氣相色譜法測(cè)定油酸聚烴氧酯中脂肪酸的組成

張錦琳，張 玫，袁耀佐*，李宏麗，王保成江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，南京 0009，南京威爾化工有限公司，南京 500

氣相色譜法測(cè)定油酸聚烴氧酯中脂肪酸的組成

張錦琳1，張 玫1，袁耀佐1*，李宏麗2，王保成2
1江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，南京 210009，2南京威爾化工有限公司，南京 211500

目的：建立可同時(shí)測(cè)定藥用輔料油酸聚烴氧酯中油酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸等7種脂肪酸含量的方法。方法：采用毛細(xì)管氣相色譜法，石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），柱溫以2℃·min-1的速率從170℃升溫至230℃，維持10 min，檢測(cè)器為FID，溫度為250℃，進(jìn)樣口溫度250℃，分流比60∶1，試樣甲酯化處理后進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：上述7種脂肪酸在各自測(cè)定范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系，方法精密度良好，各組分的檢測(cè)限在0.86～2.32 μg·mL-1，定量限在2.54～8.21 μg·mL-1。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，已被2015版《中國(guó)藥典》采用。

氣相色譜法；油酸聚烴氧酯；脂肪酸組成

油酸聚烴氧酯（polyoxyl oleate）為非離子表面活性劑，具有優(yōu)良的乳化、潤(rùn)濕、分散、增溶等作用。在藥劑中常作為乳化劑、潤(rùn)濕劑、增溶劑，用于乳劑、乳膏劑、油膏劑、洗滌劑等的輔料；也可用于食品、化妝品工業(yè)，制造乳化食品、霜?jiǎng)?、香波等。油酸聚烴氧酯無(wú)毒，可生物降解，對(duì)皮膚和黏膜無(wú)刺激性，一般認(rèn)為是安全的，在國(guó)外使用較為普遍。

油酸聚烴氧酯是油酸和聚乙二醇的單、雙酯的混合物?？捎蓜?dòng)植物油酸環(huán)氧化或由油酸與聚乙二醇酯化得到?？赡芎杏坞x的聚乙二醇。聚合物的長(zhǎng)度為5～6個(gè)或10個(gè)環(huán)氧乙烷單位數(shù)，分別為油酸聚烴氧（5～6）酯和油酸聚烴氧（10）酯[1]。

通過(guò)測(cè)定油酸聚烴氧酯中脂肪酸的組成，既可了解油酸聚烴氧酯的結(jié)構(gòu)和組成，還可以控制原料油酸中的飽和酸、不飽和酸以及不飽和酸中的部分反式脂肪酸的含量，它們的含量組成變化對(duì)油酸聚烴氧酯的化學(xué)指標(biāo)、應(yīng)用性能、穩(wěn)定性，甚至安全性均有影響。而脂肪酸的組成是控制油酸聚烴氧酯的一項(xiàng)重要指標(biāo)，該檢查項(xiàng)在《歐洲藥典》EP8.0[1]和《美國(guó)藥典》USP37/NF32[2]中均有收載?，F(xiàn)行《中國(guó)藥典》未收載該品種，擬在2015年版收載，在標(biāo)準(zhǔn)起草過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，EP8.0版中檢測(cè)方法較USP37版的方法操作步驟少，樣品預(yù)處理時(shí)間短，為防止脂肪酸中不飽和的雙鍵被氧化，在樣品前處理過(guò)程中采用氮?dú)獗Ｗo(hù)，比較科學(xué)，因此標(biāo)準(zhǔn)中的擬定方法主要以《歐洲藥典》同品種方法為基礎(chǔ)進(jìn)行改進(jìn)。

1 材 料

1.1 儀器

島津氣相色譜儀GC-2010；火焰離子化檢測(cè)器（FID）；石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm），固定相為聚乙二醇（PEG）-20M（液膜厚度0.25 μm）。

1.2 試藥和試劑

肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、亞麻酸甲酯，純度均為99%（Sigma公司）；油酸聚烴氧（10）酯（批號(hào)：20130801、20130805、20130807），油酸聚烴氧（5-6）酯（批號(hào)：20130702、20130708、20130723），均由南京威爾化工有限公司提供。

試劑均為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

載氣為高純N2；燃?xì)鉃镠2；助燃?xì)鉃閴嚎s空氣（所有氣體均經(jīng)凈化處理）；進(jìn)樣口溫度250℃；分流比60∶1；柱流量0.8 mL·min-1；檢測(cè)器溫度250℃；進(jìn)樣量1 μL；初始溫度170℃，以2℃·min-1的速率升溫至230℃，維持10 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取各脂肪酸甲酯對(duì)照品適量，用正庚烷配制成每毫升中含肉豆蔻酸甲酯0.5 mg、棕櫚酸甲酯1.0 mg、棕櫚油酸甲酯0.5 mg、硬脂酸甲酯0.5 mg、油酸甲酯6.0 mg、亞油酸甲酯1.0 mg、亞麻酸甲酯0.5 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液（a）。取1.0 mL對(duì)照品溶液（a），置10 mL量瓶中，加正庚烷稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液（b）。

2.2.2 供試品溶液 取供試品約1.0 g置于25 mL兩口燒瓶中，加入無(wú)水甲醇10 mL，60g·L-1的氫氧化鉀甲醇溶液0.2 mL，振搖至溶解，通氮?dú)猓ㄋ俣缺３衷?0 mL·min-1），搖勻，加熱至沸騰，當(dāng)溶液變成透明后（通常約10 min），繼續(xù)加熱5 min，用水冷卻燒瓶，再轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。用5 mL的正庚烷洗滌燒瓶?jī)?nèi)壁，再將該液體加入分液漏斗并搖勻。加入10 mL的氯化鈉溶液（200 g·L-1），用力搖晃。將有機(jī)層放入瓶中，并用無(wú)水硫酸鈉脫水，靜置后進(jìn)行過(guò)濾，移取該溶液1 mL置10 mL的量瓶中，用正庚烷稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 專屬性考察 對(duì)照品溶液中各脂肪酸甲酯理論板數(shù)良好，分離度均不小于1.8。如圖1所示，各脂肪酸甲酯均得到較好分離。

圖1 （A）對(duì)照品溶液（b）；（B）空白溶劑；（C）供試品溶液的氣相色譜圖

2.3.2 線性與范圍 分別配制7種脂肪酸甲酯的系列對(duì)照溶液。在“2.1”色譜條件下取1 μL進(jìn)樣分析。以濃度質(zhì)量C為橫坐標(biāo)X，以峰面積A為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表1。表明本檢測(cè)方法線性關(guān)系良好。

表1 各脂肪酸甲酯的回歸方程與線性范圍

2.3.3 精密度試驗(yàn)

重復(fù)性：分別稱取油酸聚烴氧 （5～6）酯（20130702）6份，每份約1.0 g，精密稱定，按“2.2.2”方法操作，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，按照面積歸一化法計(jì)算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯含量的RSD分別為0.22%、1.14%、0.83%、1.11%、1.94%（棕櫚油酸甲酯和亞麻酸甲酯均未檢出），表明方法重復(fù)性良好。

中間精密度：本實(shí)驗(yàn)室的兩位實(shí)驗(yàn)人員，分別稱取油酸聚烴氧（5～6）酯（20130702）6份，每份約1.0 g，精密稱定，按“2.2.2”方法操作，使用兩臺(tái)不同氣相色譜儀，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，按照面積歸一化法計(jì)算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯含量的RSD分別為0.90%、 1.54%、1.24%、1.78%、1.87%（棕櫚油酸甲酯和亞麻酸甲酯均未檢出），表明方法中間精密度良好。

重現(xiàn)性：本實(shí)驗(yàn)室人員和南京威爾化工實(shí)驗(yàn)人員，在各自實(shí)驗(yàn)室分別稱取油酸聚烴氧 （5～6）酯（20130702）6份，每份約1.0 g，精密稱定，按“2.2.2”方法操作，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，按照面積歸一化法計(jì)算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯含量的RSD分別為

1.23%、1.78%、1.98%、2.76%、2.98%（棕櫚油酸甲酯和亞麻酸甲酯均未檢出），表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.4 定量限 取“2.3.2”線性試驗(yàn)項(xiàng)下各脂肪酸甲酯低濃度對(duì)照品溶液，按逐步稀釋法配制溶液，精密量取1 μL，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以信噪比為10∶1時(shí)的相應(yīng)濃度確定定量限。各脂肪酸甲酯的定量限見(jiàn)表2。

2.3.5 檢測(cè)限 取“2.3.2”線性試驗(yàn)項(xiàng)下各脂肪酸甲酯低濃度對(duì)照品溶液，按逐步稀釋法配制溶液，精密量取1 μL，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以信噪比為3∶1時(shí)的相應(yīng)濃度確定檢測(cè)限。各脂肪酸甲酯的檢測(cè)限見(jiàn)表2。

表2 7種脂肪酸甲酯的定量限與檢測(cè)限

2.3.6 溶液穩(wěn)定性 稱取油酸聚烴氧 （5～6）酯（20130702）約0.1 g，按“2.2.2”方法操作，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8 h在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，按照面積歸一化法計(jì)算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯含量的RSD分別為0.82%、1.53%、0.53%、2.21%、1.54%（棕櫚油酸甲酯和亞麻酸甲酯均未檢出），表明供試品溶液在室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 耐用性 稱取油酸聚烴氧 （5～6）酯（20130702）約0.1 g，按“2.2.2”方法操作，分別選用安捷倫DB-WAX石英毛細(xì)管柱 （30 m×0.25 mm× 0.25 μm）和HP-INNOWAX石英毛細(xì)管柱 （30 m× 0.25 mm×0.25 μm）兩種毛細(xì)管柱，在“2.1”色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果基本一致，表明本方法及色譜系統(tǒng)具有良好的耐用性。

2.4 樣品測(cè)定

分別稱取油酸聚烴氧 （5～6）酯和油酸聚烴氧（10）酯約1.0 g，精密稱定，按“2.2.2”方法操作，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，色譜圖見(jiàn)圖1-C。按照面積歸一化法計(jì)算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯、亞麻酸甲酯百分含量，見(jiàn)表3。

3 討論與小結(jié)

3.1 本實(shí)驗(yàn)調(diào)研了EP8.0版及USP37版中脂肪酸組成的檢測(cè)方法，相比之下，EP8.0的方法操作步驟少，樣品預(yù)處理時(shí)間短，反應(yīng)過(guò)程中氮?dú)獗Ｗo(hù)，可防止脂肪酸中不飽和的雙鍵被氧化。

3.2 本文建立的氣相色譜法，可同時(shí)測(cè)定油酸聚烴氧酯中肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、亞麻酸甲酯7種脂肪酸組成的百分含量，參考《歐洲藥典》標(biāo)準(zhǔn)，方法采用的是面積歸一化法，由于各脂肪酸的對(duì)照品采購(gòu)于Sigma，量少且昂貴，無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確的校正因子的測(cè)定，未對(duì)面積歸一化法的合理性作進(jìn)一步驗(yàn)證。

表3 6批油酸聚烴氧酯脂肪酸組成測(cè)定結(jié)果（%）

3.3 從油酸聚烴氧酯中脂肪酸的組成可以看出絕大部分是不飽和脂肪酸，其中以油酸含量最高占70%～80%，亞油酸次之8%～9%，且油酸聚烴氧（5～6）酯中的油酸明顯高于油酸聚烴氧（10）酯；而飽和脂肪酸中，含量最高的是棕櫚酸，且油酸聚烴氧（5～6）酯中的棕櫚酸明顯低于油酸聚烴氧（10）酯，因此建立的氣相色譜法，可以快速鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)危瑓^(qū)分油酸聚烴氧酯（5～6）酯和油酸聚烴氧（10）酯，可為油酸聚烴氧酯的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。同時(shí)由于本品含有醚鍵和雙鍵，容易氧化生成環(huán)氧乙烷，提示油酸聚烴氧酯需要充氮密封保存。

[1]EP8.0[Z].2659-60.

[2]USP37/NF32[Z].6132-3.

Contents Determination of Seven Fatty Acids in Pharmaceutical Excipient Polyoxyl Oleate by GC

ZHANG Jin-lin1,ZHANG Mei1,YUAN Yao-zuo1*,LI Hong-li2,WANG Bao-cheng2
1Jiangsu Institute for Food and Drug Control,Nanjing 210009;2Nanjing Well Chemical Co.Ltd,Nanjing 211500

Objective:To develop a method for the determination of oleic acid,myristic acid,palmitic acid,palmitoleic acid,stearic acid,linoleic acid and linolenic acid in polyoxyl oleate simultaneously.Methods:Test samples were analyzed by gas chromatography after methyl esterification.They were determined with a flame ionization detector at 250℃,injection temperature was at 250℃,the split ration was 60∶1.The compounds were separated on an quartz capillary column by using temperature programming from 170℃ to 230℃ by 2℃·min-1and maintained for 10 min.Results:These fatty acids mentioned above showed good linear relationship respectively.The precision of the method was good.The limit of detection of each compound was 0.86～2.32μg·mL-1,the limit of quantitation was 2.54～8.21μg·mL-1.Conclusion:This method is accurate and has been recorded in the Pharmacopoeia of the Peoples's Republic of China 2015 Edition.

Gas chromatography;Polyoxyl oleate;Contents of fatty acids

R927.1

A

1673-7806（2015）05-465-03

張錦琳，女，主管藥師 E-mail:zjluser@126.com

*通訊作者袁耀佐，男，博士，主任藥師 E-mail:yyzyz7256@sina.cn

2015-05-22

2015-07-01