超高效液相色譜-飛行時(shí)間-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的比較分析

張上上，鄭姝寧，王學(xué)濤，倪 陽(yáng)，王 英

（1.秦皇島市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 秦皇島 066000；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部蔬菜產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（北京），北京 100081）

藍(lán)靛果忍冬（Lonicera caeruleaL.），又名藍(lán)靛果，屬于忍冬科忍冬屬多年生落葉小灌木，是一種新興的野生漿果資源。藍(lán)靛果忍冬喜冷涼濕潤(rùn)性氣候，抗寒能力強(qiáng)[1]，主要分布在我國(guó)吉林省長(zhǎng)白山、黑龍江省大興安嶺山區(qū)[2]。果實(shí)為紫黑色或藍(lán)黑色漿果，橢圓形或長(zhǎng)圓形，皮薄籽小，質(zhì)地細(xì)膩，口感酸甜風(fēng)味獨(dú)特，可鮮食，出汁率高，適合加工成酒類、飲料、果醬等衍生食品[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)靛果忍冬果實(shí)含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如糖類、有機(jī)酸、氨基酸、礦物質(zhì)、維生素和微量元素等，還含有花青苷、黃酮、三萜、原花青素、兒茶素等活性物質(zhì)[5-8]。在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，藍(lán)靛果忍冬果實(shí)可入藥, 性苦涼，具有清熱瀉火、散癰消腫等功效，可用于治療濕熱痢疾、大便赤白等疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，藍(lán)靛果忍冬具有促進(jìn)血液循環(huán)、防治心血管病、降血壓、清熱解毒、抗疲勞、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗輻射、改善肝臟的解毒功能等功效[9-11]?？梢?，藍(lán)靛果忍冬是一種具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值的小漿果，具有廣闊的開發(fā)利用前景。

花青苷是常見的植物水溶性色素，是一類具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的類黃酮化合物，是植物體內(nèi)重要的次級(jí)代謝產(chǎn)物。藍(lán)靛果含有豐富的花青苷，不僅可以作為天然色素的良好來(lái)源，也是藍(lán)靛果忍冬生物學(xué)活性的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，具有抗氧化、清除自由基、降血脂、降血糖、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、改善血液循環(huán)和預(yù)防心血管疾病等多種活性[12-16]?；ㄇ嘬盏幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)決定其生物學(xué)功能，不同的花青苷苷元、糖基基團(tuán)、酰基基團(tuán)及其不同的結(jié)合方式，形成不同種類的花青苷進(jìn)而具有不同的生物學(xué)活性。因此，研究藍(lán)靛果忍冬花青苷的組成和相對(duì)含量，對(duì)綜合開發(fā)藍(lán)靛果忍冬相關(guān)產(chǎn)品具有重要意義。

已有研究表明[17]，不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)性狀差異較大，綜合平均單株產(chǎn)量、百果質(zhì)量、最大單果質(zhì)量、果實(shí)橫徑、果實(shí)縱徑、果實(shí)風(fēng)味等方面，發(fā)現(xiàn)藍(lán)靛果忍冬格爾達(dá)、伊利亞特和別列里的表現(xiàn)較好。因此本研究以這3 種藍(lán)靛果忍冬為研究材料，利用超高效液相色譜-飛行時(shí)間-串聯(lián)質(zhì)譜（ultra-high performance liquid chromatography-time of flight-tandem mass spectrometry，UPLC-TOF-MS/MS）技術(shù)，比較研究3 種不同品種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的種類、分子結(jié)構(gòu)和相對(duì)含量，以期為進(jìn)一步研究花青苷在藍(lán)靛果忍冬中合成與積累的分子遺傳機(jī)制以及選育富含花青苷的藍(lán)靛果忍冬優(yōu)良品種奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍(lán)靛果忍冬果實(shí)購(gòu)于黑龍江省黑河市中俄林業(yè)科技合作園。挑選出生長(zhǎng)良好、無(wú)病蟲害和機(jī)械損傷、成熟期的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)，其中伊利亞特果皮為藍(lán)紫色，果肉為深紅色，果實(shí)形狀為橢圓形，最大單果質(zhì)量為1.37 g；別列里果皮為藍(lán)紫色，果肉為深紅色，果實(shí)形狀為長(zhǎng)圓形，最大單果質(zhì)量為1.44 g；格爾達(dá)果皮為藍(lán)紫色，果肉為淺紅色，果實(shí)形狀為橢圓形，最大單果質(zhì)量為1.05 g。液氮速凍后轉(zhuǎn)移至－80 ℃冷凍貯藏備用。

乙腈（色譜級(jí)） 美國(guó)JT Baker公司；甲酸、鹽酸（均為色譜級(jí)） 美國(guó)Fluka公司；花青苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：飛燕草色素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-阿拉伯糖苷、矢車菊素-3-木糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-半乳糖酸木糖苷、矢車菊素-3-蕓香糖苷、矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷、矢車菊素-3-槐糖苷、芍藥素-3-蕓香糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷（純度均大于97%） 美國(guó)Sigma公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-30A UPLC儀 日本島津公司；6600 TOF-MS/MS儀 美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

花青苷的提取參考文獻(xiàn)[18]的方法并加以改進(jìn)。將冷凍的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)常溫解凍后勻漿，準(zhǔn)確稱取2.00 g勻漿液于50 mL離心管中，加入10 mL酸化甲醇提取液（0.1% HCl，V/V），振蕩混勻后室溫下超聲提取30 min。其中酸化甲醇提取液能夠防止花青苷的降解[19]。4 ℃、13 000 r/min離心15 min，上清液于35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸干。取2.0 mL酸化超純水（0.1%甲酸，V/V）進(jìn)行復(fù)溶，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，濾液進(jìn)樣分析。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：溶劑A為水溶液（0.1%甲酸，V/V）；溶劑B為乙腈溶液（0.1%甲酸，V/V）；流速0.3 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量2 μL。梯度洗脫條件見表1。

表1 液相色譜梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program for liquid chromatography

1.3.3 質(zhì)譜條件

AB SCIEX 6600 TOF-MS/MS系統(tǒng)，配Turbo VTM源離子；正離子掃描方式，噴霧電壓＋5 500 V；飛行時(shí)間質(zhì)譜全掃描-信息關(guān)聯(lián)采集-子離子掃描（TOF-MS scan-IDA-product ion scan）模式；全掃描m/z100～1 000，分辨率30 000 FWHM；霧化氣壓力0.34 MPa，氣簾氣壓力0.24 MPa，輔助霧化氣壓力0.34 MPa，以上3 種氣體均為氮?dú)?；離子源溫度為550 ℃；去簇電壓80 V；IDA觸發(fā)10 個(gè)子離子掃描，即每個(gè)循環(huán)選擇10 個(gè)最強(qiáng)的離子進(jìn)行MS/MS分析；子離子掃描的m/z50～1 000，碰撞電壓35 eV，碰撞電壓差15 eV，離子駐留時(shí)間100 ms。

1.4 數(shù)據(jù)分析

利用Analyst TF軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，PeakView和MasterView軟件進(jìn)行花青苷化合物的結(jié)構(gòu)鑒定分析?；谝患?jí)質(zhì)譜TOF-MS的精確質(zhì)量數(shù)、同位素分布以及化合分子不飽和度等信息，利用PeakView軟件中的FormularFinder功能，推測(cè)花青苷化合物可能的分子式；進(jìn)一步基于二級(jí)質(zhì)譜TOF-MS/MS產(chǎn)生的高分辨率、高準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的碎片離子信息，結(jié)合花青苷質(zhì)譜裂解規(guī)律，推測(cè)花青素苷元、糖基以及取代基的種類；綜合考慮花青苷化合物極性及色譜洗脫順序，參考相關(guān)文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)庫(kù)（mass bank，dictionary of natural products，KEGG，HMDB），完成花青苷組分的結(jié)構(gòu)鑒定；最后利用已有的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)花青苷的定性結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)于已鑒定的花青苷化合物，計(jì)算一級(jí)質(zhì)譜中的提取離子色譜峰的峰面積，對(duì)藍(lán)靛果忍冬中花青苷類化合物的相對(duì)含量進(jìn)行比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的結(jié)構(gòu)鑒定分析

利用已建立的UPLC-TOF-MS/MS方法，對(duì)藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中的花青苷提取物進(jìn)行進(jìn)樣分析。采用反相色譜法對(duì)花青苷進(jìn)行色譜分離，UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）為固定相，乙腈-水系統(tǒng)為流動(dòng)相，添加0.1%甲酸（V/V）作為酸性添加劑，維持花青苷陽(yáng)離子的穩(wěn)定性，同時(shí)可以提高花青苷的色譜分離度，減少色譜峰拖尾現(xiàn)象[20-21]。

圖1 3 種藍(lán)靛果忍冬伊利亞特（a）、別列里（b）和格爾達(dá)（c）果實(shí)中花青苷提取物的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion current chromatograms of anthocyanin extracts from three varieties of blue honeysuckle: Iliad (a), Berel (b) and Gerda (c)

由圖1可以看出，利用TOF-MS的高分辨率特點(diǎn)，結(jié)合TOF-MS scan-IDA-product ion scan復(fù)合掃描模式，一次進(jìn)樣分析即可同時(shí)獲得花青苷的一級(jí)質(zhì)譜分子離子和二級(jí)質(zhì)譜碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，結(jié)合同位素分布比、質(zhì)譜裂解規(guī)律、化合物極性及色譜洗脫順序，并通過(guò)與文獻(xiàn)[22-27]進(jìn)行比對(duì)，在藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中共鑒定24 種花青苷類化合物，具體的結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果見表2。其中矢車菊素-3-阿拉伯糖苷、矢車菊素-3-木糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-半乳糖酸木糖苷、矢車菊素-3-蕓香糖苷、矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷、矢車菊素-3-槐糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-蕓香糖苷和飛燕草素-3-葡萄糖苷10 種花青苷利用對(duì)照品完成了對(duì)定性結(jié)果的確證。此外，矢車菊素-3-木糖苷、矢車菊素-3-鼠李糖苷、矢車菊素-3-半乳糖酸木糖苷、矢車菊素-3,5-雙半乳糖苷、矢車菊素-3-槐糖苷、矢車菊素-3-雙己糖苷、矢車菊素-3-丙二酰己糖苷、芍藥素-3-雙己糖苷和飛燕草素-3-雙己糖苷9 種花青苷為首次在藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中被發(fā)現(xiàn)。

表2 藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的定性分析結(jié)果和提取離子色譜峰面積Table 2 Identification of anthocyanins and peak areas of the extracted ion chromatograms of anthocyanins in the fruits of blue honeysuckle

由表2可知，藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷含有矢車菊素、芍藥素、飛燕草素和天竺葵素4 種苷元類型，表明藍(lán)靛果忍冬花青苷的苷元類型豐富；此外，花青苷的存在形式包含單糖苷、雙糖苷、酰基取代的花青苷和矢車菊素-3-己糖苷二聚體。其中單糖苷包含花青苷苷元3位取代的葡萄糖苷、阿拉伯糖苷、木糖苷和鼠李糖苷4 種形式；而雙糖苷包含花青苷苷元3位取代的蕓香糖苷、槐糖苷、半乳糖酸木糖苷、桑布雙糖苷和雙己糖苷，以及3,5位取代的雙葡萄糖苷和雙半乳糖苷7 種形式；?；〈幕ㄇ嘬罩饕獮橐阴；捅；〈幕ㄇ嗨?3-己糖苷。本實(shí)驗(yàn)分別以單糖苷中的飛燕草素-3-葡萄糖苷、雙糖苷中的矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷、?；〈ㄇ嘬罩械纳炙幩?3-乙酰基己糖苷為例，詳細(xì)解析藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中這3 類花青苷的質(zhì)譜行為和裂解規(guī)律，描述其質(zhì)譜鑒定過(guò)程。

2.1.1 藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青素單糖苷的結(jié)構(gòu)鑒定分析

花青苷在正離子模式下以陽(yáng)離子形成存在，主要的分子離子峰為[M]＋，花青素單糖苷的二級(jí)質(zhì)譜裂解模式主要為糖苷鍵的斷裂，丟失單糖基團(tuán)后生成花青苷苷元碎片離子[28]。飛燕草素-3-葡萄糖苷在正離子模式下的一級(jí)質(zhì)譜圖見圖2a，分子離子峰為m/z465.102 4；其二級(jí)質(zhì)譜圖見圖2b，通過(guò)3位糖苷鍵的斷裂，失去一分子已糖脫水基團(tuán)（－162.052 6 Da），產(chǎn)生主要的碎片離子m/z303.049 8，為飛燕草素苷元離子，推斷該花青苷為飛燕草素-3-已糖苷；最后利用飛燕草素-3-葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品的進(jìn)樣分析，對(duì)比保留時(shí)間、同位素分布比、一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖，最終確定該花青苷為飛燕草素-3-葡萄糖苷。

圖2 正離子模式下藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中飛燕草素-3-葡萄糖苷的一級(jí)（a）和二級(jí)（b）質(zhì)譜圖Fig.2 Mass (a) and tandem mass (b) spectra of delphinidin 3-glucoside in blue honeysuckle fruits in positive ion mode

依照?qǐng)D2花青素單糖苷的二級(jí)質(zhì)譜斷裂規(guī)律，藍(lán)靛果忍冬果實(shí)花青苷提取物的TOF-MS/MS產(chǎn)物離子掃描中，得到的碎片離子含有m/z287.05、303.05、271.06、301.07，分別為矢車菊素苷元離子、飛燕草素苷元離子、天竺葵素苷元離子和芍藥素苷元離子；丟失的單糖基團(tuán)分別為阿拉伯糖基或木糖基（－132.042 Da）、葡萄糖基（－162.052 Da）和鼠李糖基（－146.058 Da），結(jié)合相關(guān)花青苷標(biāo)準(zhǔn)品，最終在藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中鑒定出7 種花青素單糖苷，分別為矢車菊素-3-阿拉伯糖苷、矢車菊素-3-木糖苷、矢車菊素-3-鼠李糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷、飛燕草素-3-葡萄糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷和芍藥素-3-葡萄糖苷。

2.1.2 藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青素雙糖苷的結(jié)構(gòu)鑒定分析

藍(lán)靛果忍冬果實(shí)花青素雙糖苷的二級(jí)質(zhì)譜裂解模式主要為苷元和雙糖之間的糖苷鍵斷裂，失去雙糖基團(tuán)而產(chǎn)生相應(yīng)的苷元碎片離子[29]。矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷在正離子模式下的一級(jí)質(zhì)譜圖見圖3a，主要的分子離子峰為[M]＋（m/z611.161 4），其二級(jí)質(zhì)譜圖見圖3b，通過(guò)3-位糖苷鍵的斷裂，失去一分子己糖脫水基團(tuán)（－162.052 3 Da），產(chǎn)生相應(yīng)碎片離子m/z449.109 1；進(jìn)一步發(fā)生5-位糖苷鍵的斷裂，失去另一分子己糖脫水基團(tuán)（－162.053 5 Da），生成矢車菊素苷元碎片離子m/z287.055 6，因此該花青苷被鑒定為矢車菊素-3,5-雙己糖苷；最后利用矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品的進(jìn)樣分析，對(duì)比保留時(shí)間、同位素分布比、一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖，最終確定該花青苷為矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷。依照上述花青素雙糖苷的二級(jí)質(zhì)譜斷裂規(guī)律，最終在藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中完成了天竺葵素-3-蕓香糖苷、矢車菊素-3-蕓香糖苷和飛燕草素-3-雙己糖苷等13 種花青素雙糖苷的結(jié)構(gòu)鑒定。

圖3 正離子模式下藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷的一級(jí)（a）和二級(jí)（b）質(zhì)譜圖Fig.3 Mass (a) and tandem mass (b) spectra of cyanidin 3,5-diglucoside in blue honeysuckle fruits in positive ion mode

2.1.3 藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中?；ㄇ嘬盏慕Y(jié)構(gòu)鑒定分析

藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中?；ㄇ嘬盏亩?jí)質(zhì)譜裂解模式主要為苷元和?；腔鶊F(tuán)之間的糖苷鍵斷裂，失去酰基化糖基基團(tuán)而生成苷元碎片離子[30-31]。芍藥素-3-乙?；禾擒赵谡x子模式下的一級(jí)質(zhì)譜見圖4a，主要的分子離子峰為[M]＋（m/z505.133 5），其二級(jí)質(zhì)譜見圖4b，通過(guò)3-位糖苷鍵的斷裂，失去一分子乙?；禾敲撍鶊F(tuán)（－204.062 Da），生成芍藥素苷元碎片離子m/z301.071 5，因此該花青苷被鑒定為芍藥素-3-乙酰基己糖苷。由于本研究尚無(wú)法獲得相關(guān)?；ㄇ嘬盏臉?biāo)準(zhǔn)品，只能根據(jù)TOF-MS/MS中丟失的糖基基團(tuán)的精確質(zhì)量數(shù)推測(cè)為己糖苷，但無(wú)法明確具體的己糖類型。未來(lái)的研究中還需要通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、分析純化以及核磁等技術(shù)手段完成藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中?；ㄇ嘬諟?zhǔn)確的結(jié)構(gòu)鑒定。依照上述質(zhì)譜斷裂規(guī)律，最終在藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中完成了矢車菊素-3-乙?；禾擒?、矢車菊素-3-丙二酰己糖苷和芍藥素-3-乙?；禾擒盏? 種?；ㄇ嘬盏慕Y(jié)構(gòu)鑒定。

圖4 正離子模式下藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中芍藥素-3-乙?；禾擒盏囊患?jí)（a）和二級(jí)（b）質(zhì)譜圖Fig.4 Mass (a) and tandem mass (b) spectra of peonidin-3-acetylhexoside in blue honeysuckle fruits in positive ion mode

2.2 3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的比較分析

花青苷類化合物具有結(jié)構(gòu)相似性，其質(zhì)譜響應(yīng)也具有相似性和可比性。通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜中花青苷的提取離子色譜峰峰面積比較分析不同品種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷類的相對(duì)含量，結(jié)果見表2。3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷類的組成存在明顯差異，其中伊利亞特果實(shí)中含有花青苷種類最豐富，共檢測(cè)到24 種花青苷；與伊利亞特相似，別列里果實(shí)中共檢測(cè)到23 種花青苷，其中矢車菊素-3-雙己糖苷未在別列里果實(shí)中被檢測(cè)到；而格爾達(dá)果實(shí)中含有的花青苷種類最少，只檢測(cè)到12 種花青苷。

3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷總含量的比較見圖5a，伊利亞特和別列里果實(shí)中花青苷的總含量顯著高于格爾達(dá)，這與伊利亞特和別列里深紅色果肉顏色，格爾達(dá)淺紅色果肉顏色的表型相符合。由表2可知，3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中主要的花青苷均為矢車菊素-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷和矢車菊素-3-蕓香糖苷，這4 種花青苷含量的總和分別占伊利亞特、別列里和格爾達(dá)花青苷總含量的94.9%、94.1%和99.1%，它們相對(duì)含量的比較分析見圖5b。矢車菊素-3-葡萄糖苷是藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中相對(duì)含量最高的花青苷，分別占伊利亞特、別列里和格爾達(dá)花青苷總含量的72.4%、70.9%和89.7%；含量其次較高的是芍藥素-3-葡萄糖苷，分別占伊利亞特、別列里和格爾達(dá)花青苷總含量的10.1%、9.5%和7.1%；此外，矢車菊素-3,5-雙葡萄糖苷和矢車菊素-3-蕓香糖苷的含量相對(duì)較少，則分別占伊利亞特花青苷總含量的7.4%和5.0%，占別列里花青苷總含量的6.7%和7.0%，占格爾達(dá)花青苷總含量的0.7%和1.6%。因此，藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中主要的花青苷為矢車菊素類和芍藥素類花青苷，而天竺葵素類和飛燕草素類花青苷則含量較低。本研究得到的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)花青苷的組成及其相對(duì)含量的分析結(jié)果均符合相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道[32-33]，表明本實(shí)驗(yàn)所建立的植物花青苷分析方法具有很好的準(zhǔn)確性。此外，通過(guò)3 種不同品種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的比較分析可知，與格爾達(dá)相比較，伊利亞特和別列里果實(shí)中含有種類豐富且含量較高的花青苷。

圖5 3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中總花青苷（a）和主要花青苷（b）相對(duì)含量的比較分析Fig.5 Comparative analysis of the relative contents of total (a) and major individual (b) anthocyanins in the fruits of three varieties of blue honeysuckle

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)以伊利亞特、別列里和格爾達(dá)為研究對(duì)象，利用UPLC-TOF-MS/MS技術(shù)，對(duì)這3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中的花青苷組分進(jìn)行分析，詳細(xì)闡述了花青苷的質(zhì)譜行為和二級(jí)質(zhì)譜裂解規(guī)律，共鑒定出24 種花青苷，其中9 種花青苷為首次在藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中被鑒定。3 種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷的組成和相對(duì)含量不同，在伊利亞特、別列里和格爾達(dá)果實(shí)中分別檢測(cè)到24、23、12 種花青苷，并且伊利亞特、別列里果實(shí)中含有的花青苷總量和每一種花青苷的相對(duì)含量均明顯高于格爾達(dá)，說(shuō)明不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中花青苷存在多樣性和差異性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步分析藍(lán)靛果忍冬花青苷類物質(zhì)的遺傳機(jī)制，以及培育富含花青苷的藍(lán)靛果忍冬新品種提供重要的理論依據(jù)。