荔枝玫瑰酒的營養(yǎng)成分分析與皮膚抗氧化功效研究

李曉娟，孟 君，徐 瑩，張 凱，唐 雪

（1.株洲千金藥業(yè)股份有限公司，湖南 株洲 412000；2.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122）

皮膚衰老是指皮膚衰老性損傷，使其對機體的防護能力和調(diào)節(jié)能力減退，導(dǎo)致不能適應(yīng)內(nèi)外環(huán)境的變化，出現(xiàn)顏色、色澤、形態(tài)、質(zhì)感等外觀整體狀況的改變[1]。紫外線照射、遺傳因素和生活習(xí)慣是引起皮膚衰老的主要因素，具體表現(xiàn)為皮膚含水率降低、膠原蛋白流失和彈性蛋白減少，導(dǎo)致皮膚干燥、松弛和皺紋產(chǎn)生。目前，最受認(rèn)可的衰老假說是自由基衰老學(xué)說，該學(xué)說認(rèn)為衰老是由各種活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）在體內(nèi)積累，加速氧化損傷核酸、蛋白質(zhì)和生物膜系統(tǒng)的結(jié)果[2]。正常狀態(tài)下，機體內(nèi)促氧化作用與抗氧化防御處于動態(tài)平衡，使自由基維持在生理水平[3]。當(dāng)機體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時，體內(nèi)的抗氧化酶活性降低，還原性物質(zhì)生成減少，使動態(tài)平衡打破，加速皮膚衰老[4]。

荔枝（Litchi chinensisSonn.）是一種廣泛分布亞熱帶地區(qū)的水果，具有口感甘甜、營養(yǎng)豐富、促進(jìn)皮膚新陳代謝和延緩衰老的功效。研究發(fā)現(xiàn)，荔枝果肉含有豐富的多糖和酚類活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗炎、降血脂和增強免疫力等作用[5-8]。玫瑰（Rosa rugosaThunb.）屬薔薇科植物，花瓣富含維生素、氨基酸和多酚類物質(zhì)，其中維生素C（vitamin C，VC）含量較高，具有較強的抗氧化、抗炎等生物活性，已被廣泛應(yīng)用于食品、藥品等領(lǐng)域[9-14]。本研究綜合荔枝和玫瑰這兩種不同藥食原料的營養(yǎng)保健價值，開發(fā)出一款對皮膚具有健康功效的低酒精度果酒，可滿足人們對天然抗氧化飲品的消費需求[15-18]。

該研究前期以新鮮荔枝和玫瑰花瓣為主要原料，輔以蘋果、枸杞和葡萄原酒，應(yīng)用現(xiàn)代釀酒技術(shù)，開發(fā)出了一款具有特殊香氣和醇厚口感的荔枝玫瑰酒。測定了其主要營養(yǎng)物質(zhì)和活性成分，以D-半乳糖誘導(dǎo)的皮膚衰老小鼠模型作為研究對象，探討了荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚組織理化指標(biāo)、氧化還原穩(wěn)態(tài)和膠原合成的影響，以期為荔枝玫瑰酒的開發(fā)和推廣提供有價值的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

荔枝玫瑰酒（酒精度為12%vol）：株洲千金藥業(yè)股份有限公司。

60只無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級美國癌癥研究所（institute of cancer research，ICR）雄鼠[5周齡，（29.75±1.35）g]：上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，飼喂于江南大學(xué)實驗動物中心。飼養(yǎng)條件為光照周期12 h（8：00～20：00），恒溫（23±2）℃，恒濕（60±5）%。

1.1.2 試劑

無水葡萄糖、沒食子酸、亞硝酸鈉、硝酸鋁、單寧酸、甲醇、乙醚、抗壞血酸、草酸、亞硫酸鈉、鉬酸胺、對苯二酚、磷酸二氫鉀（均為分析純）、蘆?。兌龋?5%）：國藥集團化學(xué)試劑有限公司；總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）、羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）、蛋白質(zhì)羰基（protein carbonyl，PC）試劑盒：南京建成生物研究所；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒：碧云天生物技術(shù)有限公司；魯米諾、4-羥乙基哌嗪乙磺酸（4-（2-hydroxyerhyl）piperazine-1-erhaesulfonic acid，HEPES）、辣根過氧化物酶、鄰苯二甲醛、N-乙基順丁烯二酰亞胺：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；Trizol：上海生工生物工程股份有限公司；脫氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate，dNTP）、RNase Inhibitor、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶：美國ThermoFisher科技公司；SYBR Green Master Mix：南京諾唯贊生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

NexION 350D電感耦合等離子體質(zhì)譜（inductively coupled plasma massspectrometry，ICP-MS）儀：美國PE公司；BioTek Epoch全波長酶標(biāo)儀：美國Biotek公司；Agilent 1100液相色譜儀：美國Agilent公司；UV2300紫外分光光度計：中國上海天美儀器有限公司；5804R離心機：德國Eppendorf公司；CFX96 Touch實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real time-fluorescence quantitative，polymerase chain reaction，RTFQ PCR）儀：美國Bio-rad公司；One Drop spectrophotometer OD-1000：南京五義科技有限公司；ETC811PCR擴增儀：東勝興業(yè)科學(xué)儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 荔枝玫瑰酒營養(yǎng)成分分析

總糖與還原糖含量測定：采用GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》中斐林試劑滴定法；蛋白質(zhì)含量測定：采用GB 5009.5—2016《食品中蛋白質(zhì)的測定》中凱氏定氮法；粗脂肪含量測定：采用GB 5009.6—2016《食品中脂肪的測定》中索氏抽提法；總多酚含量測定：采用福林-酚（Folin-Ciocaleu）法[19]；總黃酮含量測定：采用NaNO2-Al（NO3）3比色法（以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品）[20]；單寧含量測定：采用Folin-Ciocaleu法（以單寧酸為標(biāo)準(zhǔn)品）[21]。

維生素A、E含量測定：采用GB 5009.82—2016《食品中維生素A、D、E的測定》中反相高效液相色譜法；維生素B1含量測定：采用GB 5009.84—2016《食品中硫胺素（維生素B1）的測定》中高效液相色譜法；維生素B2含量測定：采用GB 5009.85—2016《食品中維生素B2的測定》中高效液相色譜法；維生素B6含量測定：采用GB 5009.154—2016《食品中維生素B6的測定》中高效液相色譜法；維生素C含量測定：采用GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》中二氯靛酚染料滴定法。

1.3.2 荔枝玫瑰酒皮膚抗氧化功效研究

（1）動物分組

所有實驗操作均按照江南大學(xué)動物使用和福利協(xié)會要求進(jìn)行。60只SPF級ICR雄鼠預(yù)飼1周后，小鼠隨機分為6組：正常組（10只）、D-半乳糖處理組（衰老模型，10只）、VC對照組（抗衰老對照，10只）、低劑量荔枝玫瑰酒組（10只）、中劑量荔枝玫瑰酒組（10只）、高劑量荔枝玫瑰酒組（10只）。正常組注射等體積生理鹽水，其余五組頸背部皮下連續(xù)注射D-半乳糖1 200 mg/（kg·d），建立小鼠衰老模型。6周后，荔枝玫瑰酒組分別飼喂含低（11.25 mL/kg體質(zhì)量）、中（22.50 mL/kg體質(zhì)量）、高（45.00 mL/kg體質(zhì)量）劑量荔枝玫瑰酒的飲用水，添加量相當(dāng)于人體每天攝入75 mL、150 mL和300 mL荔枝玫瑰酒產(chǎn)品。正常組及D-半乳糖處理組飼喂含體積分?jǐn)?shù)12%乙醇的飲用水，對照組的VC添加量為450 mg/kg體質(zhì)量。同時，除正常組外，其余各組繼續(xù)給予相同劑量D-半乳糖頸背部皮下注射。所有動物每周一上午10點用天平稱其體質(zhì)量，自由采食、飲水，12周后采樣分析。

（2）檢測樣品的采集

飼養(yǎng)結(jié)束后，小鼠禁食不禁水12 h，用5%硫化鈉涂于小鼠頸背部，脫去絨毛，隨后用清水沖洗，清潔紗布拭干。眼球采血后頸椎脫臼處死小鼠，取小鼠頸背部皮膚稱質(zhì)量。皮膚取同一部位0.1 g，加入0.9 mL生理鹽水后用高通量組織研磨器勻漿，4 000 r/min離心10 min后分離上清，按照BCA蛋白濃度測定試劑盒說明書測定蛋白質(zhì)含量，放置于-80 ℃冰箱。

（3）皮膚組織理化指標(biāo)測定

皮膚水分含量測定：取小鼠背部皮膚，去毛清潔后，精密稱其濕質(zhì)量，隨即將其放入烘箱中，于80 ℃烘干12 h，稱其干質(zhì)量，干濕質(zhì)量的差值與濕質(zhì)量之比即皮膚含水百分率。皮膚羥脯胺酸含量測定：按照HYP試劑盒說明書方法進(jìn)行測定。皮膚膠原蛋白含量：根據(jù)HYP試劑盒說明書，羥脯氨酸在膠原蛋白中占13.4%進(jìn)行換算。

（4）氧化應(yīng)激指標(biāo)測定

活性氧自由基：采用化學(xué)發(fā)光法測定[22]。50 μL組織勻漿液與830 μL Krebs-HEPEs緩沖液混合后加入20 μL 3 mg/mL辣根過氧化物酶，放入化學(xué)發(fā)光儀避光后立即加入0.1 mL魯米諾溶液后檢測。

總抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽、蛋白質(zhì)羰基：按照相應(yīng)試劑盒說明書所示方法進(jìn)行測定。

（5）RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

采用Trizol法[23]提取小鼠頸背部皮膚組織的RNA，并測RNA濃度及RNA的OD260nm/OD280nm值，將OD260nm/OD280nm值在1.8～2.0范圍的樣品用焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate，DEPC）水調(diào)節(jié)質(zhì)量濃度至1000μg/mL，之后嚴(yán)格按照說明書使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補脫氧核糖核酸（complementary deoxyribonucleic acid，cDNA），逆轉(zhuǎn)錄好的cDNA于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（6）實時熒光定量PCR[24]

采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-FQ PCR）測定膠原蛋白合成分解相關(guān)基因（TGF-β1、MMP-1、MMP-8）及皮膚抗氧化相關(guān)基因（β-actin、Gsk-3β、Nrf2、HO-1、NQO-1）的相對表達(dá)量。PCR擴增總體系20 μL，其中cDNA 2 μL，上、下游引物各0.8 μL，2×SYB Green Mix 10 μL，雙蒸水6.4 μL。PCR擴增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性20 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，共循環(huán)40次；72 ℃終末延伸2 min。以β-肌動蛋白（β-actin）作為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法對數(shù)據(jù)進(jìn)行計算處理，RT-FQ PCR所用引物序列見表1。

表1 RT-FQ PCR所用引物序列Table 1 Primers sequences used in RT-FQ PCR

1.3.3 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，運用單因素ANOVA方差分析，Duncan檢驗進(jìn)行組間比較，顯著水平為P＜0.05。采用GraphPad Prism7.0軟件處理作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 荔枝玫瑰酒的營養(yǎng)指標(biāo)分析

2.1.1 荔枝玫瑰酒的主要營養(yǎng)成分及活性物質(zhì)分析

表2 荔枝玫瑰酒的主要營養(yǎng)成分及活性物質(zhì)測定結(jié)果Table 2 Determination results of main nutrient components and active substances in litchi rose wine

由表2可知，荔枝玫瑰酒中含有蛋白質(zhì)2.30 g/L、粗脂肪7.93 g/L、總糖25.60 g/L、還原糖19.71 g/L（占總糖含量的76.95%）。在荔枝玫瑰酒釀造過程中，由于果汁本身以及發(fā)酵過程中微生物及其代謝產(chǎn)物的存在，使荔枝玫瑰酒存在一定量的蛋白質(zhì)和脂肪，且糖和脂肪含量較低，根據(jù)GB 28050—2011《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 預(yù)包裝食品營養(yǎng)標(biāo)簽通則》，荔枝玫瑰酒屬于低糖低脂食品。此外，荔枝玫瑰酒中還含有生物堿6.62 g/L、多酚0.43 g/L、總黃酮0.25 g/L、單寧0.12 g/L、花色苷0.42×10-3g/L，這使果酒具有獨特的香味和色澤。植物多酚是一類具有多種生物學(xué)活性的多元酚結(jié)構(gòu)的次級代謝產(chǎn)物，廣泛存在于人們?nèi)粘Ｊ秤玫氖吖娜~、花和果實中，其含量在表皮中尤為豐富[25]。研究表明，多酚類化合物不僅是天然抗炎癥和抗氧化劑的主要來源，而且可作為信號分子調(diào)節(jié)細(xì)胞功能和基因表達(dá)，具有潛在的保健功效[26]。黃酮類化合是植物和漿果的重要功能成分，可直接捕捉和清除ROS，通過激活體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)發(fā)揮抗氧化的作用[27]。植物單寧是良好的自由基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑，可抑制脂質(zhì)氧化，阻斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，具有較強的抗氧化能力[28]。這些可能是荔枝玫瑰酒營養(yǎng)價值及抗氧化穩(wěn)定性的主要因素。

2.1.2 荔枝玫瑰酒維生素含量分析

表3 荔枝玫瑰酒中維生素含量測定結(jié)果Table 3 Determination results of vitamins content in litchi rose wine

由表3可知，荔枝玫瑰酒以維生素C為主，含量達(dá)到3.145 mg/100 mL，其維生素C的含量略高于無花果果酒（3 mg/100 mL）和諾麗果酒（3.02 mg/100 mL）[29-30]。維生素C又稱L-抗壞血酸，作為一種公認(rèn)的抗氧化物質(zhì)，可參與體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)、組織膠原蛋白合成、延緩衰老和增強人體免疫功能[31]。果酒中的維生素通常來源于原料果實，荔枝果肉（15 mg/100 g）、玫瑰花瓣（88.93 mg/100 g）富含維生素C[32-33]，但是極易腐敗變質(zhì)，而普通的釀造工藝會使得維生素大量流失，荔枝玫瑰酒通過對溫度和原料配比的工藝優(yōu)化不僅盡量保留了較豐富的維生素C，而且易于保存運輸，大大提高了荔枝和玫瑰的資源利用率，能夠獲得巨大的經(jīng)濟效益。

通過荔枝玫瑰酒的營養(yǎng)物質(zhì)與活性成分分析發(fā)現(xiàn)，荔枝玫瑰酒含有豐富的多酚、黃酮類物質(zhì)、單寧及維生素C等活性成分，分別達(dá)到0.43g/L、0.25g/L、0.12g/L和3.145mg/100mL，其多酚含量明顯高于市售常見櫻桃酒（303 μg/mL）和桑椹紅酒（1.659 μg/mL），與赤霞珠含量相近[34-36]。植物多酚、黃酮具有良好的抗氧化功能，能夠直接清除機體內(nèi)自由基，起到延緩衰老的目的。已有研究表明，水果多酚、黃酮類物質(zhì)可通過抑制氧化應(yīng)激、減少炎癥、調(diào)控與疾病有關(guān)的基因表達(dá)等發(fā)揮干預(yù)作用[3]；SARIN N B等[37]指出荔枝果肉酚類物質(zhì)提取物可顯著增加應(yīng)激性肝損傷小鼠肝細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶等抗氧化酶的活性，減少線粒體ROS產(chǎn)生，發(fā)揮體內(nèi)抗氧化應(yīng)激損傷活性。

2.2 荔枝玫瑰酒對小鼠體質(zhì)量的影響

圖1 荔枝玫瑰酒對小鼠體質(zhì)量的影響Fig.1 Effect of litchi rose wine on body mass of mice

由圖1可知，小鼠飼喂12周后，各組體質(zhì)量增加但均無顯著性差異（P＞0.05），說明飼喂荔枝玫瑰酒對衰老小鼠體質(zhì)量無顯著影響。

2.3 荔枝玫瑰酒的皮膚抗氧化功效結(jié)果分析

2.3.1 荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚組織理化指標(biāo)和氧化還原狀態(tài)的影響

膠原蛋白是皮膚的重要組成成分，是由真皮中的成纖維細(xì)胞所分泌的，對維持皮膚的張力起重要作用[38]?；钚匝酰≧OS）是人體能量代謝的副產(chǎn)物，在健康機體內(nèi)處于動態(tài)平衡狀態(tài)[39]。當(dāng)機體發(fā)生氧化應(yīng)激，過剩的ROS在體內(nèi)累計導(dǎo)致氧化損傷，成纖維細(xì)胞生長和更新速度減慢，膠原和彈性纖維合成能力下降，使得皮膚膠原蛋白流失，水分含量減少，皮膚衰老[40]。當(dāng)機體處于衰老狀態(tài)時，體內(nèi)的抗氧化酶活性降低，總抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽（GSH）下降，動態(tài)平衡失調(diào)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)氧化，進(jìn)一步加速衰老[41]。

圖2 荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚理化指標(biāo)的影響Fig.2 Effect of litchi rose wine on physical and chemical indexes of mice skin

表4 荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚氧化還原指標(biāo)的影響Table 4 Effect of litchi rose wine on redox indexes of mice skin

表5 荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚抗氧化酶活性的影響Table 5 Effect of litchi rose wine on antioxidant enzyme activity of mice skin

由圖2、表4及表5可知，與正常組相比，連續(xù)注射D-半乳糖可使小鼠皮膚含水率、羥脯胺酸、膠原蛋白含量顯著降低（P＜0.05），引起皮膚ROS、MDA和PC水平顯著提高（P＜0.05），T-AOC能力、GSH 水平以及抗氧化酶活性（GSH-Px、SOD和CAT）顯著降低（P＜0.05），表明D-半乳糖注射誘導(dǎo)小鼠皮膚衰老和氧化損傷。與之相反，和D-半乳糖處理組相比，飼喂高劑量荔枝玫瑰酒能顯著提高小鼠皮膚含水率、羥脯胺酸和膠原蛋白含量（P＜0.05），降低MDA含量、GSH-Px酶活性，提高GSH含量、SOD和CAT酶活性（P＜0.05），且高劑量荔枝玫瑰酒效果與VC相當(dāng)。結(jié)果表明，一定劑量的荔枝玫瑰酒可改善衰老小鼠皮膚氧化還原穩(wěn)態(tài)，提高抗氧化能力，降低ROS和過氧化產(chǎn)物生成，顯著恢復(fù)皮膚含水率、羥脯胺酸和膠原蛋白。

2.3.2 荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚膠原蛋白合成分解相關(guān)基因表達(dá)的影響

膠原蛋白是皮膚中含量最多的一種蛋白質(zhì)，對于表皮基底層和真皮層的粘附均具有重要作用，使細(xì)胞豐滿水盈，賦予皮膚韌性和彈力，是維持皮膚形態(tài)和結(jié)構(gòu)的重要物質(zhì)。膠原蛋白主要包括Ⅰ型膠原蛋白（85%～90%）和Ⅲ型膠原蛋白（10%～15%）。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，Tgf-β1）是組織纖維化的調(diào)控者，能夠有效刺激成纖維細(xì)胞和間葉母細(xì)胞的遷移和增殖分化，促進(jìn)Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的合成?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）是一組降解膠原蛋白的鋅依賴性內(nèi)肽酶，負(fù)責(zé)穩(wěn)態(tài)組織的修復(fù)和膠原蛋白的降解，Mmp-1和Mmp-8分別對Ⅲ型和Ⅰ型膠原蛋白具有較高的水解活性[42-43]。

圖3 小鼠皮膚膠原合成分解相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平Fig.3 mRNA expression level of genes related to collagen synthesis and decomposition in mice skin

由圖3可知，小鼠連續(xù)注射D-半乳糖12周，顯著降低了膠原合成基因Tgf-β1的mRNA表達(dá)水平，提高了分解基因Mmp-1及Mmp-8mRNA表達(dá)水平（P＜0.05），進(jìn)而使皮膚膠原蛋白分解增強，導(dǎo)致膠原蛋白含量減少。與之相反，衰老小鼠飼喂高劑量荔枝玫瑰酒可顯著恢復(fù)皮膚膠原蛋白合成及分解相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平，即顯著上調(diào)基因Tgf-β1，抑制基因Mmp-1及Mmp-8的表達(dá)（P＜0.05）。

2.3.3 荔枝玫瑰酒對小鼠皮膚抗氧化相關(guān)基因表達(dá)水平的影響

Nrf2/Gsk-3β信號通路是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化通路，對機體調(diào)節(jié)氧化還原狀態(tài)的酶具有重要的調(diào)節(jié)作用[44]。ROS等應(yīng)激物通過促進(jìn)Keap1上半胱氨酸殘基的氧化，誘導(dǎo)Nrf2的釋放和活化，啟動多種下游靶蛋白的表達(dá)，如血紅素加氧酶1（Heme oxygenase-1，Ho-1），還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化還原酶（nicotinamide adenine dinucleotide phosphatequinone oxidoreductase1，Nqo1）等[45]。Gsk-3β是一種糖原合成激酶，通過細(xì)胞核中Fyn的磷酸化，促進(jìn)Nrf2的磷酸化，使其被降解，進(jìn)而抑制抗氧化信號通路[46]。由圖4可知，與正常組相比，長期注射D-半乳糖氧化損傷小鼠皮膚，引起Nrf2、Ho-1及Nqo-1基因mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)，Gsk-3β基因表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）。而衰老小鼠飼喂高劑量荔枝玫瑰酒可顯著上調(diào)皮膚Ho-1及Nqo-1基因表達(dá)水平（P＜0.05），但對Nrf2、Gsk-3β基因表達(dá)無顯著性作用（P＞0.05）。

圖4 小鼠皮膚抗氧化相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平Fig.4 mRNA expression level of genes related to antioxidant in mice skin

謝璟[41]報道楊梅黃酮能降低光老化小鼠皮膚中Mmp-1基因的表達(dá)，增強抗氧化酶活性來修復(fù)皮膚損傷；高愛莉等[47]研究發(fā)現(xiàn)，茶多酚可激活Nrf2信號通路，增加抗氧化酶表達(dá)，對無毛鼠皮膚具有光防護的重要作用，與本研究結(jié)果一致。由此可見，荔枝玫瑰酒可能通過調(diào)節(jié)小鼠皮膚抗氧化相關(guān)基因表達(dá)，增強了抗氧化酶活性和抗氧化能力，平衡了皮膚氧化還原穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而緩解了衰老小鼠膠原分解，增強膠原蛋白合成能力，這可能與其含有豐富的多酚、黃酮等活性成分有關(guān)。

3 結(jié)論

本研究通過檢測荔枝玫瑰酒中的營養(yǎng)活性成分，發(fā)現(xiàn)該酒保留了豐富的多酚、黃酮、單寧及維生素C等活性成分，分別達(dá)到0.43 g/L、0.25 g/L、0.12 g/L和3.15 mg/100 mL。為進(jìn)一步探究其是否具有抗皮膚衰老的功效，進(jìn)行了動物實驗。結(jié)果表明，小鼠飼喂12周后，各組體質(zhì)量增加但均無顯著性差異（P＞0.05），飼喂高劑量荔枝玫瑰酒可顯著提高D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠皮膚含水率、羥脯胺酸和膠原蛋白含量，降低MDA含量、GSH-Px酶活性，提高GSH含量、SOD和CAT酶活性（P＜0.05）；同時通過提高衰老小鼠皮膚抗氧化基因Ho-1及Nqo-1mRNA表達(dá)水平，恢復(fù)皮膚膠原蛋白合成基因Tgf-β1及分解基因Mmp-1及Mmp-8表達(dá)水平，抑制小鼠皮膚氧化損傷和膠原分解，相關(guān)結(jié)果可為荔枝玫瑰酒的深入開發(fā)和推廣提供有價值的理論參考。