名老中醫(yī)丁啟后治療絕經(jīng)綜合征的參麥黃連阿膠湯藥效學實驗

丁麗仙 李一哲 李瓊 朱瑛

【摘 要】目的：采用丁氏婦科原國家級名老中醫(yī)丁啟后教授治療絕經(jīng)綜合征的有效經(jīng)驗方“參麥黃連阿膠湯”進行藥效學實驗，為“參麥黃連阿膠湯”的臨床有效性提供理論和實驗依據(jù)。方法：采用戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠實驗，觀察參麥黃連阿膠湯的協(xié)同促睡眠作用;采用毛果蕓香堿誘導小鼠發(fā)汗實驗，觀察參麥黃連阿膠湯的抑制發(fā)汗作用;采用小鼠負重游泳實驗，觀察參麥黃連阿膠湯的抗疲勞作用。結(jié)果：參麥黃連阿膠湯有縮短小鼠的睡眠潛伏期時間，延長睡眠持續(xù)時間，增加戊巴比妥鈉最大閾下睡眠劑量小鼠的入睡比例;參麥黃連阿膠湯能改善腋下皮膚汗腺擴張作用;參麥黃連阿膠湯延長小鼠游泳時間。結(jié)論：參麥黃連阿膠湯有明顯改善睡眠、抑制出汗、抗疲勞的作用。

【關鍵詞】丁啟后;參麥黃連阿膠湯;絕經(jīng)綜合征;藥效學實驗

Abstract： Objective： To use the former national famous old Chinese medicine doctor Ding Qi of Dings gynecology for the treatment of menopausal syndrome “Shenmai Huanglian Ejiao Decoction” to make pharmacodynamic experiments， which is clinically effective for “Shenmai Huanglian Ejiao Decoction” Sex provides theoretical and experimental basis. Methods： Using pentobarbital sodium to induce sleep in mice， observe the synergistic effect of Shenmaihuanglian Ejiao decoction; use pilocarpine to induce sweating in mice， observe the anti-sweat effect of Shenmaihuanglian Ejiao decoction; swim with weight-bearing mice Experiment to observe the anti-fatigue effect of Shenmai Huanglian Ejiao Decoction. Results： Shenmaihuanglian Ejiao Decoction can shorten the sleep latency period of mice， prolong the duration of sleep， and increase the proportion of pentobarbital sodium submaximal sleep dose in mice; Shenmaihuanglian Ejiao Decoction can improve the swelling of armpit skin sweat glands Situation; Shenmai Huanglian Ejiao Decoction prolongs the swimming time of mice. Conclusion： Shenmai Huanglian Ejiao Decoction can significantly improve sleep， suppress sweating and resist fatigue.

Keywords： Ding Qihou; Shenmai Huanglian Ejiao Decoction; Menopause Syndrome; Pharmacodynamic Experiment

【中圖分類號】R249【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）10-30--01

絕經(jīng)綜合征（climacteric syndrom或 menopausal syndrome，MPS），又稱為圍絕經(jīng)期綜合征，是指婦女絕經(jīng)前后出現(xiàn)性激素波動或減少所致的一系列軀體及精神心理癥狀，如月經(jīng)紊亂、潮熱出汗、失眠心悸、眩暈耳鳴、激動易怒、焦慮抑郁、骨質(zhì)疏松、心血管疾病等癥狀[1]。其自然絕經(jīng)潮熱發(fā)生率在75%以上，約持續(xù)1-2年，25%婦女將持續(xù)4-5年或更長。潮熱往往伴出汗。據(jù)統(tǒng)計，絕經(jīng)婦女中精神神經(jīng)癥狀發(fā)生率為58%，其中失眠52%[2]。西醫(yī)治療該病以性激素治療為主，通過調(diào)節(jié)激素分泌，改善或消除相關癥狀，提高婦女生活質(zhì)量，但如長期使用或大劑量使用會誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、心血管意外等，且停藥后易復發(fā)，患者依從性差[3]，還有肝腎功能不全等使用禁忌癥。中醫(yī)治療絕經(jīng)綜合征從整體調(diào)整，不僅療效肯定，而且副作用小，患者依從性好?！皡Ⅺ滭S連阿膠湯”是丁氏婦科原國家級名老中醫(yī)丁啟后教授治療絕經(jīng)綜合征臨床療效顯著的經(jīng)驗方，根據(jù)該方已有的臨床有效性研究，采用小鼠睡眠實驗、抑汗實驗、負重游泳實驗，為“參麥黃連阿膠湯”能治療改善絕經(jīng)綜合征的失眠多夢、潮熱出汗、疲乏等相關癥狀提供理論和實驗依據(jù)。

1 藥物、試劑與動物

5%戊巴比妥鈉（由貴州醫(yī)藥大學實驗中心提供）;更年安（江西南昌桑海制藥廠，國家準字Z20073293）;10%毛果蕓香堿（由貴州中醫(yī)藥大學實驗中心提供）;HE（蘇木素、伊紅）染色試劑盒（Solarbio公司，貨號G1120）二甲苯（上海鼎國生物技術(shù)有限公司，DS104-1Xylene）;無水乙醇（上海鼎國生物技術(shù)有限公司）;4%多聚甲醛（上海鼎國生物技術(shù)有限公司，AR-0211）;參麥黃連阿膠湯藥物于貴州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院購買。

雌性昆明小鼠，體質(zhì)量（18±10）g，由湖南實驗動物中心提供，清潔級動物，許可證號：SCXK（湘）2009-0012。

2 方法與結(jié)果

2.1 小鼠睡眠時間

2.1.1 戊巴比妥鈉預實驗

閾劑量戊巴比妥鈉可致小鼠睡眠。因小鼠對該藥的敏感性存在差異，據(jù)文獻報道35-50mg/kg范圍內(nèi)，為了確定100%小白鼠進入睡眠的戊巴比妥鈉最小劑量和90%-100%的小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉閾下睡眠最大劑量，各組動物腹腔注射不同濃度戊巴比妥鈉，記錄半小時內(nèi)入睡的動物數(shù)。如表1：

預實驗得到的使90%-100%的小鼠翻正反射不消失的最大劑量為35mg/kg，預實驗測得引起100%小鼠睡眠的最小閾劑量為50mg/kg。

2.1.2 戊巴比妥鈉閾下實驗

取小鼠60只，隨機分為5組，每組12只，分為參麥黃連阿膠湯高、中、低劑量組，更年安組、空白對照組?？瞻讓φ战M給予0.2mL/只/10g生理鹽水，參麥黃連阿膠湯高、中、低劑量組分別按成人劑量的20倍（89.33g/kg）、10倍（44.67g/kg）、5倍（22.35g/kg）給藥，更年安按成人劑量的10倍（0.93g/kg）給藥，治療組均予0.2mL/只/10g，連續(xù)灌胃給藥7d，于末次灌胃給藥1h后，給予小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉35mg/kg，注射后，記錄各組小鼠的入睡數(shù)。

參麥黃連阿膠湯低劑量與更年安有增加戊巴比妥鈉最大閾下睡眠劑量小鼠的入睡比例（P<0.05），參麥黃連阿膠湯中劑量和高劑量作用顯著（P<0.01）。如表2：

2.1.3 戊巴比妥鈉閾上實驗

分組及給藥方式同“2.1.2”項下，連續(xù)灌胃給藥7d，于末次灌胃給藥1h后，小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg。分別記錄各組入睡的潛伏期及睡眠持續(xù)時間。

參麥黃連阿膠湯各組與更年安組均有可以縮短小鼠的睡眠潛伏期時間，延長睡眠持續(xù)時間，增加戊巴比妥鈉最大閾下睡眠劑量小鼠的入睡比例（P<0.05或P<0.01），中、高劑量組優(yōu)于更年安組（P<0.01）。如表3：

2.2 小鼠抑汗實驗

取小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，分為參麥黃連阿膠湯高、中、低劑量組分別按成人劑量的20倍（89.33g/kg）、10倍（44.67g/kg）、5倍（22.35g/kg），更年安組（0.93g/kg），毛果蕓香堿組，空白對照組，除毛果蕓香堿組及空白對照組給予0.2mL/只/10g生理鹽水外，治療組均予0.2mL/只/10g，連續(xù)灌胃給藥7d，末次灌胃給藥1h，除空白組外，各組分別腹腔注射10%毛果蕓香堿（35mg/kg），30min后用頸椎脫臼法處死小鼠，取小鼠右側(cè)腋窩部皮膚組織進行固定、脫水與透明、浸蠟與包埋、切片、脫蠟與水化、染色與封片。在顯微鏡下觀察汗腺，選取10條汗腺導管，測量導管內(nèi)徑，取其平均值[4]。

毛果蕓香堿組較空白組有明顯擴張汗腺導管直徑作用（P<0.01），參麥黃連阿膠湯各組與更年安組均有明顯能改善腋下皮膚汗腺擴張情況（P<0.01），中、高劑量組優(yōu)于更年安組（P<0.01）。如表4：

由圖1可知毛果蕓香堿組（圖1A）腋窩部皮膚汗腺導管擴張，腺體擴張，腺上皮胞漿豐富，分泌旺盛，出現(xiàn)核下空泡，個別腺體可見分泌物。空白組（圖1C）正常腺體，腺體成小管狀分布，汗管不擴張，腺上皮排列致密，未見分泌現(xiàn)象。更年安（圖1B）、參麥黃連阿膠湯低（圖1D）、中（圖1E）、高劑量（圖1F）組均有縮短汗管的作用。參麥黃連阿膠湯中、高劑量組汗管大小接近與空白組。

2.3 小鼠負重游泳時間

分組及給藥方式同“2.1.2”項下，連續(xù)灌胃給藥7d，于末次灌胃給藥1h，選取各小鼠相同尾部部位負荷5%體重的鉛皮，栓時松緊適宜，放入水溫在25±2℃水箱中游泳，水深大于30cm，每次水箱中放入3只小鼠，防治互相擠靠。不斷輕輕攪動水面使之不停游動，用秒表記錄小鼠從入水至死亡時的游泳時間。

參麥黃連阿膠湯低劑量組與更年安組能延長游泳時間（P<0.05），中、高劑量組能顯著延長游泳時間（P<0.01）。中、高劑量組優(yōu)于更年安組（P<0.05）。如表5：

3 討論

參麥黃連阿膠湯是原國家級名老中醫(yī)丁啟后教授以《傷寒論》治“少陰病，得之二三日，心中煩，不得臥”的“黃連阿膠湯”為基礎靈活變通治療絕經(jīng)綜合征臨床療效顯著的經(jīng)驗方。該方由太子參、麥冬、黃連、阿膠、酸棗仁、白芍、五味子、生地、浮小麥、龍骨、牡蠣、大棗、甘草等13味藥組成。全方滋陰益氣，清心瀉火，寧心安神，收斂止汗。因絕經(jīng)綜合征表現(xiàn)失眠多夢、潮熱汗出、疲乏無力等癥狀最為明顯，故課題選擇做了誘導小鼠睡眠實驗，觀察參麥黃連阿膠湯的促睡眠作用;誘導小鼠發(fā)汗實驗，觀察參麥黃連阿膠湯的抑制發(fā)汗作用;小鼠負重游泳實驗，觀察參麥黃連阿膠湯的抗疲勞作用。實驗研究結(jié)果表明本方有縮短小鼠的睡眠潛伏期時間，延長睡眠持續(xù)時間;能改善腋下皮膚汗腺擴張作用;延長小鼠游泳時間。這些實驗研究結(jié)果說明可能就是參麥黃連阿膠湯臨床能明顯改善絕經(jīng)綜合征患者失眠多夢、潮熱汗出、疲乏無力等癥狀的機理所在?，F(xiàn)代藥理學研究表明，白芍、龍骨、牡蠣、酸棗仁、甘草、大棗等具有鎮(zhèn)靜作用[4-8];黃連有中樞抑制作用，小襞堿對小鼠有降溫、鎮(zhèn)靜、安定作用[9];浮小麥組大鼠光鏡下足趾汗腺導管未見明顯擴張具有明顯止汗作用[10];太子參具有抗疲勞、增強人體免疫力作用[11-12];五味子對大腦皮層的興奮和抑制過程均有影響，并能使其趨于平衡，其中樞興奮作用能改善人的智力活動，提高工作效率。五味子有類似人參的適應原樣作用，能增強機體對非特異性刺激的防御能力;阿膠能促進血液中血紅蛋白與紅細胞的生長，促進鈣吸收;麥冬能提高心肌收縮力及耐缺氧力，臨床應用對冠心病心絞痛及改善心電圖有一定作用;1%地黃浸膏對離體蛙心有明顯強心作用[4];大棗有增強肌力、抗腫瘤、增強抵抗力等作用[13];甘草有抗癌、防癌、增強免疫力作用[14-15]。方中這些藥物的藥理協(xié)同作用可能使參麥黃連阿膠湯有明顯改善睡眠、抑制出汗、抗疲勞等功用，這些實驗結(jié)果也為該方臨床的有效性提供了相關的理論依據(jù)。

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