RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞的表達(dá)及與IL-2、IL-8、IL-10的相關(guān)性

劉彩麗 廖翠樂 熊長(zhǎng)虹

【摘要】 目的：觀察小兒難治性支原體肺炎（refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia， RMPP）患兒支氣管肺泡灌洗液（BALF）中巨噬細(xì)胞及IL-2、IL-8、IL-10水平的表達(dá)。方法：選取2014年10月-2018年10月在本院兒科住院治療的94例RMPP患兒為RMPP組，選取同期輕型肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）60例為MPP組及60例行支氣管異物取出術(shù)兒童為對(duì)照組。ELISA檢測(cè)BALF中IL-2、IL-8、IL-10水平，蘇木精-伊紅染色下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞百分比。比較各組肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平及巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)，分析RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與IL-2、IL-8、IL-10水平的相關(guān)性。結(jié)果：三組患兒BALF中IL-2、IL-8、IL-10含量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。RMPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對(duì)照組及MPP組，IL-10含量低于對(duì)照組及MPP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;MPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對(duì)照組，IL-10含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)為（32.2±6.3）%，高于RMPP組的（27.6±5.7）%，低于對(duì)照組的（66.1±7.9）%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;RMPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與IL-10水平呈正相關(guān)（P<0.05），與IL-2、IL-8水平均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：RMPP患兒BALF中的IL-2、IL-8含量升高，IL-10含量降低，與巨噬細(xì)胞百分比關(guān)系密切。

【關(guān)鍵詞】 小兒難治性支原體肺炎 肺泡灌洗液 巨噬細(xì)胞 IL-2 IL-8 IL-10

[Abstract] Objective： To observe the expression of macrophages and IL-2， IL-8 and IL-10 in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） of children with refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia （RMPP）. Method： A total of 94 patients with RMPP hospitalized in our hospital from October 2014 to October 2018 were selected as the RMPP group. Sixty cases of mycoplasma pneumoniae pneumonia （MPP） in the same period were selected as MPP group and 60 children undergoing bronchial foreign body removal were selected as the control group. The levels of IL-2， IL-8 and IL-10 in BALF were detected by ELISA. The percentage of macrophages was counted by hematoxylin eosin staining. The levels of IL-2， IL-8， IL-10 and macrophage count in BALF of each group were compared， and the correlation between macrophage count and IL-2， IL-8 and IL-10 levels were analyzed. Result： There were significant differences in the contents of IL-2， IL-8 and IL-10 in BALF among the three groups （P<0.05）. The contents of IL-2 and IL-8 in BALF of RMPP group were higher than those of control group and MPP group， and the content of IL-10 was lower than those of control group and MPP group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The contents of IL-2 and IL-8 in BALF of MPP group were higher than those of control group， and the content of IL-10 was lower than that of control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of macrophages in BALF of MPP group was （32.2±6.3）%， which was higher than that of RMPP group （27.6±5.7）% and lower than that of control group （66.1±7.9）%， the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of macrophages in BALF of RMPP group was lower than that of control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were significant differences in the number of macrophages in BALF among the three groups （P<0.05）. The number of macrophages in BALF was positively correlated with IL-10 （P<0.05）， and negatively correlated with IL-2 and IL-8 （P<0.05）. Conclusion： The content of IL-2 and IL-8 in BALF of RMPP children increased， while the content of IL-10 decreased， which was closely related to the percentage of macrophages.

[Key words] Refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia in children Alveolar lavage fluid Macrophages IL-2 IL-8 IL-10

First-authors address： Maternity and Child Care Hospital of Qingyuan， Qingyuan 511500， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.27.011

小兒難治性支原體肺炎（Refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia， RMPP）是兒童常見重癥肺炎，進(jìn)展迅速，出現(xiàn)多器官功能衰竭，病死率高[1-2]。支氣管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid， BALF）細(xì)胞學(xué)檢查可以直接獲取肺泡炎癥細(xì)胞，是研究肺炎病理生理最為有效的方法。研究表明，支原體肺炎患者BALF中性粒細(xì)胞升高、巨噬細(xì)胞降低[3]。IL-2、IL-8、IL-10作為臨床常用的炎性因子，研究證實(shí)，重癥肺炎患者外周血中存在各種炎性因子水平的升高[4]。但RMPP患兒BALF中巨噬細(xì)胞、炎性因子水平兩者的關(guān)系尚不清楚。鑒于此，筆者觀察了RMPP患兒BALF中巨噬細(xì)胞百分比、炎性因子IL-2、IL-8、IL-10的水平，并與正常兒童、輕型肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）對(duì)比，希望為RMPP的診治提供思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年10月-2018年10月在本院兒科住院治療的94例RMPP患者為RMPP組。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡2～14歲;RMPP符合《兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];依從性好，可以配合臨床治療。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有肺結(jié)核、支氣管哮喘、醫(yī)院獲得性肺炎及嚴(yán)重營養(yǎng)不良、免疫功能低下。選取同期輕型MPP 60例為MPP組及60例行支氣管異物取出術(shù)兒童為對(duì)照組。患兒家屬均對(duì)本研究知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 所有患兒術(shù)前完善各項(xiàng)檢查，禁飲食，予以經(jīng)纖維支氣管鏡檢查或支氣管肺泡灌洗術(shù)，根據(jù)術(shù)前胸部CT檢查明確病變部位，2%利多卡因局部麻醉，探查各支氣管段無病變后，將支氣管鏡放置于病變肺段入口處，溫生理鹽水反復(fù)灌洗3次以上，總量<2 mL/kg。負(fù)壓回收大于30%灌洗液，退鏡。回收的灌洗液無菌紗布過濾，標(biāo)本分為2份，第一份標(biāo)本4 ℃下500 r/min離心5 min，沉淀送細(xì)胞學(xué)檢查;第二份標(biāo)本4 ℃下500 r/min離心5 min，取上清液放于離心管中進(jìn)行炎性因子檢查。

1.2.2 灌洗液巨噬細(xì)胞檢測(cè) 取灌洗液標(biāo)本，4 ℃下500 r/min離心5 min，留取沉淀，涂片，烘干甲醇固定，干燥后Wright-Giemsa染色10 min，37 ℃恒溫箱烘干，普通光學(xué)顯微鏡選擇500個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞百分比。

1.2.3 灌洗液IL-2、IL-8、IL-10的檢測(cè) 取灌洗液標(biāo)本，4 ℃下500 r/min離心5 min，取上清液，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定IL-2、IL-8及IL-10水平。試劑盒由美國DSL公司提供，嚴(yán)格按說明書步驟進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較各組肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平;（2）比較各組肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù);（3）分析RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與IL-2、IL-8、IL-10水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，方差齊者采用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊采用Dunnetts T3檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。Spearman分析巨噬細(xì)胞百分率與IL-2、IL-8、IL-10水平的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 三組患者的性別、年齡、身高及體重比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 三組肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平比較 三組患兒BALF中IL-2、IL-8、IL-10含量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.59、23.12、19.46，P=0.00、0.00、0.00）。RMPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對(duì)照組及MPP組，IL-10含量低于對(duì)照組及MPP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;MPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對(duì)照組，IL-10含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3 各組肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 MPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)為（32.2±6.3）%，高于RMPP組的（27.6±5.7）%，低于對(duì)照組的（66.1±7.9）%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;RMPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=9.42，P=0.02）。

2.4 RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與IL-2、IL-8、IL-10水平相關(guān)性分析 RMPP患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與IL-10水平呈正相關(guān)（rs=0.793，P=0.003），與IL-2、IL-8水平均呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.823、-0.917，P=0.001、0.001），見表3。

3 討論

近年來RMPP發(fā)病率逐年升高，引起了臨床醫(yī)師的重視。RMPP病程遷延，發(fā)展迅速，導(dǎo)致呼吸衰竭以及其他系統(tǒng)受損，死亡率高，為目前臨床中常見的急危重癥之一[6]。因此早期預(yù)測(cè)RMPP并予以積極治療，成為保障患兒生命安全的關(guān)鍵。但此方面內(nèi)容并未引起臨床醫(yī)師足夠重視，關(guān)于RMPP預(yù)測(cè)的報(bào)道較少，該研究領(lǐng)域尚存在一定的不足。細(xì)胞因子是由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌的一種物質(zhì)，可以與細(xì)胞膜特定受體結(jié)合，傳遞特定信號(hào)，從而調(diào)控T、B淋巴細(xì)胞，在體液、細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要的作用。CD4+T細(xì)胞可分為Th1、Th2兩種亞群。Th1細(xì)胞主要在細(xì)胞免疫中發(fā)揮作用，輔助細(xì)胞毒性T細(xì)胞分化，參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)，分泌IL-1、IL-2、IL-8、IFN-γ等;Th2細(xì)胞在體液免疫中發(fā)揮作用，可分泌IL-4、IL-6、IL-10等[7-9]。

目前普遍認(rèn)為，遲發(fā)型超敏反應(yīng)在MPP中起到至關(guān)重要的作用。有研究表明，IL-2可以引起淋巴細(xì)胞向周圍組織浸潤，巨噬細(xì)胞的富集[10]。IL-8是由巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌，可引起中性粒細(xì)胞的聚集[11]。研究證實(shí)，肺炎支原體感染患者血清IL-8水平升高，IL-8在肺炎支原體病理改變中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[12]。另外研究發(fā)現(xiàn)，RMPP患者血清IL-4、IL-10水平均高于正常人群，提示Th2細(xì)胞在肺炎支原體感染中發(fā)揮重要的作用[13]。IL-10可以抑制細(xì)胞分泌功能，抗炎能力強(qiáng)，減輕炎癥因子對(duì)人體的損傷。但隨著IL-10含量的增加，IL-10抑制免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致病情惡化。有學(xué)者認(rèn)為，IL-10作為一種抗炎細(xì)胞因子，能調(diào)節(jié)T細(xì)胞比例，控制炎癥反應(yīng)強(qiáng)度，含量增加提示支氣管肉芽組織增生或黏膜出血壞死得到抑制[14]。另有研究表明，IL-10可以抑制Th1細(xì)胞及單核細(xì)胞，抑制IL-6、TNF-α、IL-8促炎因子的釋放[15-16]。本次研究筆者觀察了RMPP患者BALF中IL-2、IL-8及IL-10含量，結(jié)果表明RMPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對(duì)照組及MPP組，IL-10含量低于對(duì)照組及MPP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;MPP組患兒BALF中IL-2、IL-8含量均高于對(duì)照組，IL-10含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這提示BALF中細(xì)胞因子可用于初步評(píng)價(jià)病情嚴(yán)重程度，進(jìn)而簡(jiǎn)化臨床預(yù)后預(yù)測(cè)工作，為治療途徑探索提供指導(dǎo)依據(jù)。

正常人肺泡灌洗液中細(xì)胞分類依次為單核/巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞，肺泡灌洗液中各細(xì)胞數(shù)量的改變與肺部疾病有關(guān)。細(xì)菌進(jìn)入肺部后，首先肺泡巨噬細(xì)胞聚集、浸潤，識(shí)別并吞噬病菌，呈遞抗原給淋巴細(xì)胞，激活人體免疫功能，巨噬細(xì)胞呈遞抗原，吞噬壞死細(xì)胞，產(chǎn)生多種炎性因子，既是啟動(dòng)細(xì)胞又是細(xì)胞因子的靶點(diǎn)，在病情進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[17-18]。本研究結(jié)果表明，MPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)高于RMPP組，低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;RMPP組患兒肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞數(shù)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這與其他人的研究結(jié)果基本一致[19-20]。

但此次入選樣本量較小，隨訪時(shí)間不長(zhǎng)，故有待于增加樣本量，進(jìn)一步研究其中的關(guān)系予以證實(shí)其對(duì)于改善RMPP的預(yù)后及確切機(jī)制，為指導(dǎo)臨床治療提供參考。綜上所述，RMPP患者BALF中IL-2、IL-8及IL-10含量與MPP患兒存在差別，在臨床診斷方面上具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

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（收稿日期：2020-03-12） （本文編輯：姬思雨）