3,8′-聯(lián)芹菜苷元通過(guò)抑制氧連接氮乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶(OGT)降低HeLa細(xì)胞遷移侵襲潛能

劉 欣，張娜娜，曹 禺，朱 彤，李文利，張嘉寧，劉宇博

(大連理工大學(xué)，生命科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，遼寧 盤(pán)錦 124000)

蛋白質(zhì)的氧連接氮乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)修飾是一種廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的翻譯后修飾，是一種非經(jīng)典的糖基化，其底物蛋白為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的可溶蛋白。不同于復(fù)雜的細(xì)胞膜蛋白聚糖修飾，O-GlcNAc糖基化是一種發(fā)生在底物蛋白絲/蘇氨酸殘基上的單糖修飾[1]。與磷酸化修飾類似，O-GlcNAc修飾是動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程[2]：糖基供體尿苷二磷酸氮乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)在氧連接氮乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase， OGT)的催化作用下連接到底物蛋白上，完成O-GlcNAc修飾；而在對(duì)應(yīng)糖苷酶(OGA)的作用下，O-GlcNAc從蛋白質(zhì)的肽鏈上水解，完成去糖基化[3]。OGT活性的異常對(duì)是包括癌癥在內(nèi)的多種慢性疾病的共同特征。已有大量研究表明，OGT催化的O-GlcNAc[4-6]糖基化異常與腫瘤細(xì)胞代謝重編程介導(dǎo)的快速增值和遷移侵襲密切相關(guān)[7]。因此，抑制OGT酶活性帶來(lái)的O-GlcNAc修飾降低將有望抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，用于多種腫瘤的治療[8-9]。

目前，已報(bào)道的OGT小分子抑制劑主要包括四氧嘧啶類化合物、氮乙酰半乳糖胺衍生物、OSMI-1(喹啉酮-6-黃酰胺衍生物)、苯并惡唑啉酮衍生物[10-11]，以及本課題組前期報(bào)道的四氫穗花杉雙黃酮(tetrahydroamen-toflavone)[12]。其中，天然產(chǎn)物類四氫穗花杉雙黃酮顯示出較低的IC50值，且具有細(xì)胞毒性小的優(yōu)勢(shì)。在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步分析了四氫穗花杉雙黃酮的天然產(chǎn)物類似物，分析其與OGT的結(jié)合能和細(xì)胞外OGT抑制活性。通過(guò)細(xì)胞內(nèi)及外活性檢測(cè)[13]，均確認(rèn)3,8′-聯(lián)芹菜苷元(3,8′-Biapigenin)具有優(yōu)于四氫穗花杉雙黃酮的OGT抑制活性，可通過(guò)抑制HeLa細(xì)胞的O-GlcNAc修飾，降低腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲潛能。且有研究表明確實(shí)有相關(guān)藥物，例如噻吩取代長(zhǎng)鏈查爾酮可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[4]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1細(xì)胞 人宮頸癌細(xì)胞系HeLa，購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2軟件及數(shù)據(jù)庫(kù) 分子對(duì)接與結(jié)合能分析軟件Discovery Studio 4.5(Accelrys Software公司，美國(guó))，化學(xué)結(jié)構(gòu)式繪制軟件Chembiodraw 15.0(Cambridgesoft公司，美國(guó))，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)。

1.1.3試劑 氧連接氮乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶(OGT)多肽底物(CKII肽，氨基酸序列為KKKYPGGSTPVSSANMM，強(qiáng)耀公司，#04010026647，中國(guó))，四氫穗花杉雙黃酮及其類似物(ChemFaces，#48236-96-0，中國(guó))，二甲基亞砜(DMSO，Sigma公司，#67-68-5，美國(guó))和尿苷二磷酸氮乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc，Sigma公司， 91183-98-1，美國(guó))，O-GlcNAc抗體(RL2，Abcam公司，#ab2739，英國(guó))，OGT活性分析試劑盒(Promega公司，#V6961，美國(guó))，其它化學(xué)試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.4儀器 二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱、Nanodrop型微量分光光度儀、Pico17型高速低溫離心機(jī)(Thermo Fisher公司，美國(guó))，F(xiàn)luorChem HD2型化學(xué)發(fā)光成像儀(伯樂(lè)公司，美國(guó))，Synergy H1型全功能熒光酶標(biāo)儀(BioTek公司，美國(guó))。

1.2 方法

1.2.1四氫穗花杉雙黃酮類似物與OGT結(jié)合能分析 利用Discovery Studio 4.5對(duì)受體OGT(Protein Bank Database，3PE4)晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，從而達(dá)到去水加氫等目的；分別將候選化合物利用Discovery Studio 4.5軟件中Libdock模塊進(jìn)行以O(shè)GT為受體的剛性分子對(duì)接，得到由Libdock計(jì)算所得的受體與配體結(jié)合自由能；使用C-Docker模塊再次對(duì)接，輸出半柔性對(duì)接條件下的受體與配體結(jié)合自由能；對(duì)兩種對(duì)接方式所得結(jié)果按平均值進(jìn)行排序，使用聚類分析算法獲得最終的候選分子。

1.2.23,8′-聯(lián)芹菜苷元分子動(dòng)力學(xué)模擬分析 使用Discovery Studio 4.5軟件對(duì)3,8′-聯(lián)芹菜苷元進(jìn)行能量最優(yōu)處理，利用分子對(duì)接結(jié)果中OGT與3,8′-聯(lián)芹菜苷元的結(jié)構(gòu)，以O(shè)GT/UDP的X射線晶體結(jié)構(gòu)(3PE4)為模板，去除UDP結(jié)構(gòu)和晶體中的水分子，以O(shè)GT蛋白分子脯氨酸(Pro)559為中心，建立活性中心。并調(diào)節(jié)相應(yīng)大小，以覆蓋UDP和OGT的結(jié)合位置。使用Discovery Studio 4.5軟件中分子動(dòng)力學(xué)模擬模塊對(duì)分子對(duì)接結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)處理后賦予Amber立場(chǎng)，模擬發(fā)生體系在pH 7.4環(huán)境下，設(shè)定分子動(dòng)力學(xué)優(yōu)化的采樣區(qū)間為10 ns，輸出優(yōu)化的結(jié)構(gòu)。

1.2.3OGT活性細(xì)胞外活性測(cè)定 使用高效液相色譜法(HPLC法)分析四氫穗花杉雙黃酮及其類似物對(duì)OGT活性的抑制作用。將200 μmol·L-1的FAM熒光標(biāo)記的OGT底物多肽CKII肽(FAM-KKKYPGGSTPVSSANMM)，1 mmol·L-1的UDP-GlcNAc，100 nmol·L-1的人源OGT蛋白，12.5 mmol·L-1MgCl2，緩沖體系(150 mmol·L-1NaCl，1 mmol·L-1EDTA，2.5 mmol·L-1三羥丙基膦，20 mmol·L-1Tris-HCl，pH 7.4)的反應(yīng)混合物和候選小分子在37 ℃孵育30 min后，加入等體積的甲醇終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物以10 000×g離心10 min。將上清液(40 μL)加載到Agilent 1260 Infinity HPLC系統(tǒng)上，使用熒光檢測(cè)器以基于糖肽產(chǎn)物和肽底物的積分面積定量分析產(chǎn)物得率。使用Zorbax SB-C18 StableBond為分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm；Agilent)。流動(dòng)相A為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1% TFA水溶液，流動(dòng)相B為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1% TFA的乙腈溶液。液相使用梯度洗脫組分(流速為1 mL/min；0 min洗脫溶劑混合物A/B=90/10；20 min洗脫溶劑混合物A/B=70/30)。每個(gè)反應(yīng)重復(fù)2次或3次后，利用GraphPad 5計(jì)算IC50值。

在無(wú)細(xì)胞反應(yīng)體系中檢測(cè)體外OGT酶活，使用OGT活性分析試劑盒檢測(cè)候選分子對(duì)OGT酶活的抑制情況。多肽底物為無(wú)標(biāo)記的CKII肽(KKKYPGGSTPVSSANMM)，于黑色96孔板進(jìn)行，反應(yīng)體系組成為250 mmol·L-1的OGT,125 μmol·L-1的CKII，40 μmol·L-1的UDP-GlcNAc，其它反應(yīng)試劑和步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，使用GraphPad 5計(jì)算IC50值。

1.2.4細(xì)胞培養(yǎng) HeLa細(xì)胞使用含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%青/鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基在37 ℃，飽和濕度的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)并傳代。

1.2.5Western blot及凝集素印跡實(shí)驗(yàn) 使用候選小分子處理細(xì)胞相應(yīng)時(shí)間后，收集5×106的HeLa細(xì)胞，使用Western細(xì)胞裂解液提取總蛋白，Nanodrop蛋白定量后，利用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的SDS-PAGE電泳分析總蛋白樣品，然后濕法轉(zhuǎn)膜(PVDF膜)。利用BSA封閉液室溫封閉2 h后，使用1 ∶1 000的抗體或凝集素在4 ℃條件下孵育過(guò)夜，PVDF膜洗滌3次，每次5min，在室溫條件下使用二抗(1 ∶5 000)中孵育1 h，洗滌3次后，使用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)。

1.2.6細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 將1×106的HeLa細(xì)胞并接種到6孔板中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)近滿后劃痕，PBS洗3次，更換無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)加入候選小分子抑制劑，使用DMSO作為對(duì)照，繼續(xù)培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間使用顯微鏡觀察劃痕愈合情況。

1.2.7Transwell侵襲實(shí)驗(yàn) 將Matrigel基質(zhì)膠與RPMI 1640培養(yǎng)基按1 ∶5比例混勻后加入Transwell小室底部，取5×105個(gè)HeLa細(xì)胞接種于Transwell上室(200 μL無(wú)血清培養(yǎng)基)，下室內(nèi)加入500 μL完全培養(yǎng)液。將相應(yīng)濃度的候選小分子抑制劑加入上室內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，以DMSO為對(duì)照。使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%多聚甲醛固定上室細(xì)胞10 min，使用結(jié)晶紫染料染色30 min。PBS洗滌后使用棉簽擦去小室上層細(xì)胞，利用倒置顯微鏡觀察小室下層細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)侵襲細(xì)胞數(shù)目。

2 結(jié)果

2.1 3,8′-聯(lián)芹菜苷元具有OGT體外抑制活性選取10個(gè)已知OGT小分子抑制劑四氫穗花杉雙黃酮(tetrahydroamentoflavone)的類似物分子(Fig 1A)，依據(jù)OGT與天然底物的結(jié)合模式，利用兩種對(duì)接方式Lib-Dock(剛性對(duì)接)和C-Docker(半柔性對(duì)接)。結(jié)合能力情況如Fig 1B所示，其中結(jié)合能力3,8′-聯(lián)芹菜苷元在候選分子中具有優(yōu)于四氫穗花杉雙黃酮的結(jié)合能。OGT活性分析試劑盒檢測(cè)表明所有候選分子在50 μmol·L-1濃度下均具有不同程度的OGT抑制活性，其中3,8′-聯(lián)芹菜苷元可抑制OGT活性超過(guò)82%(Fig 1C)。

2.2 3,8′-聯(lián)芹菜苷元結(jié)合在OGT的底物結(jié)合口袋為了進(jìn)一步闡釋3,8′-聯(lián)芹菜苷元抑制OGT的作用機(jī)制，使用分子動(dòng)力學(xué)模擬優(yōu)化3,8′-聯(lián)芹菜苷元與OGT(3PE3)的分子對(duì)接結(jié)果，經(jīng)20 ns優(yōu)化后，輸出結(jié)構(gòu)穩(wěn)定狀態(tài)構(gòu)象，聚類后挑選最大聚類的典型構(gòu)象。該構(gòu)象在20 ns的模擬軌跡中的頻率約為60.8%。Fig 2A和Fig 2B給出3,8′-聯(lián)芹菜苷元與OGT底物結(jié)合口袋結(jié)合的穩(wěn)定狀態(tài)構(gòu)象，其中3,8′-聯(lián)芹菜苷元的B環(huán)與His920和Gln839形成兩個(gè)較穩(wěn)定的氫鍵相互作用，C環(huán)羥基與His920形成較穩(wěn)定的氫鍵相互作用，D環(huán)與Thr922形成較穩(wěn)定的氫鍵相互作用，E環(huán)羥基與Ala896和Phe837形成2個(gè)較穩(wěn)定的氫鍵相互作用。同時(shí)3,8′-聯(lián)芹菜苷元與OGT活性口袋處的Met501、His498、Lys634、Thr633、His901、Asn838、His558殘基形成一個(gè)范德華力網(wǎng)。這些穩(wěn)定的相互作用，使得3,8′-聯(lián)芹菜苷元能夠穩(wěn)定結(jié)合在OGT活性口袋內(nèi)。

Fig 2 Binding model analysis of 3,8′-Biapigenin and OGTA:Binding pose of 3,8′-Biapigenin with OGT after molecular dynamics simulation;B:Analysis of binding model of 3,8′-Biapigenin and OGT.

2.3 3,8′-聯(lián)芹菜苷元OGT抑制活性優(yōu)于四氫穗花杉雙黃酮使用HPLC法[15]分析3,8′-聯(lián)芹菜苷元和四氫穗花杉雙黃酮對(duì)OGT活性的抑制作用 (Fig 3A)，結(jié)果顯示加入候選分子相比與對(duì)照OGT單獨(dú)反應(yīng)1 h，9 min出現(xiàn)的產(chǎn)物峰明顯減弱，相應(yīng)在18 min的底物峰增強(qiáng)，證明候選分子均能抑制OGT將CKII肽糖基化反應(yīng)。但由結(jié)果圖可見(jiàn)，3,8′-聯(lián)芹菜苷元作用1 h的產(chǎn)物峰明顯低于四氫穗花杉雙黃酮作用組，且底物峰呈相反趨勢(shì)，證明在相同反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，3,8′-聯(lián)芹菜苷元具有優(yōu)于四氫穗花杉雙黃酮的OGT抑制活性。進(jìn)一步使用0.025 μmol·L-1～400 μmol·L-1的濃度梯度的3,8′-聯(lián)芹菜苷元作用于OGT無(wú)細(xì)胞反應(yīng)體系，結(jié)果顯示3,8′-聯(lián)芹菜苷元對(duì)OGT抑制呈濃度依賴特征，計(jì)算3,8′-聯(lián)芹菜苷元對(duì)OGT的半數(shù)抑制濃度(IC50)值為12.88 μmol·L-1(Fig 3B)，優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道的四氫穗花杉雙黃酮21.8 μmol·L-1的IC50值。

2.4 3,8′-聯(lián)芹菜苷元有效抑制細(xì)胞內(nèi)OGT活性為了進(jìn)一步研究3,8′-聯(lián)芹菜苷元在活細(xì)胞中的OGT抑制活性，使用25 μmol·L-1～200 μmol·L-1的3,8′-聯(lián)芹菜苷元處理HeLa細(xì)胞24 h，Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)OGT催化的蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾變化情況。結(jié)果表明隨著3,8′-聯(lián)芹菜苷元濃度的增加，O-GlcNAc修飾呈現(xiàn)減少趨勢(shì)(Fig 4A)。使用100 μmol·L-1的3,8′-聯(lián)芹菜苷元處理HeLa細(xì)胞6～24 h，細(xì)胞內(nèi)糖基化修飾水平隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低(Fig 4B)，證明3,8′-聯(lián)芹菜苷元可以時(shí)間和濃度梯度方式抑制HeLa細(xì)胞內(nèi)的OGT活性。使用凝集素半刀豆球蛋白A(concanavalin A, ConA)和野豌豆凝集素(fluorescein labeled vicia villosa lectin, VVL)檢測(cè)100 μmol·L-1的3,8′-聯(lián)芹菜苷元處理24 h后的HeLa細(xì)胞蛋白質(zhì)N-聚糖和O-聚糖修飾(Fig 4C)，未見(jiàn)明顯改變，證明其它聚糖結(jié)構(gòu)不受3,8′-聯(lián)芹菜苷元影響。

2.5 3,8′-聯(lián)芹菜苷元抑制HeLa細(xì)胞遷移侵襲潛能50 μmol·L-1～100 μmol·L-1的3,8′-聯(lián)芹菜苷元處理HeLa細(xì)胞48 h能夠明顯抑制細(xì)胞劃痕愈合(Fig 4D)。Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，100 μmol·L-1的3,8′-聯(lián)芹菜苷元和四氫穗花杉雙黃酮處理48 h均能有效抑制HeLa細(xì)胞的侵襲潛能(Fig 4E)。這些結(jié)果表明3,8′-聯(lián)芹菜苷元能夠抑制細(xì)胞內(nèi)的OGT，通過(guò)降低胞內(nèi)O-GlcNAc糖基化修飾抑制腫瘤細(xì)胞遷移侵襲潛能。

Fig 4 3,8′-Biapigenin inhibited OGT activity in HeLa cells and effect of 3,8′-Biapigenin on HeLa cell invasiveness and migration capabilityA:Western blot of HeLa cell lysates after 3,8′-Biapigenin treatment at different doses(0～200 μmol·L-1) for 24 h;B:Western blot of HeLa cell lysates after 3,8′-Biapigenin treatment at 100 μmol·L-1 for indicated times;C:Lectin blot of HeLa cell lysates after 3,8′-Biapigenin treatment at 100 μmol·L-1 for 24 h.D:Results of HeLa cells wound scratch assay after 50～100 μmol·L-13,8′-Biapigenin treatment,**P<0.01 vs invasion assays showed the invasion ability of HeLa cells treated with 100 μmol·L-13,8′-Biapigenin and Tetrahydroamentoflavone for 48 h,**P<0.01 vs

Fig 3 3,8′-Biapigenin inhibited OGT in an enzyme-based assayA:Inhibitory effect of 3,8′-Biapigenin and Tetrahydroamentoflavone on OGT activity by using HPLC method;B:3,8′-Biapigenin inhibited OGT activity in a dose-dependent manner.

3 討論

針對(duì)腫瘤的研究表明，腫瘤細(xì)胞糖基化修飾的異常是腫瘤的分子特征之一。這種改變通常表現(xiàn)為相關(guān)糖基轉(zhuǎn)移酶及其調(diào)控的特征性糖鏈結(jié)構(gòu)的表達(dá)改變。蛋白質(zhì)的O-GlcNAc糖基化修飾機(jī)制類似于磷酸化，發(fā)生在蛋白質(zhì)的絲氨酸和蘇氨酸殘基上。這種糖基化方式存在于所有高等真核生物的胞核和胞質(zhì)中，對(duì)胞內(nèi)的多種信號(hào)通路具有調(diào)節(jié)作用，并與幾乎所有細(xì)胞生理過(guò)程和包括腫瘤在內(nèi)的多種重大疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。由于底物蛋白眾多，O-GlcNAc糖基化修飾被發(fā)現(xiàn)參與包括侵襲轉(zhuǎn)移在內(nèi)的多種腫瘤生物學(xué)行為的調(diào)控。與受到數(shù)百個(gè)激酶調(diào)控的磷酸化修飾不同，胞內(nèi)僅有一種OGT酶調(diào)控這一修飾過(guò)程。OGT的功能是將糖基供體UDP-GlcNAc的N乙酰葡糖胺部分共價(jià)連接到蛋白質(zhì)上。因此，抑制OGT的活性將能夠調(diào)控胞內(nèi)蛋白的O-GlcNAc修飾。

本文通過(guò)基于結(jié)構(gòu)的分子對(duì)接方法，分析了多個(gè)已報(bào)道的OGT天然產(chǎn)物抑制劑四氫穗花杉雙黃酮的類似物與OGT的結(jié)合能，這些化合物親和力各異，其中3,8′-聯(lián)芹菜苷元具有優(yōu)于四氫穗花杉雙黃酮的結(jié)合能和體外OGT抑制活性，故選取該分子作為OGT抑制劑候選分子。通過(guò)分子動(dòng)力學(xué)優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)3,8′-聯(lián)芹菜苷元能夠與受體OGT的底物結(jié)合口袋形成5個(gè)氫鍵相互作用，并與周?chē)?個(gè)氨基酸殘基形成范德華力網(wǎng)。相比于文獻(xiàn)報(bào)道的四氫穗花杉雙黃酮與OGT形成的3個(gè)氫鍵作用力外，3,8′-聯(lián)芹菜苷元還具備額外4個(gè)穩(wěn)定的氫鍵相互作用。這些相互作用將有利于3,8′-聯(lián)芹菜苷元穩(wěn)定作用于OGT的活性口袋。OGT無(wú)細(xì)胞反應(yīng)體系抑制活性結(jié)果表明，3,8′-聯(lián)芹菜苷元抑制OGT所需的IC50值低于四氫穗花杉雙黃酮，HPLC法結(jié)果中也得到了驗(yàn)證，這些結(jié)果與分子對(duì)接和動(dòng)力學(xué)優(yōu)化結(jié)果相符。此外，3,8′-聯(lián)芹菜苷元表現(xiàn)出較好的細(xì)胞內(nèi)OGT抑制活性。ConA和VVL凝集素印跡結(jié)果說(shuō)明，3,8′-聯(lián)芹菜苷元在抑制OGT的同時(shí)沒(méi)有對(duì)其它糖基轉(zhuǎn)移酶活性造成明顯影響，N-聚糖和O-聚糖修飾沒(méi)有明顯變化，證明3,8′-聯(lián)芹菜苷元具有較少的脫靶效應(yīng)。文獻(xiàn)報(bào)道，OGT催化的O-GlcNAc修飾參與多種腫瘤細(xì)胞遷移侵襲過(guò)程[5]。細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3,8′-聯(lián)芹菜苷元對(duì)OGT活性的抑制能夠明顯抑制HeLa細(xì)胞的遷移和侵襲過(guò)程，再次證明3,8′-聯(lián)芹菜苷元具有細(xì)胞內(nèi)的抑制活性，并影響O-GlcNAc修飾參與的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程。

綜上，3,8′-聯(lián)芹菜苷元通過(guò)與OGT底物口袋結(jié)合，抑制細(xì)胞內(nèi)OGT酶活和胞內(nèi)蛋白的O-GlcNAc修飾，進(jìn)一步降低腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲潛能。這些結(jié)果為OGT小分子抑制劑和O-GlcNAc修飾功能的研究提供了參考，為治療腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)研究提供了相關(guān)工具，但3,8′-聯(lián)芹菜苷元抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。