成年雄性Uox-/-大鼠的24 h尿量約25 mL;給予排毒養(yǎng)顏膠囊后,尿液量減少到18.5 mL,減少約20%(23.2%)。正常的糞便排泄量約6 g,用藥后增加到8 g,增加約40%(38.9%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但將大小便排泄總量進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)用藥后約只減少10%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表4。

    2.5 大鼠給藥前后排泄物尿酸含量的變化 考慮到排毒養(yǎng)顏膠囊能改變大小便的排泄比例,為了考查該藥能否改變排泄物中的尿酸含量(濃度),對(duì)排泄物尿酸濃度進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),用藥后尿液中尿酸濃度呈下降趨勢(shì),糞便中的尿酸含量呈增加趨勢(shì),但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表5。

    表4 大鼠給藥前后24 h尿液糞便量的變化

    表5 大鼠給藥前后24 h排泄物尿酸含量(±s,μg/g)的變化

    表5 大鼠給藥前后24 h排泄物尿酸含量(±s,μg/g)的變化

    注:與給藥前相比,*P<0.05;假定尿液的比重為1。

    尿液糞便鼠號(hào) 給藥前 給藥后 后-前 給藥前 給藥后 后-前1 315.0 471.3 156.3 177.5 342.9 165.4 2 1007.2 341.0 -666.1 171.5 294.5 123.0 3 487.9 390.2 -97.7 197.8 319.9 122.1 4 633.0 283.3 -349.8 309.9 274.3 -35.6 5 175.4 334.3 158.9 199.1 177.8 -21.3 6 390.7 369.8 -21.0 256.8 288.9 32.1 7 1120.8 297.4 -823.4 268.1 288.2 20.1(x± s)590.0±354.8 355.3±63.3 -234.7±391.2 225.8±52.6 283.8±52.1 58.0±78.5 P 0.1640.099

    3 討論

    Uox-/-大鼠是我們采用CRISPR/Cas9技術(shù)研制的新型大鼠(以SD大鼠為背景)[4]。相比野生型SD大鼠[6],該大鼠由于缺乏尿酸酶,血尿酸值明顯升高。Uox-/-雄鼠的尿酸值接近成年男性的血尿酸值,甚至達(dá)到高尿酸血癥的標(biāo)準(zhǔn)??上驳氖?,該大鼠可以長(zhǎng)期存活,是研究高尿酸血癥的“理想模型動(dòng)物”。

    一般認(rèn)為尿酸的排泄主要通過腎臟,因?yàn)樵撏緩秸嫉脚判箍偭康?/3以上,只有不到1/3的尿酸從腸道排泄[2-6]。然而,課題組前期研究發(fā)現(xiàn),有大量的尿酸分布在大鼠腸液中,其總量約為血液量的2~3倍,且與血尿酸水平存在較好的相關(guān)性[3]。由于尿酸在腸道下段存在重吸收現(xiàn)象,因此腸道排泄的尿酸總量仍然較小[3]。如果加速腸道尿酸排出,理應(yīng)具有一定的降血尿酸作用,可能還兼具有不良反應(yīng)少而輕的特點(diǎn)。

    排毒養(yǎng)顏膠囊是國(guó)家藥物監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)上市的通便排毒中成藥,由大黃、西洋參、白術(shù)、青陽參、小紅參、荷葉、枳實(shí)等藥物組成。由于尿酸在腸道具有較高分布[3],通便應(yīng)該有利于糞便排出,繼而有利于腸道中的尿酸排出,從而產(chǎn)生降血尿酸效果。通常,體內(nèi)的尿酸2/3由內(nèi)源性嘌呤代謝而來,由食物攝入嘌呤生成的尿酸不到1/3[2-6]。本研究采用Uox-/-大鼠,對(duì)大鼠沒有進(jìn)行飲食限制,比較接近臨床發(fā)病情況。由于排毒養(yǎng)顏膠囊具有通便作用,本研究也就避免了灌胃造??赡艹霈F(xiàn)的假陽性治療效果。從對(duì)大鼠大、小便尿酸排泄量的結(jié)果看,用藥后小便尿酸排泄量減少,但大便尿酸排泄量增加。因此,本研究中,大鼠的血尿酸水平降低可以用促進(jìn)腸道排泄尿酸來解釋。服用藥物后,大鼠的小便排泄減少,大便排泄增加;但從大、小便排泄總量來看,變化并不明顯,平均只減少了約10%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4);這間接提示用藥對(duì)大鼠飲食總量的影響較小。從大、小便尿酸含量(濃度)看,用藥后糞便量排泄增加,且糞便中尿酸含量也有增加趨勢(shì),提示排毒養(yǎng)顏膠囊還具有一定的促腸道分泌尿酸的作用,但由于本研究樣本量偏小,未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    雖然有采用尿酸吸附劑蒙脫石口服降尿酸的報(bào)道[7],但傳統(tǒng)促尿酸排泄的途徑仍是促進(jìn)腎臟排泄[2]。在高尿酸血癥的背景下,該途徑可能進(jìn)一步加重腎臟負(fù)擔(dān)。通過腸道排尿酸,理論上是有利于降低腎臟負(fù)擔(dān)的。在本研究中可以看到,使用排毒養(yǎng)顏膠囊后,血尿酸下降的同時(shí),尿中排出的尿酸總量和濃度也是減少的,顯然這對(duì)保護(hù)腎功能有利。

    綜上所述,排毒養(yǎng)顏膠囊可以通過增加腸道尿酸排泄降低血尿酸水平。

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