顯色培養(yǎng)基篩查無乳鏈球菌及藥物敏感性分析

耿伏生，蘇麗霞，馮寶芹

（安陽市燈塔醫(yī)院1.檢驗科；2.醫(yī)務科，河南 安陽 455000）

近些年來，隨著醫(yī)療技術水平的提高，孕產(chǎn)婦越來越重視分娩質(zhì)量和安全，按照美國CDC《圍產(chǎn)期B 族鏈球菌感染篩查及防治指南(2010)》的推薦，對于每個即將分娩的孕產(chǎn)婦都應進行無乳鏈球菌篩查，防范可能存在的風險，減少對孕產(chǎn)婦和新生兒的危害。 對于無乳鏈球菌的篩查，實驗室常用的方法有顯色培養(yǎng)基法、普通培養(yǎng)法、免疫層析法、PCR 法[1]等，陽性檢出率各有差異，各地報道也有不同。 由于細菌培養(yǎng)為診斷感染性疾病的 “金標準”，故本實驗室著重研究顯色培養(yǎng)基法與普通培養(yǎng)法的無乳鏈球菌陽性檢出率情況。

無乳鏈球菌為觸酶陰性的革蘭陽性球菌，顯微鏡觀察成對或鏈狀排列，Lancefield 血清分型為B 群，所以又稱 B 族鏈球菌[2]（GBS），接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，置于5～10%CO2條件下35℃培養(yǎng)24～48h 可有狹窄的 β 溶血環(huán)，1887 年被報道第一次獲得分離[3]，健康人群攜帶率為 15%～35%[4]，可定植于妊娠期婦女的泌尿道、腸道和生殖道[5]，易導致產(chǎn)婦感染或通過垂直傳播感染新生兒，引起新生兒敗血癥。

本研究旨在找出一種篩查陽性檢出率高的方法，并對陽性菌株進行抗生素藥物敏感性試驗，從而為臨床醫(yī)生提供可靠的治療依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2017 年1 月至2018 年1 月我院婦產(chǎn)科收治的行產(chǎn)前檢查的孕晚期孕婦，年齡在20～35 歲，隨機抽出1100 例作為研究對象。

1.2 篩查標準 依據(jù)美國疾病控制與預防中心《圍產(chǎn)期B 族鏈球菌感染篩查及防治指南(2010)》有關標準進行篩查，以顯色培養(yǎng)基法作為試驗組，以普通培養(yǎng)法作為對照組進行比較。

1.3 排除標準 嚴重的肝、腎、肺功能不全；合并凝血功能障礙以及其他血液性疾??；合并惡性腫瘤；合并言語及意識障礙。

1.4 實驗室檢查

1.4.1 方法 對送檢標本均采用顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)法和普通培養(yǎng)法，5～10%CO2條件下 35℃培養(yǎng) 24～48h。

1.4.2 試劑 無乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基和哥倫比亞血平板均由鄭州安圖綠科生物有限公司提供。

1.4.3 藥敏試驗 參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）制定的標準，使用紙片擴散法進行藥敏試驗； 質(zhì)控菌株和藥敏紙片由杭州天和生物有限公司提供。

1.4.4 樣本要求 孕35～37 周時從陰道下1/3 部取拭子或肛門取拭子標本， 置于增菌培養(yǎng)基內(nèi)立即送檢培養(yǎng)。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0 軟件進行統(tǒng)計分析，試驗組與對照組比較采用 χ2檢驗，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對照組與試驗組篩查情況比較 于孕35～37周時采集陰拭子或肛拭子立即送檢，經(jīng)微生物實驗室在嚴格質(zhì)量控制下接種于無乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基（試驗組）和哥倫比亞血瓊脂平板（對照組）上，經(jīng)48h 培養(yǎng)觀察結果，對于可疑陽性菌株進一步鑒定確證。在1100 例研究對象中，試驗組與對照組陽性檢出率分別為 8.91%（98 株）和 5.91%（65 株），兩者相比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明采用顯色培養(yǎng)基法篩查無乳鏈球菌陽性檢出率明顯高于普通培養(yǎng)法。

2.2 陽性菌株藥敏結果分析 將無乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)陽性的98 株陽性菌株轉種到哥倫比亞血瓊脂平板上繼續(xù)培養(yǎng)， 并采用K-B 法進行藥物敏感性試驗，研究表明陽性菌株對青霉素、頭孢噻肟、萬古霉素、美羅培南、替考拉寧的敏感率為100.00%，對苯唑西林的敏感率為91.00%，對左氧氟沙星、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素的耐藥率分別為 31.70%、56.00%、61.70%、85.90%， 對甲氧芐啶/磺胺甲唑的耐藥率為100.00%，見表1。

表1 98 株無乳鏈球菌藥物敏感試驗

3 討論

目前來看，國內(nèi)大多實驗室普遍采用細菌培養(yǎng)法用來篩查孕晚期無乳鏈球菌的感染情況，但普通細菌培養(yǎng)陽性檢出率極低，容易出現(xiàn)假陰性，給臨床提供不可靠的參考依據(jù)，造成大量的漏診。 而無乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基中添加了人工合成的特異性酶底物，經(jīng)無乳鏈球菌的酶解作用釋放出顯色原而顯色，無乳鏈球菌在該培養(yǎng)基上生長菌落為紅色或紫紅色，并且該培養(yǎng)基也具有一定抑制其他雜菌生長的作用，使無乳鏈球菌菌落能夠在平板上更好地生長，易于辨認及分離。 本研究通過采用顯色培養(yǎng)基法與普通培養(yǎng)法相比較，發(fā)現(xiàn)顯色培養(yǎng)基法陽性檢出率明顯高于普通培養(yǎng)法（P＜0.05），這可能由于顯色培養(yǎng)基相對于普通培養(yǎng)基具有結果直觀，且靈敏度高、特異性強的特點，便于實驗室分離病原菌，從而提高了檢出率。

無乳鏈球菌屬于條件致病菌[6]，可定植男性和女性生殖道、腸道和尿道，可經(jīng)性傳播。 成人中無乳鏈球菌感染少見，以產(chǎn)婦為主，少數(shù)情況下亦可為免疫功能低下者，如糖尿病、慢性肝功能不全、HIV 感染、惡性腫瘤、接受免疫抑制劑治療等患者。無乳鏈球菌感染在圍產(chǎn)期感染中占有重要的位置[7]，當機體微生態(tài)平衡被破壞、內(nèi)環(huán)境紊亂情況下，可發(fā)生 GBS 機會感染[8]。 可以導致產(chǎn)婦發(fā)生胎膜早破、絨毛膜炎、子宮內(nèi)膜炎、泌尿系感染、敗血癥。還可導致孕晚期流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎，還可傳播給新生兒導致敗血癥[9]，是新生兒敗血癥死亡的主要原因[10]。 嚴重影響孕婦和胎兒的生命健康。 無乳鏈球菌引起的產(chǎn)褥感染大多呈單一細菌感染，癥狀出現(xiàn)早，高熱、心動過速等。無乳鏈球菌也是引起孕婦菌血癥和傷口感染的主要致病菌，還可發(fā)生鏈球菌性肺炎、腦膜炎、肝膿腫和敗血癥等，死亡率較高，有報道其死亡率可達29%～52%。 本研究通過分析陽性菌株的藥物敏感性試驗，發(fā)現(xiàn)無乳鏈球菌對青霉素、頭孢噻肟、萬古霉素、美羅培南、替考拉寧高度敏感，對四環(huán)素、紅霉素、克林霉素耐藥，對甲氧芐啶/磺胺甲唑高度耐藥這與《指南》基本一致。 由于導致無乳鏈球菌感染的具體機制尚未明確[11]，為了減少無乳鏈球菌感染對孕產(chǎn)婦和胎兒造成嚴重的危害[12]，建議臨床醫(yī)師引起重視，把握時機，盡早篩查無乳鏈球菌，并根據(jù)抗生素藥物敏感性試驗結果，合理使用抗菌藥物。