• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    L-賴氨酸對雞腿肉肌原纖維蛋白磷酸化的影響

    2020-10-28 07:13:34朱宗帥郭秀云彭增起張雅瑋
    食品科學(xué) 2020年20期
    關(guān)鍵詞:雞腿肉肌球蛋白肌動蛋白

    方 芮,朱宗帥,郭秀云,彭增起,張雅瑋

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇 南京 210095)

    蛋白質(zhì)磷酸化作為一種蛋白質(zhì)翻譯后的重要修飾方式,已經(jīng)在醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有廣泛的研究,但在肉品科學(xué)領(lǐng)域中研究較少,目前主要集中在蛋白質(zhì)磷酸化與宰后肉品質(zhì)的關(guān)系方面[1]。已有研究表明,相對較低磷酸化水平的肌原纖維蛋白更容易被鈣蛋白酶降解,從而有利于提高肉的嫩度,改善肉的品質(zhì)[2-3],蛋白質(zhì)磷酸化還可以通過影響與糖酵解有關(guān)酶的活性或穩(wěn)定性,從而影響宰后僵直過程,進一步影響肉的品質(zhì)[4-6]。此外,蛋白質(zhì)磷酸化可以負(fù)向調(diào)控肉色穩(wěn)定性,主要由于肌紅蛋白發(fā)生磷酸化后改變了二級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,導(dǎo)致其氧化速率增加,肉色下降[7-8]。

    在肉品加工過程中添加食鹽可以提高肉的保水性、增強產(chǎn)品的質(zhì)構(gòu)特性,并賦予產(chǎn)品良好的風(fēng)味[9]。研究表明,使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%食鹽腌制16 h后,能夠顯著降低肌肉的肌原纖維蛋白的整體磷酸化水平[10],食鹽腌制可通過抑制堿性磷酸酶和蛋白激酶A活性間接調(diào)節(jié)肌原纖維蛋白磷酸化水平,從而提高肉嫩度。然而鈉攝入量過高會增加高血壓和心血管疾病等發(fā)生的風(fēng)險[11],《中國食品工業(yè)減鹽指南》指出,我國是食鹽攝入量最高國家之一,有研究報告指出,我國是全球中風(fēng)發(fā)病率最高的國家,而我國的中風(fēng)發(fā)病率高的原因主要與高鈉攝入有關(guān)[12]。我國高鹽飲食由來已久,而來源于肉制品的NaCl攝入占人均每日攝入含量的25%[13],為了國民健康可持續(xù)發(fā)展,肉制品加工過程的減鹽行動刻不容緩。

    前期研究表明,在低鹽條件下(1 mmol/L和0.15 mol/L NaCl)添加5 mmol/LL-賴氨酸(L-Lys)能夠使肌球蛋白分子發(fā)生解折疊,蛋白構(gòu)象發(fā)生改變[14],顯著提高肌球蛋白溶解性;使用含L-Lys的氨基酸型低鈉鹽加工風(fēng)干咸草魚能夠抑制脂肪氧化程度、減少不良風(fēng)味物質(zhì)揮發(fā)并降低鈉含量50%以上[15]。在豬肉腸中添加L-Lys也能顯著提高產(chǎn)品的感官評分,賦予良好的色澤[16]。由此可見,L-Lys能夠在降低NaCl用量的同時一定程度上改善肉品品質(zhì)。本實驗研究在1% NaCl(低鹽)和3% NaCl(高鹽)條件下添加L-Lys對雞腿肉肌原纖維蛋白磷酸化水平的影響,并明確添加L-Lys在腌制雞腿肉過程中所誘導(dǎo)的磷酸化差異蛋白,旨在為揭示其降低肉中NaCl用量并保持或提高肉品品質(zhì)的內(nèi)在原因提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    選擇30 只同一批次的黃羽肉雞(月齡3 個月,2.0~2.2 kg),購自南京半步堂農(nóng)副產(chǎn)品貿(mào)易有限公司,三管齊斷法宰殺后立即剝皮取出腿肉,剔除明顯的結(jié)締組織并切割成大小均一的肉樣并混勻,肉樣處理在4 ℃低溫室下進行(宰殺過程和方法符合南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物福利的相關(guān)規(guī)定)。

    二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白濃度試劑盒 南京建成生物工程研究所;L-Lys 上海瑞永生物科技有限公司;蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑瑞士Roche公司;二硫蘇糖醇(dithiothreitol,DTT)、碘代乙酰胺(iodoacetamide,IAM)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、2-氨基-2-羥甲基-1,3-丙二醇(trisamine,Tris) 北京索萊寶生物科技有限公司;SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)預(yù)制膠美國GenScript公司;XT還原劑 美國Bio-Rad公司;20×NuPAGE MES電泳緩沖液、4×NuPAGE LDS樣品緩沖液、Pro-Q Diamond染液、Sypro Ruby染液美國Invitrogen公司;測序級胰蛋白酶 美國Promega公司;Ziptip C18槍頭型脫鹽柱 愛爾蘭Millipore公司;甲酸(formic acid,F(xiàn)A)、乙腈(acetonitrile,ACN)均為國產(chǎn)色譜純;NaCl為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    T25 digtal Ultra Turrax高速勻漿機 德國IKA公司;Allegra 64R高速冷凍臺式離心機 美國Beckman Coulter公司;HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司;M2e多功能酶標(biāo)儀、Mini-PROTEAN Tetra電泳槽、PowerPac Basic基礎(chǔ)型電源 美國Bio-Rad公司;SYC-2101水平搖床 美國Crystal公司;Typhoon Trio多功能激光成像系統(tǒng) 美國GE公司;eStain L1蛋白快速染色系統(tǒng)美國GenScript公司;真空濃縮機、nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS質(zhì)譜儀 美國Thermo公司。

    1.3 方法

    1.3.1 腌制

    將混勻的肉塊(宰后4 ℃成熟90 min)隨機分為15 份,每份稱取30 g肉塊,分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0% NaCl(對照組)、1% NaCl、1% NaCl+0.06%L-Lys、3% NaCl和3% NaCl+0.06%L-Lys,拌勻后置于4 ℃腌制16 h。

    1.3.2 肌原纖維蛋白的提取

    樣品制備參照Huang Honggang[5]和Lametsch[17]等的方法并稍作修改。取8.34 g腌制后的肌肉組織加入50 mL預(yù)冷的勻漿緩沖液(100 mmol/L Tris,pH 8.3,1 片蛋白酶抑制劑,2 片磷酸酶抑制劑),9 500 r/min冰浴勻漿2×30 s,然后13 500 r/min冰浴勻漿2×30 s。勻漿液15 000 r/min、4 ℃離心20 min,沉淀為肌原纖維蛋白,沉淀溶解于5% SDS溶液(60 ℃)后9 500 r/min勻漿30 s,80 ℃加熱20 min,4 ℃保存?zhèn)溆?。使用BCA蛋白濃度試劑盒測定蛋白濃度,用蒸餾水將各樣品質(zhì)量濃度調(diào)成4 mg/mL。

    1.3.3 SDS-PAGE與熒光染色

    參照Li Xiao等[6]的方法并稍作修改進行電泳樣品制備。將制備好的電泳樣品進行SDS-PAGE,肌原纖維蛋白上樣量為6 μg,初始電泳電壓為70 V,待條帶跑出濃縮膠后,上調(diào)電壓至120 V,電泳結(jié)束后取出電泳膠轉(zhuǎn)入干凈的染色盒中,進行固定液固定過夜12 h,結(jié)束后用蒸餾水(3×10 min)徹底洗脫固定液,用Pro-Q Diamond 染液進行避光磷酸化染色1.5 h后,避光脫色1.5 h,結(jié)束后用蒸餾水(4×5 min)洗脫,用Typhoon進行熒光拍照,隨后將膠轉(zhuǎn)入干凈的染色盒中,進行Sypro Ruby染液全蛋白避光染色過夜12 h后,回收染液,避光脫色30 min,結(jié)束后用蒸餾水(4×5 min)洗脫,再用Typhoon進行第2次熒光拍照。結(jié)束后對電泳膠進行考馬斯亮藍染色,使電泳條帶清晰可見,便于后續(xù)的質(zhì)譜鑒定。整個過程注意防止角蛋白污染,保持膠面干凈無破損。

    1.3.4 質(zhì)譜鑒定

    表1 質(zhì)譜鑒定的流動相組成Table 1Mobile phase composition for LC-MS/MS analysis

    肌原纖維蛋白磷酸化水平用Pro-Q Diamond染液染色后的磷酸化條帶光密度值P與Sypro Ruby染液染色后全蛋白條帶光密度值T的比值(P/T)表示,在超凈工作臺上用割膠筆割下P/T值差異顯著的條帶置于1.5 mL離心管中,使用50 μL超純水清洗和50 μL考馬斯亮藍染色脫色液脫色后,加入50 μL ACN脫水直至條帶完全變白,真空抽干后,加10 mmol/L DTT 20 μL,56 ℃水浴1 h;冷卻到室溫后吸干,快速避光加55 mmol/L IAM 20 μL,避光反應(yīng)45 min。依次用25 mmol/L NH4HCO3(2×10 min)、25 mmol/L NH4HCO3+50% ACN溶液(2×10 min)、ACN(10 min)洗,ACN脫水到膠粒完全變白為止,真空抽干10 min,37 ℃下用胰蛋白酶進行消化酶解12~16 h,加入0.02% FA終止反應(yīng),離心后吸出液相轉(zhuǎn)至新離心管中,條帶用60% ACN-0.2% FA 100 μL萃取2 次,每次15 min,吸出液相,合并于新離心管中后濃縮揮干,加入30 μL 0.2% FA復(fù)溶后用Ziptip C18脫鹽柱進行脫鹽后揮干備用,上機前加入5~10 μL 0.2% FA復(fù)溶后全部進入質(zhì)譜分析。

    流動相條件:有機相為ACN,水相添加0.2% FA;流速為0.3 μL/min,不同時間的流動相組成見表1。掃描范圍為m/z300~1 800,電壓40 V,掃描模式按前5 個豐度Scan Event 1~5進行掃描。

    1.4 圖像分析與數(shù)據(jù)處理

    使用ImageQuant TL(GE)軟件處理電泳膠拍照后的圖像,對電泳條帶進行光密度值分析后得到相對光密度,使用UniProtKB確定蛋白質(zhì)種類和功能,所有數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2016進行分析,使用Origin pro 9.0進行作圖,使用SAS V8進行單因素方差分析(ANOVA),采用Duncan多重比較,P<0.05,差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 一維SDS-PAGE與磷酸化水平分析

    圖1 雞腿肉肌原纖維蛋白整體磷酸化水平Fig.1 Phosphorylation levels of myofibrillar proteins from chicken thigh meat

    如圖1所示,1% NaCl組和0% NaCl組的磷酸化水平差異不顯著(P>0.05),3% NaCl組較1% NaCl組和0% NaCl組的磷酸化水平顯著下降(P<0.05),此結(jié)果與Zhang Caixia等[18]研究一致,而1% NaCl+0.06%L-Lys組與3% NaCl組相比,在降低NaCl條件下,添加0.06%L-Lys后的肌原纖維整體磷酸化水平無顯著差異(P>0.05),同時1% NaCl+0.06%L-Lys組較1% NaCl組能夠顯著降低肌原纖維蛋白整體磷酸化水平(P<0.05),通過比較可以發(fā)現(xiàn)在添加L-Lys時減少鈉鹽還可以達到高鹽條件下的低磷酸化水平。1% NaCl+0.06%L-Lys組與3% NaCl組之間無顯著差異(P>0.05),3% NaCl+0.06%L-Lys與3% NaCl組、1% NaCl+0.06%L-Lys組之間無顯著差異(P>0.05)。結(jié)果表明,在低鹽(1% NaCl)條件下,L-Lys的添加所引起的磷酸化水平降低,且與3% NaCl處理組無差異。當(dāng)肌原纖維蛋白整體磷酸化水平降低時,可能會抑制肌肉收縮,代謝酶的活性也會降低[19],減緩糖酵解反應(yīng),影響宰后僵直過程,提高肉的嫩度并促進肉品質(zhì)的提高[20]。

    圖2 雞腿肉磷酸化肌原纖維蛋白SDS-PAGE圖譜Fig.2 SDS-PAGE patterns of phosphorylated myofibrillar proteins from chicken thigh meat

    圖3 雞腿肉肌原纖維全蛋白SDS-PAGE圖譜Fig.3 SDS-PAGE patterns of total myofibrillar proteins of chicken thigh meat

    從圖2、3可以看出,肌原纖維蛋白條帶電泳結(jié)果平直清晰,蛋白分離效果較好,從中選擇16 個條帶,用ImageQuant TL軟件進行相對光密度分析,得到16 個條帶的磷酸化水平結(jié)果如表2所示。

    表2 添加L-Lys對雞腿肉肌原纖維蛋白磷酸化水平的影響Table 2 Effect of L-Lys on phosphorylation levels of myofibrillar proteins from chicken thigh meat

    注:同列字母不同表示差異顯著(P<0.05),n=3。

    由表2可以看出,條帶8、9、13、14的3% NaCl組較1% NaCl組和0% NaCl組的磷酸化水平顯著降低(P<0.05),條帶1、4、8、10、12、15、16的1% NaCl+0.06%L-Lys組較1% NaCl組的磷酸化水平顯著降低(P<0.05),條帶5、6、9、12的1% NaCl+0.06%L-Lys組與3% NaCl組的磷酸化水平無顯著差異(P>0.05),條帶1、2、3、7、8、10、15、16的1% NaCl+0.06%L-Lys組較3% NaCl組的磷酸化水平顯著降低(P<0.05)。同時,條帶4、5、8、10、11、12的3% NaCl+0.06%L-Lys組較3% NaCl組的磷酸化水平差異不顯著(P>0.05),條帶1、6、9、13、14、16的3% NaCl+0.06%L-Lys組較3% NaCl組的磷酸化水平顯著提高(P<0.05),這可能是由于L-Lys與NaCl之間存在互作關(guān)系,對于大部分條帶而言,當(dāng)NaCl添加量達到3%時,添加0.06%L-Lys并不能繼續(xù)顯著降低雞腿肉的肌原纖維蛋白磷酸化水平甚至?xí)岣吡姿峄?。不同處理組的各條帶與肌原纖維蛋白整體磷酸化水平變化并不完全一致,說明NaCl與L-Lys的添加對于單個蛋白磷酸化水平的影響具有差異性。

    2.2 磷酸化差異蛋白條帶質(zhì)譜鑒定

    選擇16 條磷酸化差異顯著的條帶進行質(zhì)譜鑒定,結(jié)合UniProtKB數(shù)據(jù)庫中給出的蛋白信息,篩選出的蛋白結(jié)果如表3所示,鑒定出的蛋白主要包括3 類,涉及到肌肉收縮、糖酵解過程以及離子運輸?shù)扔嘘P(guān)的蛋白。其中出現(xiàn)了肌漿蛋白的主要成分,主要是由于某些糖酵解酶與肌原纖維蛋白中的原肌球蛋白、肌動蛋白等有很強的結(jié)合力,同時,在離心結(jié)束后,也會存在一些肌漿蛋白質(zhì)溶于肌原纖維蛋白沉淀中,難以完全去除[21]。

    表3 雞腿肉肌原纖維蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果Table 3Identification of myofibrillar proteins in chicken thigh meat by LCMS/MS

    注:—.未鑒定。

    肌原纖維蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明,1、7、8這3 個條帶為未鑒定蛋白,條帶2主要是肌球蛋白重鏈,肌球蛋白重鏈主要與肌肉收縮等肌節(jié)功能有關(guān)。肌球蛋白重鏈的磷酸化通常與輕鏈磷酸化相互介導(dǎo),而在一定的生理狀態(tài)下,肌球蛋白重鏈發(fā)生去磷酸化時,促使肌動球蛋白解離,肌動球蛋白ATPase活性顯著降低,最終導(dǎo)致肉品嫩度和保水性下降[22-24]。表2結(jié)果顯示,添加NaCl后,肌球蛋白重鏈磷酸化水平均顯著提高(P<0.05),而1% NaCl+0.06%L-Lys組、3% NaCl+0.06%L-Lys組的肌球蛋白重鏈較3% NaCl組的磷酸化水平均顯著降低(P<0.05),相對較低的磷酸化水平會抑制肌球蛋白的降解。條帶3主要是M蛋白,它是橫紋肌中肌原纖維M帶的結(jié)構(gòu)成分,主要與肌動蛋白絲結(jié)合,與肌肉收縮有關(guān),可能在肌源纖維結(jié)構(gòu)的維穩(wěn)中發(fā)揮重要作用[25]。而當(dāng)M蛋白發(fā)生磷酸化時,與肌球蛋白的結(jié)合力減弱[26],將加快蛋白降解。添加NaCl后,M蛋白磷酸化水平顯著提高(P<0.05),1% NaCl+0.06%L-Lys組的M蛋白較1% NaCl組的磷酸化水平顯著提高(P<0.05),3%NaCl+0.06%L-Lys組的M蛋白較3% NaCl組的磷酸化水平顯著降低(P<0.05),說明低鹽條件下添加0.06%L-Lys能夠加快蛋白降解,改善肉嫩度,而高鹽條件下添加0.06%L-Lys不利于蛋白降解,不利于肉品質(zhì)。

    條帶4、11分別為α-輔肌動蛋白-2和肌動蛋白,α-輔肌動蛋白-2存在于肌肉組織中,它可以維持肌原纖維結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,與肌肉收縮有關(guān),交聯(lián)肌動蛋白并參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,進而影響肌動蛋白絲的形成[27]。當(dāng)α-輔肌動蛋白-2發(fā)生磷酸化時,會促進肌肉收縮并不利于肌原纖維結(jié)構(gòu)維穩(wěn)[28],1% NaCl +0.06%L-Lys組的α-輔肌動蛋白-2磷酸化水平較3% NaCl組顯著提高(P<0.05),3% NaCl+0.06%L-Lys組較3% NaCl組的α-輔肌動蛋白-2磷酸化水平無顯著差異(P>0.05),說明低鹽條件下添加0.06%L-Lys有利于肌原纖維結(jié)構(gòu)維穩(wěn)。肌動蛋白是一種高度保守的蛋白質(zhì),其參與各種類型的細(xì)胞運動并且在所有真核細(xì)胞中普遍表達。1% NaCl+0.06%L-Lys組的肌動蛋白磷酸化水平較1% NaCl組、3% NaCl組均顯著提高(P<0.05),而當(dāng)肌動蛋白磷酸化程度升高時,不易被鈣蛋白酶降解,同時保水性也會降低[29-30]。

    條帶5、13為肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶1和電壓依賴性陰離子通道。肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶1是一種主要的Ca2+轉(zhuǎn)運酶,負(fù)責(zé)將細(xì)胞溶質(zhì)中的Ca2+重新轉(zhuǎn)運到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并催化ATP的水解,它有助于肌肉激發(fā)或收縮過程中涉及的鈣螯合[31]。各處理組的肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶1磷酸化水平無顯著差異(P>0.05),當(dāng)它發(fā)生磷酸化時,催化ATP水解的活性下降[32]。電壓依賴性陰離子通道是位于線粒體外膜上的孔狀蛋白,也是控制陰離子進出線粒體的重要通道,3% NaCl+0.06%L-Lys組的電壓依賴性陰離子通道磷酸化水平較其他處理組顯著提高(P<0.05),當(dāng)它發(fā)生磷酸化時,能夠干擾ADP的運輸和ATP生物合成[33]。

    已有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)糖酵解相關(guān)的酶發(fā)生磷酸化時,會影響酶的活性,如6-磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶發(fā)生磷酸化時,酶活性提高,促進糖酵解過程,影響肉的pH值變化進而影響肉的僵直過程,不利于提高肉品質(zhì)[34]。條帶6、9、10主要為6-磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶、β-烯醇化酶等參與糖酵解過程的酶,1% NaCl+0.06%L-Lys組的丙酮酸激酶與3% NaCl組的低磷酸化水平差異不顯著(P>0.05),1% NaCl+0.06%L-Lys組的β-烯醇化酶較1% NaCl組和3% NaCl組的磷酸化水平均顯著降低(P<0.05),表明低鹽條件下添加0.06%L-Lys可以通過降低部分糖酵解酶的磷酸化水平達到提高肉品質(zhì)的目的。

    條帶12、14、15和16主要是原肌球蛋白α-1鏈、肌球蛋白輕鏈1、肌球蛋白輕鏈2和肌球蛋白輕鏈3。原肌球蛋白α-1鏈?zhǔn)且环N細(xì)肌絲相關(guān)蛋白,當(dāng)它發(fā)生磷酸化時,有助于調(diào)節(jié)應(yīng)激纖維的形成[35],促進細(xì)胞骨架的重構(gòu)[36],肌球蛋白是細(xì)胞骨架的主要成分,當(dāng)肌球蛋白輕鏈發(fā)生磷酸化時,會影響加快骨骼肌收縮頻率[37],誘導(dǎo)平滑肌收縮,影響細(xì)胞的主要活動等生理過程[38-39],且肌球蛋白輕鏈2磷酸化的程度與肌肉收縮力增強程度呈正比[40],相對較低的磷酸化水平更容易被鈣蛋白酶降解,有利于肉品嫩度的提高。1% NaCl+0.06%L-Lys組的原肌球蛋白α-1鏈、肌球蛋白輕鏈2、肌球蛋白輕鏈3較1% NaCl組的磷酸化水平顯著降低(P<0.05),1% NaCl+0.06%L-Lys組的肌球蛋白輕鏈2和肌球蛋白輕鏈3較3% NaCl組的磷酸化水平顯著降低(P<0.05),說明低鹽條件下添加0.06%L-Lys可以促進蛋白降解。

    3 結(jié) 論

    在1% NaCl條件下添加0.06%L-Lys降低雞腿肉肌原纖維蛋白的整體磷酸化水平,并與3% NaCl的整體磷酸化水平無顯著差異(P>0.05)。在3% NaCl處理組中添加0.06%L-Lys較3% NaCl組的整體磷酸化水平無顯著差異(P>0.05),并顯著提高了6-磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶、肌球蛋白輕鏈1、肌球蛋白輕鏈3的磷酸化水平(P<0.05),表明0.06%L-Lys的添加并不隨著NaCl用量的提高而顯著影響蛋白的磷酸化水平(P>0.05)。與3% NaCl組相比,0.06%L-Lys在1% NaCl條件下顯著降低肌球蛋白重鏈、β-烯醇化酶、肌球蛋白輕鏈2、肌球蛋白輕鏈3磷酸化水平(P<0.05)。L-Lys的添加有可能通過對肌原纖維蛋白磷酸化水平產(chǎn)生的正面效應(yīng),進而促進鈣蛋白酶對蛋白的降解,影響肌肉收縮和宰后僵直成熟過程,為降低肉品中NaCl用量的同時正向調(diào)控肉品質(zhì)提供理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    雞腿肉肌球蛋白肌動蛋白
    冬日海鮮年糕湯與辣炒雞腿肉
    肌動蛋白結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能的研究進展
    30分鐘快手菜:雞絲油條粳米粥
    食品與健康(2018年5期)2018-05-11 03:04:28
    鹽酥雞DIY
    海外星云(2017年24期)2018-01-02 20:36:56
    肌球蛋白磷酸化的研究進展
    肌動蛋白清除系統(tǒng)與凝血—纖溶系統(tǒng)在子癇前期患者外周血中的變化
    高糖對體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性及肌球蛋白輕鏈磷酸化的影響
    心臟型肌球蛋白結(jié)合蛋白與射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭
    主動免疫肌動蛋白樣蛋白7a蛋白引起小鼠睪丸曲細(xì)精管的損傷
    肉桂塊和肉桂粉對鹵雞腿肉揮發(fā)性風(fēng)味成分影響的比較
    在线观看日韩欧美| 午夜福利在线在线| 不卡一级毛片| 丰满的人妻完整版| 亚洲国产看品久久| 黄频高清免费视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品,欧美在线| 久久精品影院6| 美女黄网站色视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 99国产极品粉嫩在线观看| 天堂动漫精品| 欧美日韩一级在线毛片| 可以在线观看毛片的网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 成人三级黄色视频| 国产91精品成人一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月 | 麻豆一二三区av精品| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 人人妻人人看人人澡| 国产极品精品免费视频能看的| 午夜a级毛片| 男人舔女人下体高潮全视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 午夜激情欧美在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品99久久久久久久久| 男女午夜视频在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产亚洲精品av在线| 12—13女人毛片做爰片一| 丰满人妻一区二区三区视频av | 午夜精品久久久久久毛片777| 中文字幕最新亚洲高清| 国产一区二区三区视频了| 欧美午夜高清在线| 日本一二三区视频观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品不卡国产一区二区三区| 美女黄网站色视频| 久久精品91无色码中文字幕| 久久久精品大字幕| 亚洲成人久久性| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲七黄色美女视频| 日韩欧美免费精品| 久久久国产成人免费| 久久热在线av| 国产午夜福利久久久久久| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 最新美女视频免费是黄的| 9191精品国产免费久久| 久久人人精品亚洲av| 天天添夜夜摸| 亚洲精品456在线播放app | 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 中文字幕高清在线视频| 天堂网av新在线| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 曰老女人黄片| 我的老师免费观看完整版| 国产一区二区三区视频了| 又粗又爽又猛毛片免费看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 波多野结衣高清作品| 露出奶头的视频| 又大又爽又粗| 99久久精品一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 长腿黑丝高跟| 无人区码免费观看不卡| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久久久久久午夜电影| 免费看日本二区| 99国产精品一区二区三区| 搡老岳熟女国产| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲专区国产一区二区| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产在线精品亚洲第一网站| 无限看片的www在线观看| 日韩免费av在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲精品久久国产高清桃花| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 日本五十路高清| 日本 av在线| 国产精品久久久av美女十八| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品一及| 成人特级av手机在线观看| 两个人视频免费观看高清| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲成a人片在线一区二区| 高清在线国产一区| 中文资源天堂在线| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品影院久久| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费看十八禁软件| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产三级中文精品| 偷拍熟女少妇极品色| 特大巨黑吊av在线直播| 国产亚洲av高清不卡| 日韩欧美三级三区| 亚洲人与动物交配视频| 日本熟妇午夜| 久久久成人免费电影| 亚洲成av人片免费观看| 中文资源天堂在线| 热99在线观看视频| 在线观看日韩欧美| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲片人在线观看| 欧美乱妇无乱码| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜影院日韩av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 婷婷丁香在线五月| 久久精品国产综合久久久| 曰老女人黄片| 又紧又爽又黄一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美日本亚洲视频在线播放| 97超视频在线观看视频| 一夜夜www| 香蕉国产在线看| aaaaa片日本免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品野战在线观看| 久久人妻av系列| 精品国产乱子伦一区二区三区| 一级毛片精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩欧美精品v在线| АⅤ资源中文在线天堂| 黄色视频,在线免费观看| aaaaa片日本免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久久成人免费电影| 久久久色成人| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 精品无人区乱码1区二区| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久精品国产欧美久久久| 一级毛片精品| 国产高潮美女av| 黄色女人牲交| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲七黄色美女视频| 久99久视频精品免费| 国产激情欧美一区二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品久久久久久久电影 | 精品一区二区三区视频在线观看免费| 午夜影院日韩av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲成人久久性| 欧美日韩乱码在线| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲乱码一区二区免费版| 最近最新免费中文字幕在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲片人在线观看| 国产日本99.免费观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 免费av毛片视频| bbb黄色大片| 国产熟女xx| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 1024手机看黄色片| 一本综合久久免费| 十八禁网站免费在线| 免费在线观看成人毛片| 亚洲无线观看免费| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美黑人巨大hd| 日韩大尺度精品在线看网址| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产精华一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲18禁久久av| 桃色一区二区三区在线观看| 麻豆成人av在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 后天国语完整版免费观看| 91在线观看av| 在线免费观看的www视频| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲最大成人中文| 国产野战对白在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 欧美极品一区二区三区四区| 国内精品久久久久精免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| or卡值多少钱| e午夜精品久久久久久久| 日韩欧美国产在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 97碰自拍视频| 99re在线观看精品视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 最新美女视频免费是黄的| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲激情在线av| 99riav亚洲国产免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 成人特级黄色片久久久久久久| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产激情久久老熟女| 免费无遮挡裸体视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日韩有码中文字幕| 岛国在线观看网站| 午夜福利欧美成人| 国产成人系列免费观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密| x7x7x7水蜜桃| 欧美日本视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久精品91蜜桃| 国产午夜精品久久久久久| 很黄的视频免费| 日韩国内少妇激情av| 久久这里只有精品中国| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 校园春色视频在线观看| 亚洲国产欧美网| 日韩欧美 国产精品| 国产91精品成人一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产男靠女视频免费网站| 香蕉丝袜av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久精品91蜜桃| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品一及| 亚洲人成电影免费在线| 香蕉久久夜色| 久久99热这里只有精品18| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| www.熟女人妻精品国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产不卡一卡二| 久9热在线精品视频| 国内精品久久久久精免费| 在线观看66精品国产| 男女下面进入的视频免费午夜| 这个男人来自地球电影免费观看| 两个人看的免费小视频| 国产黄片美女视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 午夜精品久久久久久毛片777| 99久久99久久久精品蜜桃| 日本 av在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 色尼玛亚洲综合影院| 不卡一级毛片| 亚洲国产欧美人成| 国产视频内射| 黄色日韩在线| 床上黄色一级片| 欧美色视频一区免费| 亚洲成av人片在线播放无| 啦啦啦免费观看视频1| 一本久久中文字幕| 国内精品久久久久精免费| 村上凉子中文字幕在线| 两个人视频免费观看高清| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 不卡av一区二区三区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 色尼玛亚洲综合影院| 日本成人三级电影网站| www.999成人在线观看| bbb黄色大片| 搞女人的毛片| 免费av毛片视频| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 人妻久久中文字幕网| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美在线一区亚洲| 特大巨黑吊av在线直播| 成年女人看的毛片在线观看| 天天添夜夜摸| 精品久久久久久久久久久久久| 此物有八面人人有两片| 这个男人来自地球电影免费观看| 在线国产一区二区在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩国内少妇激情av| 国产黄a三级三级三级人| 婷婷丁香在线五月| 成年女人看的毛片在线观看| 我要搜黄色片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 此物有八面人人有两片| 黄片大片在线免费观看| 国产亚洲精品一区二区www| 日韩欧美三级三区| 国产精品久久电影中文字幕| 老汉色∧v一级毛片| 观看美女的网站| 日本一本二区三区精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲无线观看免费| 国产成年人精品一区二区| 免费看日本二区| 一区二区三区激情视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 99精品在免费线老司机午夜| 丰满的人妻完整版| 中出人妻视频一区二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日韩欧美国产在线观看| 午夜影院日韩av| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产av不卡久久| 色av中文字幕| 老汉色∧v一级毛片| 欧美在线一区亚洲| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日韩av在线大香蕉| 欧美日本视频| 十八禁网站免费在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 男人舔女人的私密视频| 国产黄色小视频在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| av天堂中文字幕网| 露出奶头的视频| 99久久成人亚洲精品观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产成人精品无人区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美zozozo另类| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 成人特级av手机在线观看| 日本黄色片子视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美午夜高清在线| 国产97色在线日韩免费| 国产精品1区2区在线观看.| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| www日本黄色视频网| 国产麻豆成人av免费视频| av福利片在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx| 日本黄大片高清| 最近最新中文字幕大全免费视频| 一本精品99久久精品77| 成年女人看的毛片在线观看| 免费大片18禁| 国产成人啪精品午夜网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成年人黄色毛片网站| 国产精品一区二区免费欧美| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 成人av一区二区三区在线看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 三级毛片av免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产亚洲av嫩草精品影院| 少妇熟女aⅴ在线视频| АⅤ资源中文在线天堂| 久久久久精品国产欧美久久久| 美女大奶头视频| 成人av在线播放网站| 黄色日韩在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 脱女人内裤的视频| 999久久久精品免费观看国产| 久久中文字幕人妻熟女| 在线播放国产精品三级| 亚洲欧美日韩无卡精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲av成人av| 特大巨黑吊av在线直播| 久久久久亚洲av毛片大全| 十八禁人妻一区二区| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久精品国产欧美久久久| av国产免费在线观看| 久久久久性生活片| 国产一区二区三区视频了| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲午夜理论影院| 久久这里只有精品中国| 午夜激情欧美在线| 在线a可以看的网站| 精品免费久久久久久久清纯| 麻豆一二三区av精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 国内精品久久久久久久电影| 一区二区三区激情视频| 亚洲av熟女| 香蕉久久夜色| 国产成人福利小说| 国产综合懂色| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成熟少妇高潮喷水视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲成av人片免费观看| 成年版毛片免费区| 日本免费a在线| 韩国av一区二区三区四区| 99精品欧美一区二区三区四区| 99热这里只有精品一区 | 久久久久久大精品| 窝窝影院91人妻| 国产高清视频在线观看网站| 黄色丝袜av网址大全| 男人舔女人下体高潮全视频| 女人被狂操c到高潮| 精品国产亚洲在线| 久久亚洲真实| 欧美乱码精品一区二区三区| 变态另类丝袜制服| 两个人看的免费小视频| 久久99热这里只有精品18| 婷婷丁香在线五月| 亚洲专区中文字幕在线| a在线观看视频网站| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品九九99| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产男靠女视频免费网站| 操出白浆在线播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 91在线观看av| 欧美黑人欧美精品刺激| 女人被狂操c到高潮| 国产极品精品免费视频能看的| 18美女黄网站色大片免费观看| 无限看片的www在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产在线精品亚洲第一网站| avwww免费| 最新在线观看一区二区三区| 国产三级中文精品| 色播亚洲综合网| 国产综合懂色| 搡老岳熟女国产| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久精品欧美日韩精品| 99久国产av精品| 身体一侧抽搐| 国产成人精品无人区| 韩国av一区二区三区四区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩欧美 国产精品| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久久久久久久中文| 色吧在线观看| 欧美中文综合在线视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产成人aa在线观看| 91字幕亚洲| 午夜激情福利司机影院| 日韩欧美 国产精品| 男插女下体视频免费在线播放| 婷婷亚洲欧美| 成年女人永久免费观看视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产高清激情床上av| 在线看三级毛片| 国产乱人视频| 一本一本综合久久| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品久久视频播放| 黄色日韩在线| 精品久久久久久久末码| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲av电影在线进入| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日本一本二区三区精品| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品久久电影中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久精品国产综合久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 精品一区二区三区视频在线观看免费| x7x7x7水蜜桃| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 午夜视频精品福利| 两性夫妻黄色片| 免费无遮挡裸体视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 亚洲国产欧美网| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产伦在线观看视频一区| 日本免费a在线| 亚洲最大成人中文| 91久久精品国产一区二区成人 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产不卡一卡二| 欧美另类亚洲清纯唯美| 91av网一区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| av国产免费在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 热99在线观看视频| 中文字幕最新亚洲高清| 免费av毛片视频| 国产精品一区二区免费欧美| 国产av不卡久久| 一级毛片高清免费大全| 国产精品爽爽va在线观看网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产成人精品无人区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 午夜免费激情av| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲性夜色夜夜综合| 动漫黄色视频在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 美女午夜性视频免费| 久久这里只有精品19| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 在线免费观看的www视频| 免费观看精品视频网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 黑人操中国人逼视频| 亚洲av电影在线进入| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲精品色激情综合| 九色国产91popny在线| 亚洲精品美女久久av网站| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| or卡值多少钱| 亚洲成av人片在线播放无| av视频在线观看入口| 麻豆成人av在线观看| 黄片大片在线免费观看| 国产高潮美女av| bbb黄色大片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美中文综合在线视频| 波多野结衣高清作品| 日韩欧美在线乱码| 久久久久久久精品吃奶| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲 国产 在线| 首页视频小说图片口味搜索| 久久这里只有精品中国| 天堂网av新在线| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美日韩国产亚洲二区| 悠悠久久av| 久久这里只有精品19| 久久久国产欧美日韩av| 欧美极品一区二区三区四区| 18禁国产床啪视频网站| 国产1区2区3区精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 黄色日韩在线|