丹參通脈膠囊對血瘀大鼠的影響

徐濤 馬淑媛 孫付軍 王桂芝

[摘要] 目的 實驗觀察丹參通脈膠囊對Wistar大鼠血小板聚集功能、組織型纖溶酶原激活劑（t-pA）及其抑制物（PAI）活性的影響，探究丹參通脈膠囊對缺血性腦血管疾病的治療機理。方法 于2009年1—4月選取Wistar大鼠48只，隨機分為4組，分別為空白對照組、丹參通脈膠囊2 g·kg-1組、丹參通脈膠囊1 g·kg-1組、血塞通片54 mg·kg-1組，每組12只，對比研究各組大鼠的血小板聚集功能;于2009年5—7月選取Wistar大鼠60只，隨機分為5組，分別為空白對照組、模型組、丹參通脈膠囊2 g·kg-1組、丹參通脈膠囊1 g·kg-1組、血塞通片54 mg/kg-1組，每組12只，對比研究各組大鼠組織纖溶酶原激活劑（t-PA）及其抑制劑（PAI）的活性。結(jié)果 運用丹參通脈膠囊的小鼠血小板聚集功能M丹參通脈膠囊2 g·kg-1組為（42.16±16.34），丹參通脈膠囊1 g·kg-1組為（49.58±20.33），均低于空白對照組（69.52±19.77）（P<0.05）。丹參通脈膠囊2 g·kg-1組和丹參通脈膠囊1 g·kg-1的小鼠t-pA活性分別為（2.11±0.62）IU/mL和（1.68±0.53）IU/mL均高于模型組的t-pA活性（0.96±0.37）IU/mL（P<0.001），其PAI活性分別為（0.21±0.11）AU/mL和（0.24±0.13）AU/mL均低于模型組的PAI活性（0.41±0.13）AU/mL（P<0.001）。結(jié)論 丹參通脈膠囊能明顯降低血小板聚集率，抑制血小板聚集功能，并能明顯增強t-PA活性、降低PAI活性，且與用藥劑量相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 丹參通脈膠囊;腦缺血;血小板聚集;t-PA;PAI

[中圖分類號] R28? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）08（c）-0004-04

[Abstract] Objective To experimentally observe the effects of Danshen Tongmai Capsules on the platelet aggregation function， tissue-type plasminogen activator （t-pA） and its inhibitor （PAI） activities in Wistar rats， and explore the effects of Danshen Tongmai Capsules on ischemia Therapeutic mechanism of sexual cerebrovascular disease. Methods From January to April 2009， 48 Wistar rats were selected and randomly divided into 4 groups， namely the blank control group， the Danshen Tongmai capsule 2 g·kg-1 group， and the Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group， Xuesaitong tablet 54 mg·kg-1 group， 12 rats in each group， to compare and study the platelet aggregation function of rats in each group; 60 Wistar rats were selected from May to July 2009， randomly divided into 5 groups： blank control group， model control group， Danshen Tongmai Capsule 2 g·kg-1 group， Danshen Tongmai Capsule 1 g·kg-1 group， and Xuesaitong Tablet 54 mg·kg-1 group， 12 rats in each group， comparative study of the activity of plasminogen activator （t-PA） and its inhibitor（PAI） in each group of rats. Results The platelet aggregation function of mice using Danshen Tongmai Capsules was （42.16±16.34） in the Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group and （49.58±20.33） in the Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group， which were lower than （69.52±19.77） in the blank control group （P<0.05）. The t-pA activity of mice in the Danshen Tongmai capsule 2 g·kg-1 group and Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group were （2.11±0.62）IU/mL and （1.68±0.53）IU/mL， respectively， which were higher than those of the model group （0.96±0.37）IU/mL（P<0.001）， the PAI activities of （0.21±0.11）AU/mL and （0.24±0.13）AU/mL were lower than those of the model group by （0.41±0.13）AU/mL （P<0.001）. Conclusion Danshen Tongmai Capsule can significantly reduce the platelet aggregation rate， inhibit platelet aggregation function， and can significantly enhance the activity of t-PA and reduce the activity of PAI， which is related to the dosage.

[Key words] Danshen Tongmai capsule; Cerebral ischemia; Platelet aggregation; t-PA; PAI

血瘀是血液循行障礙、不流暢的一種狀態(tài)，臨床可引發(fā)中風等疾病。丹參 、三七、水蛭、葛根、銀杏葉、牡丹皮、芍藥等中藥在臨床上有很好的活血化瘀作用，丹參在抗動脈粥樣硬化及治療心腦血管病方面具有重要作用，更有研究表明，水蛭能夠明顯抑制大鼠動-靜脈旁路血栓和膠原蛋白-腎上腺素誘導的小鼠體內(nèi)血栓。為了進一步揭示丹參通脈膠囊治療缺血心血管病的作用和機制，該文于2009年1—4月選取Wistar大鼠48只，隨機分為4組，分別為空白對照組、丹參通脈膠囊2 g·kg-1組、丹參通脈膠囊1 g·kg-1組、血塞通片54 mg·kg-1組，對比研究各組大鼠的血小板聚集功能; 于2009年5—7月選取Wistar大鼠60只，隨機分為5組，分別為空白對照組、模型組、丹參通脈膠囊2 g·kg-1組、丹參通脈膠囊1 g·kg-1組、血塞通片54 mg·kg-1組，對比研究各組大鼠組織纖溶酶原激活劑（t-PA）及其抑制劑（PAI）的活性。現(xiàn)報道如下。

1? 材料與方法

1.1? 實驗藥品

丹參通脈膠囊由丹參、三七、水蛭、三酮（葛根黃酮、 銀杏葉黃酮、山楂葉黃酮）、牡丹皮、芍藥等藥物組成，具有益氣活血、通經(jīng)活絡(luò)、疏肝解郁的功效， 現(xiàn)代藥理研究表明，丹參通脈膠囊具有抗血栓形成、增加腦血流量、改善微循環(huán)的藥理作用，用于治療缺血性腦血管病。該藥由山東省中醫(yī)藥研究院提供。

對照藥：血塞通片（國藥準字Z43020992）;規(guī)格：50 mg/片，口服，1～2片/次，3次/d。

其他：鹽酸腎上腺素注射液（批號：020405）。氨基甲酸乙酯（批號：010307）。

1.2? 實驗動物

Wistar大鼠：購自山東大學醫(yī)學院實驗動物中心（合格證號：魯動質(zhì)字：第200201005號）。

1.3? 實驗試劑

t-pA、PAI試劑盒（購自紅太陽生物科技有限公司，批號：031010）。

1.4? 實驗方法

1.4.1? 對大鼠血小板聚集功能的影響? 300～350 g Wistar大鼠，48只，雌雄各半，按體重、性別均衡隨機分為4組，分別為空白對照組1 mL/100 g·ig，丹參通脈膠囊（醫(yī)院內(nèi)部協(xié)定方）2 g·kg-1、1 g·kg-1配成20%、10%的水混懸液1 mL·100 g-1·ig，血塞通片54 mg·kg-1組（陽性對照組）為血塞通片54 mg·kg-1，配成0.54%的水溶液1 mL·100 g-1·ig，每日8：00 am給藥，連續(xù)7 d，禁食12 h，末次給藥90 min后，氨基甲酸乙脂1 g·kg-1（20%溶液，1 mL·100 g-1）腹腔麻醉，剖腹，下腔靜脈取血2 mL置于防凝管中，進行血小板聚集實驗，

1.4.2? 對大鼠血漿t-pA、PAI活性的影響? 320～350 g，Wistar大鼠60只，雌雄各半，按性別、體重隨機均衡分為5組，分別為空白對照組，模型組，丹參通脈膠囊2 g·kg-1、1 g·kg-1組和血塞通片54 mg·kg-1組。給藥情況同2.1所示，給藥第6天，皮下注射鹽酸腎上腺素0.9 mg·kg-1，1 h后0℃冰水浸泡5 min，冰浴后1 h再次皮下注射同劑量鹽酸腎上腺素，給藥第7天重復(fù)第6天的操作過程，第二次造模后24 h，禁食12 h，末次給藥90 min后，氨基甲酸乙酯1 g·kg-1（20%水溶液，1 mL·100 g-1）腹腔麻醉，剖開腹腔，暴露下腔靜脈，取2 mL血以0.109 mol·L-1枸櫞酸鈉1∶9體積抗凝，-4～8℃， 3 000 rpm，離心10 min，分離上清液（血漿），發(fā)色底物法測定t-pA、PAI活性。

2? 結(jié)果

2.1? 對大鼠血小板聚集功能的影響

實驗結(jié)果提示：與空白對照組相比，給藥組血小板聚集率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。該品能降低血小板聚集率，抑制血小板聚集功能，見表1。

2.2? 對大鼠血漿t-pA、PAI活性的影響

實驗結(jié)果提示：與模型組相比，給藥組高、中劑量組可以非常明顯地提高t-pA活性，降低PAI活性，與空白對照組比較則差異無統(tǒng)計學意義，丹參通脈膠囊1 g·kg-1組和血塞通片54 mg·kg-1組與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），同時與空白對照組比較也差異有統(tǒng)計學意義。該品能提高血瘀模型大鼠的t-pA活性，降低PAI活性，且達到正常水平，而降低纖溶酶原含量。見表2。

3? 討論

丹參通脈膠囊在降低血小板聚集率方面效果顯著，且有獨特優(yōu)勢。運用丹參通脈膠囊2 g·kg-1的小鼠血小板聚集功能M為（42.16±16.34），丹參通脈膠囊1 g·kg-1的小鼠血小板聚集功能M為（49.58±20.33），空白對照組的小鼠血小板聚集功能M為（69.52±19.77），運用血塞通的小鼠血小板聚集功能M為（65.96±17.91），丹參通脈膠囊對小鼠血小板聚集率有較好的降低作用，且優(yōu)勢顯著，并且高劑量的丹參通脈膠囊療效要更好。朱志平等[1]研究通脈益智方對大鼠血小板聚集率的影響，結(jié)果空白對照組血小板聚集功能M 為（40.18±20.72），通脈益智方組血小板聚集功能M為（29.25±23.9）（P<0.05），與該研究結(jié)論一致。運用丹參通脈膠囊2 g·kg-1的小鼠t-pA活性（2.11±0.62）IU/mL，運用丹參通脈膠囊1 g·kg-1的小鼠t-pA活性（1.68±0.53） IU/mL，均明顯高于模型組的（0.96±0.37）IU/mL（P<0.001），且丹參通脈膠囊2 g·kg-1的小鼠t-pA活性明顯高于血塞通組（1.50±0.47） IU/mL（P<0.01）;運用丹參通脈膠囊2 g·kg-1的小鼠PAI活性（0.21±0.11）AU/mL，運用丹參通脈膠囊1 g/kg的小鼠PAI活性（0.24±0.13）AU/mL，均明顯低于模型組的（0.41±0.13）AU/mL（P<0.001），且丹參通脈膠囊2 g·kg-1的小鼠PAI活性明顯低于血塞通組（0.25±0.09）AU/mL（P<0.05）。從這個結(jié)果中可以看出，丹參通脈膠囊能很好地提高血瘀模型大鼠的纖溶酶原激活劑t-pA活性，降低纖溶酶原抑制劑PAI活性。高劑量丹參通脈膠囊可使血瘀模型大鼠的t-pA活性達到正常水平。王海麗等[2]以茜草炭治療急性血瘀模型大鼠，結(jié)果模型組大鼠t-PA值為（10.53±2.04）μg/L，PAI值為（851.62 ±78.97）ng/L，茜草炭正丁醇部位組大鼠t-PA值為（13.53±1.05）μg/L，PAI值為（586.17±42.32）ng/L，證明茜草炭正丁醇部位能顯著提高血瘀模型大鼠t-pA活性、降PAI活性（P<0.05），與該研究結(jié)論一致。

丹參通脈膠囊由丹參、三七、水蛭、三酮（葛根黃酮、 銀杏葉黃酮、山楂葉黃酮）、牡丹皮、芍藥等藥物組成。丹參在抗動脈粥樣硬化及治療心腦血管病方面療效顯著，其主要作用機制在于丹參提取物的抗血小板聚集作用。體外研究結(jié)果表明[3-6]，丹參能縮短血栓長度、降低血栓重量，升高6-酮-前列腺素F1α水平，降低內(nèi)皮素、血漿血栓素B2水平，抑制膠原和二磷酸腺苷（ADP）誘導的血小板聚集，有效改善凝血功能，丹參和丹參提取物還對促進血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)、改善局部微循環(huán)具有良好療效。水蛭能抑制腎上腺素、ADP、花生四烯酸或膠原等誘導的血小板聚集，對實驗性大鼠、小鼠體內(nèi)血栓的形成有明顯的抑制作用。水蛭能降低纖溶酶原抑制劑（PAI）的活性，使纖溶酶原激活劑（t-PA）的活性提高，降低血小板黏附性[7-9]。葛根可以直接擴張腦血管以增加腦血流量，從而增加腦細胞的供血供氧以穩(wěn)定腦血管功能。葛根素可明顯改善腦梗死大鼠的神經(jīng)功能，并可改善神經(jīng)細胞凋亡。同時，葛根中有效成分葛根素可抑制D-半乳糖誘導的蛋白糖基化反應(yīng)，大豆苷可抑制腦組織中促凋亡基因表達并防止突觸體鈣超載，有效減少海馬神經(jīng)元凋亡和神經(jīng)細胞毒性損傷，均可達到保護腦神經(jīng)的功效[10-12]。銀杏葉提取物能夠抑制缺血后變異基因的表達，防止腦缺血再灌注的神經(jīng)元細胞衰老、損傷和死亡。黃酮類物質(zhì)可以減少炎癥因子產(chǎn)生，促進ATP的合成，抑制鈣離子內(nèi)流，清除自由基，減少神經(jīng)細胞的凋亡，對腦血管和神經(jīng)系統(tǒng)具有較好的保護作用[13-14]。山楂葉也有很好的抗凝抑制血小板聚集作用。其在體內(nèi)、外均能非常顯著地抑制膠原或ADP誘導的兔血小板聚集。此外，靜脈注射山楂葉制劑30 min后，全血比粘度顯著下降。從中醫(yī)角度講丹參通脈膠囊可以益氣活血、通經(jīng)活絡(luò)、疏肝解郁。從現(xiàn)代藥理分析丹參通脈膠囊可以抗凝、抑制血小板、改善循環(huán)、抗血栓。國內(nèi)外研究資料表明[15-16]腦血管病的發(fā)病與組織型纖溶酶原激活劑（t-pA）及組織型纖溶酶原抑制物（PAI）活性變化密切相關(guān)。t-Pa、PAI的動態(tài)平衡維持血管完整性和疏通血流通道。

綜上所述，該實驗表明丹參通脈膠囊可以抑制血小板聚集，提高t-pA活性，降低PAI活性，從而驗證了丹參通脈膠囊抗栓、抗血小板聚集的理論。

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（收稿日期：2020-05-28）