痰熱清注射液對(duì)慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者外周血單核細(xì)胞Toll樣受體及下游細(xì)胞因子的影響

馮海先，張玉鳳，王承楠

(1 呼和浩特市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，呼和浩特 010010；2 呼和浩特市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，呼和浩特 010010)

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)屬于一類常見的呼吸系統(tǒng)疾病，其病程較長(zhǎng)，且易反復(fù)發(fā)作[1]。吸煙是發(fā)病的主要原因，煙齡較長(zhǎng)者支氣管的上皮纖毛會(huì)縮短，且形態(tài)會(huì)變得無(wú)規(guī)則，進(jìn)而使纖毛運(yùn)動(dòng)出現(xiàn)障礙，局部抵抗能力下降，肺泡吞噬細(xì)胞功能與滅菌效果削弱，部分患者可出現(xiàn)支氣管痙攣，氣道阻力大幅度增加[2]。尤其是慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD)，在此期間，COPD的發(fā)作具備氣流受限且無(wú)法逆轉(zhuǎn)的特性，嚴(yán)重者可危及生命，亟待采取科學(xué)有效的治療[3-4]。臨床以往治療多選擇抗生素及止咳化痰藥物，但效果欠佳。本研究探討常規(guī)對(duì)癥治療聯(lián)合痰熱清注射液對(duì)AECOPD的療效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月～2019年12月本院收治的66例AECOPD患者進(jìn)行研究，根據(jù)分層隨機(jī)化原則將患者分成對(duì)照組和觀察組，每組33例。對(duì)照組：男性18例，女性15例；年齡42～78歲，平均年齡(52.89±4.51)歲；病程0.1～20年，平均病程(12.58±3.47)年。觀察組：男性19例，女性14例；年齡44～79歲，平均年齡(53.50±4.30)歲；病程0.1～19年，平均病程(12.60±3.44)歲。兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，組間可以進(jìn)行分析比較。本研究治療過程符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批號(hào)：20170212)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：① 均經(jīng)過臨床檢查確診為COPD，且處在急性加重期者[5]。② 年齡20～80歲者。③ 能配合完成研究者。④ 取得患者及其家屬知情同意并簽署有關(guān)書面說明者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并消化道出血、腦出血者。② 急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)Ⅲ期或需要腎臟替代治療者。③ 嚴(yán)重的胃腸功能障礙者。④ 其他部位存在感染者。⑤ 對(duì)本研究所用藥物過敏者。⑥ 存在精神類疾病者。⑦ 依從性差或治療中不能堅(jiān)持者。

1.2 治療方法

所有患者入院后均予以止咳、平喘、化痰以及吸氧等常規(guī)治療。

對(duì)照組予以2 L/min低流量氧氣吸入，給予注射用氨溴索(天津藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20041473，規(guī)格：15 mg)，將30 mg注射用氨溴索加入100 ml 0.9%氯化鈉溶液中靜脈滴注，bid；氨茶堿注射液(太極西南藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H50021920，規(guī)格：0.1 g)，0.1～0.3 g/次。7天為1個(gè)療程，持續(xù)治療2個(gè)療程。用藥期間加強(qiáng)觀察患者是否出現(xiàn)不良反應(yīng)。

觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用痰熱清注射液(上海凱寶藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20030054，規(guī)格：10 ml/支)，其中藥成分包括連翹、金銀花、山羊角、熊膽粉、黃芩，取20 ml痰熱清注射液加入5%葡萄糖溶液共250 ml中，充分搖勻后靜脈滴注，qd，7天為1個(gè)療程，用藥期間加強(qiáng)觀察患者是否出現(xiàn)不良反應(yīng)，2個(gè)療程后評(píng)價(jià)療效。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1療效

依據(jù)臨床療效標(biāo)準(zhǔn)，顯效：患者咳、喘、痰癥狀較急性發(fā)作期明顯改善，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均明顯改善；有效：咳、喘、痰癥狀減輕，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)改善；無(wú)效：咳、喘、痰癥狀無(wú)改善，甚至逐漸加重，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)未改善甚至加重[6]?？傆行?(顯效例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.3.2肺功能指標(biāo)

由院內(nèi)專業(yè)醫(yī)師采用峰流速儀[春妙(上海)醫(yī)療器械有限公司]測(cè)定兩組患者呼氣流量峰值(PEF)，采用MasterScreen PET肺功能儀(德國(guó)Jaerer公司)測(cè)量?jī)山M患者第1秒用力呼氣容積(FEV1)，均重復(fù)檢測(cè)3次，每次檢測(cè)間隔10 min，保證誤差低于5%。

1.3.3外周血單核細(xì)胞Toll樣受體(TLRs)家族Toll樣受體4(TLR4)陽(yáng)性百分率

對(duì)比治療前和治療后細(xì)胞TLR4陽(yáng)性百分率。無(wú)菌條件下取患者及正常人外周靜脈血2 ml立即注入2 ml乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)管中備用。從中取抗凝血50 μl加入流式測(cè)定管中，根據(jù)試驗(yàn)要求加入抗人Toll樣受體4(anti-human TLR4)和抗人白細(xì)胞分化抗原14(anti-human CD14)，分別用異硫氰酸熒光素(FITC)和藻紅蛋白(PE)染色標(biāo)記 20 min 后，用溶血素裂解紅細(xì)胞 10 min，以1500 r/min離心(半徑15 cm水平轉(zhuǎn)子)7 min，棄上清，加磷酸鹽緩沖液5 ml洗2遍，棄上清，加入磷酸鹽緩沖液，采用FACS Aria型流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)檢測(cè)單參數(shù)。

1.3.4下游細(xì)胞因子水平

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)水平，收集患者空腹晨血，血液在室溫下自然凝固10～20 min，離心20 min左右(2000～3000 r/min)。收集上清，使用相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒(DPC公司)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.5安全性評(píng)價(jià)

所有患者接受血常規(guī)、肝腎功能、心電圖等檢查，統(tǒng)計(jì)兩組用藥期間不良反應(yīng)發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 療效

治療2個(gè)療程后，觀察組治療總有效率(87.88%)高于對(duì)照組(63.64%)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者治療后的臨床療效比較n=33，n(%)

2.2 TLRs家族TLR4陽(yáng)性百分率和下游細(xì)胞因子水平

治療前，兩組TLR4、TNF-α、IL-8、IL-17水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。療程結(jié)束后，兩組患者各項(xiàng)指標(biāo)均較治療前有所降低，且觀察組各項(xiàng)指標(biāo)下降幅度大于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者治療前和治療后外周血單核細(xì)胞TLR4陽(yáng)性百分率及下游細(xì)胞因子水平比較

2.3 肺功能指標(biāo)

治療前，組間對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。治療后，觀察組PEF和FEV1兩項(xiàng)指標(biāo)較治療前有所好轉(zhuǎn)，且優(yōu)于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者治療前和治療后肺功能指標(biāo)變化比較

2.4 不良反應(yīng)發(fā)生率

用藥期間，兩組不良反應(yīng)發(fā)生率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.817)。見表4。

表4 兩組患者治療期間不良反應(yīng)發(fā)生率比較 n=33，n(%)

3 討論

COPD的發(fā)病率日漸攀升，尤其AECOPD出現(xiàn)反復(fù)急性發(fā)作和病情加重，其痰液會(huì)呈現(xiàn)膿性狀態(tài)，部分患者可伴隨發(fā)熱等炎癥反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致呼吸衰竭甚至死亡等，治療時(shí)具有一定難度，對(duì)患者生命安全產(chǎn)生嚴(yán)重威脅[7]。

中醫(yī)認(rèn)為COPD屬“痰飲”“喘證”“咳嗽”等范疇，治療需遵循溫補(bǔ)陽(yáng)氣為原則[8]。本研究采用痰熱清注射液進(jìn)行治療，結(jié)果顯示：觀察組的治療效果更佳，且觀察組TLR4、TNF-α、IL-8、IL-17治療前和治療后各項(xiàng)指標(biāo)差值更大，改善程度大于對(duì)照組。TLR4是TLRs家族成員之一，也是脂多糖重要的模式識(shí)別受體，存在于單核吞噬細(xì)胞表面，在介導(dǎo)脂多糖引起的單核-吞噬細(xì)胞活化和釋放多種前炎癥因子中起重要作用，也是目前研究較熱的天然免疫因子[9]。TNF-α是巨噬細(xì)胞釋放的炎癥因子，在參與阻止病原菌早期炎癥反應(yīng)過程中，發(fā)揮滅菌、消炎的作用；在控制體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌過程中，TNF-α可能參與結(jié)核分枝桿菌的免疫病理過程，造成機(jī)體相關(guān)組織的損害[10]。IL-17、IL-8是一組重要的免疫活性因子，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)，可以引起一連串的炎癥介質(zhì)，對(duì)身體產(chǎn)生炎性損傷，還可以反映體內(nèi)細(xì)胞免疫的不平衡[11]。

聯(lián)用痰熱清注射液能夠改善AECOPD的炎癥反應(yīng)，主要是由于痰熱清注射液包含較多抑菌抗菌以及解毒清熱的中藥組方，并利用現(xiàn)代中藥提取技術(shù)加工而成，有著療效穩(wěn)定和質(zhì)量均一等優(yōu)點(diǎn)，其中黃芩、連翹及金銀花是抑菌抗菌和清熱解毒之良藥；山羊角、熊膽粉起著抗驚厥與降熱等效果[12]。且該方具有較多抗生素不具備的抑制病毒作用，可增強(qiáng)機(jī)體防御功能，使血氧飽和度升高，不僅能緩解 AECOPD 患者憋喘癥狀，同時(shí)對(duì)炎癥吸收和白細(xì)胞吞噬功能具有促進(jìn)作用[13]。另外，肺功能是監(jiān)測(cè)COPD患者病情發(fā)展的重要指標(biāo)。

AECOPD患者通常伴隨著FEV1/FVC及PEF水平下降，呼吸功能減弱[14]。本研究采用不同藥物治療后，觀察組PEF和FEV1兩項(xiàng)指標(biāo)較治療前有所好轉(zhuǎn)，且優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)，提示在常規(guī)對(duì)癥治療基礎(chǔ)上加用痰熱清注射液有助于改善患者的整體肺功能，可能是與痰熱清注射液能降低血清炎癥因子，改善血?dú)夥治鲋笜?biāo)有關(guān)。痰熱清注射液由黃芩、熊膽粉、山羊角、金銀花和連翹組成，黃芩味苦、性寒，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效；熊膽粉藥性與熊膽相似，味苦、性寒，藥理試驗(yàn)證明熊膽有解驚、解毒、抑菌、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘等作用[15-16]。兩者共為君藥。山羊角藥性與羚羊角相似，味苦咸、性寒，具有平肝息風(fēng)、清熱解毒等作用；金銀花味甘、性寒，有清熱解毒、宣肺化痰之功。兩藥合用可加強(qiáng)本方清熱解毒化痰之功，共為臣藥。連翹味苦、性微寒，本方取其清熱宣透作用，又可引諸藥入肺經(jīng)而為佐使藥。全方共奏清熱解毒、化痰之功效。同時(shí)痰熱清注射液還具有良好的安全性。

綜上，在AECOPD的常規(guī)對(duì)癥治療基礎(chǔ)上加用痰熱清注射液效果更佳，主要通過抑制下游細(xì)胞因子的釋放來發(fā)揮藥效，值得在臨床推廣。