抗癌性中藥材蛇莓、無花果、蒲公英脂肪酸組成研究

冉乾鴻，姜 波，譚凱升，羅 藝，劉月洋，徐志芊

（大連民族大學生命科學學院，遼寧大連 116600）

南方降雨多且氣候溫和，適合動植物的生長，因此自然資源極為豐富，特別是中藥材種類多不勝數(shù)。平時經常接觸到的一些常見的植物或者水果在中藥配方中都頻繁出現(xiàn)。本研究選用的中藥材都是南方普遍存在的，同時都具有抗癌性。經檢測，無花果的葉子、果實及乳汁中均含有不同成分的抗癌性元素，如補骨脂素、苯甲醛、佛手柑內酯、多糖和硒等抗癌活性物，有研究表明，能提高人體的免疫力、有抑制4 種癌細胞發(fā)生發(fā)展的功效，故有人稱其為“抗癌斗士”[1]。蛇莓的根、莖、葉均可入藥，常用于臨床醫(yī)治多種熱病驚癇、咳嗽吐血、咽喉腫痛、疔瘡癰腫、蛇蟲咬傷、濕疹、痢疾及燙火傷等。近年來發(fā)現(xiàn)了蛇莓有顯著的抗腫瘤活性[2-3]，從而引起國內外學者的注意。蒲公英作為臨床治療研究常用的中草藥，其藥味苦甘、性寒,無毒，具有消腫散結、止痛散淤、通乳、利尿通淋、通便胃、保肝利膽、增強免疫和防癌抗衰等功效[4]。

這3 種中藥材都具有抗癌性，近年來才開始有關方面的研究。當前對其脂肪酸組成與其藥用成分價值的研究極少。因此，本研究分別對蛇莓、無花果、蒲公英的脂肪酸進行分析和比較，通過所得的數(shù)據(jù)來確定其脂肪酸的組成。GC－MS 法將色譜法的分離能力與質譜法的定性能力相結合，由色譜柱對各組分分配能力不同而對組分進行分離，同時利用不同離子在電磁場的運動行為不同而進行分離相結合，具有高靈敏度、定性準確、分析快速的優(yōu)點[5]。

1 試驗方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑。石油醚、甲醇、氫氧化鉀、三氟化硼-乙醚溶液等試劑，分析純：正己烷，優(yōu)級純。

1.1.2 儀器。GCMS：QP2010 plus 氣相色譜-質譜聯(lián)用儀，日本島津公司；氣相色譜部GC-2010，AOC-20i 自動進樣器，日本島津公司；RE52CS 型旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；恒溫水浴鍋，鞏義市英峪予華儀器廠；BSA1245 型分析天平（萬分之一感量），賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；DHG-9036A 型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海精宏實驗設備有限公司；250mL 索氏提取器，上海豫明儀器有限公司生產；蛇形冷凝管，上海豫明儀器有限公司生產。

1.2 中藥材的脂肪酸的測定

1.2.1 樣品處理。試驗步驟參照姜波等[6]論文內容進行，中藥材蛇莓、無花果、蒲公英采購于貴州銅仁藥店。首先將3 份樣品在70℃的烘箱中烘干，干燥后分別放入研磨機粉碎成粉末，然后將已粉碎的樣品分別過60 目篩，并放入袋中密封儲存。

1.2.2 中藥材油脂的提取。精確稱取干燥粉碎后3 種中藥材樣品各10g（精確至0.0001g）于索氏提取器中，加入180mL 石油醚（30～60℃），在42℃恒溫水浴回流6h，在37℃（水浴溫度）下蒸發(fā)至無溶劑，然后在60℃水浴中使溶劑完全蒸發(fā)，得到蛇莓油脂、無花果油脂和蒲公英油脂。

1.2.3 油樣品甲酯化。分別精確量取0.2mL 已提取的3種中藥材油脂，分別放入3 個10mL 塞管中，分別添加2.0mL 5%氫氧化鉀甲醇溶液，立即搖勻。將裝好反應溶液的塞管放入60℃恒溫水浴中反應30min，待冷卻至室溫，加14%三氟化硼甲醇溶液1.0mL 至塞管，搖勻。置60℃恒溫水中3min，然后冷卻至室溫，加入正己烷2mL，搖勻。靜置完成后，依次取上層溶液進行GC-MS 分析。

1.2.4 氣相色譜-質譜條件。氣相色譜條件：rxi-5si1ms毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；控制程序連續(xù)升溫，初始工作為溫度150℃，保持1min，以12℃/min 升至200℃，保持20min，以15℃/min 升至230℃，保持45min；進樣溫度250℃；柱溫180℃，進樣量1μL；載氣為高純氦氣，柱流速為1mL/min。質譜條件：離子源為EI 源，電力電壓參數(shù)70eV，離子源溫度200℃，接口端溫度230℃，溶劑延遲1.6min，質量掃描控制范圍40.00～600.0m/z。

1.2.5 3 種中藥材油脂脂肪酸測定及相對含量的計算。通過氣相色譜-質譜聯(lián)用儀來測定3 種中藥材油中的脂肪酸組成，采用GC-MS solution 工作站對植物油中的脂肪酸進行定性分析，以確定蛇莓、無花果和蒲公英的脂肪酸類型。然后用歸一化法計算脂肪酸的相對含量。

2 試驗結論

2.1 3 種中藥材的得油率

表1 3 種中藥材得油率

2.2 3 種中藥材的脂肪酸甲酯總離子流圖

圖1 蛇莓的脂肪酸甲酯總離子流圖

圖2 蒲公英的脂肪酸甲酯總離子流圖

圖3 無花果的脂肪酸甲酯總離子流圖

表2 蛇莓中所含脂肪酸種類及各種脂肪酸相對含量

以氣相色譜-質譜聯(lián)用儀檢測3 種中藥材甲酯化的油脂，通過GC-MS solution 工作站解析譜圖，確定各樣品油脂中脂肪酸種類和相對含量。3 種中藥材的總離子流圖分別見圖1、2、3。

2.3 脂肪酸相對含量計算公式

根據(jù)歸一化方法計算分析3 種樣品中各種脂肪酸的相對含量，按如下公式計算：

相對含量（%）=一種脂肪酸甲酯峰面積/各種脂肪酸甲酯峰面積之和×100。

2.4 結果與討論

由表2 可知，通過索氏提取法提取蛇莓、蒲公英、無花果中的油脂，其得油率分別為0.91%、0.29%、0.69%，其中蛇莓的得油率最高，蒲公英的得油率最低。

表3 蒲公英中所含脂肪酸種類及各種脂肪酸相對含量

表4 無花果中所含脂肪酸種類及各種脂肪酸相對含量

由表2 得，蛇莓油脂中共分離出14 種脂肪酸，其中主要的脂肪酸成分8,11-十八碳二烯酸（55.102%）、8-十八烯酸（17.623%）、11-油酸（12.691%）、硬脂酸（9.307%），主要成分是不飽和脂肪酸。

由表3 得，蒲公英油脂中共分離出14 種脂肪酸，其中主要的脂肪酸成分11-油酸（31.710%）、8,11-十八碳二烯酸（27.020%）、9,12,15-亞麻酸（8.207%）、硬脂酸（7.651%），主要成分是不飽和脂肪酸。

由表4 得，無花果油脂中分離出14 種脂肪酸，其中主要脂肪酸成分為棕櫚酸（8.889%）、8,11-十八碳二烯酸（45.815%）、9,12,15-亞麻酸（25.925%）、8-十八烯酸（9.206%）、硬脂酸（5.692%），主要成分是不飽和脂肪酸。

3 種中藥材中一共含有脂肪酸21 種，主要幾種為棕櫚酸、8,11-十八碳二烯酸、9,12,15-亞麻酸、8-十八烯酸、硬脂酸，均為不飽和脂肪酸，是人體重要的營養(yǎng)物質，是人體必需的脂肪酸，也是構成人體不飽和脂肪的脂肪酸，由此可見不飽和酸對人類的重要性，同時表明它與許多疾病密切相關。

目前有很多研究表明不飽和脂肪與許多疾病密切相關，流行病學研究發(fā)現(xiàn)多不飽和脂肪酸和癌癥間有相互關系；主要為n-3 多不飽和脂肪酸有抗癌作用，而N-6 多不飽和脂肪酸對癌癥只有促進作用[7]。通過這3種中藥材的脂肪酸的組成及其相對含量分析，表明這3 種中藥材對抗癌都有一定的積極治療作用，有效成分可能是多不飽和脂肪酸。