EGFR與PD-1、PD-L1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)研究

汪 鋒，胡玉崇，賀 鳳，王 靖，釵麗干,蘇依圖，賀慧杰，武 慧，張 帆，郭 彥，于 虹

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院 1.病理科；2.婦產(chǎn)科；3.院長(zhǎng)辦公室，內(nèi)蒙古 呼和浩特010017)

子宮內(nèi)膜癌(EC)是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，每年新增診斷約有200，000例，是全球婦女發(fā)病和死亡的重要原因[1,2]。早期診斷是EC治療的關(guān)鍵，晚期患者5年生存率低于20%，早期患者5年生存率高于90%[3]。為了患者能得到早期診斷及治療，需要發(fā)現(xiàn)一些敏感的生物標(biāo)志物。

越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤發(fā)生常在腫瘤微環(huán)境(TME)中引起，TME由細(xì)胞外基質(zhì)、血管或淋巴管、成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞和炎癥細(xì)胞組成[4]。程序性死亡受體1 (PD-1)在腫瘤免疫逃避中發(fā)揮了重要作用，是表達(dá)在T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、單核細(xì)胞和B細(xì)胞上的免疫檢查點(diǎn)受體。程序性死亡配體1 (PD-L1)與PD-1相互作用抑制T細(xì)胞功能，誘導(dǎo)腫瘤免疫逃避[5]。Cai[6]等發(fā)現(xiàn)EGFR聯(lián)合其他指標(biāo)可作為子宮內(nèi)膜癌早期診斷、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)和評(píng)價(jià)預(yù)后的指標(biāo)。本文就EGFR與PD-1、PD-L1在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)情況及其相關(guān)性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2012年12月至2019年10月在內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院完成手術(shù)的103例子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本及26例診刮正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本，標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定和石蠟包埋。年齡32-81歲，中位年齡51歲。參照2014年第4版《WHO女性生殖器官腫瘤分類(lèi)》診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)病例進(jìn)行回顧性分析。

1.2 方法

EGFR、PD-1、PD-L1抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，免疫組化染色采用鏈霉菌素-生物素(SP)免疫組織化學(xué)染色方法。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

EGFR陽(yáng)性染色為上皮細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)上棕黃色著色，顯微鏡下選擇10個(gè)具有代表性的高倍視野，分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性染色細(xì)胞百分率，<5%為陰性，≥5%為陽(yáng)性。

PD-1、PD-L1陽(yáng)性染色為腫瘤浸潤(rùn)性免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中呈棕黃色著色，鏡下選擇10個(gè)具有代表性的高倍視野，分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，如Allred等人[7]所述，采用基于比例評(píng)分和強(qiáng)度評(píng)分的兩分系統(tǒng)。比例評(píng)分為陽(yáng)性染色比例：(0)無(wú)著色;(1)<1/100著色;(2)從1/100-1/10著色;(3)1/10-1/3著色;(4)1/3-2/3著色;(5)>2/3著色。強(qiáng)度評(píng)分表示陽(yáng)性染色細(xì)胞的平均染色強(qiáng)度:(0)無(wú)著色;(1)弱著色;(2)中等著色;(3)強(qiáng)著色?？偡?Allred scores)為每例的比例分?jǐn)?shù)和強(qiáng)度分?jǐn)?shù)的總和。Allred評(píng)分為≥1，則為陽(yáng)性;如果Allred評(píng)分為0，則為陰性。

本課題HE切片及免疫組化切片均由兩位副高級(jí)以上病理醫(yī)師一起判讀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 13.0版本。本文分類(lèi)計(jì)數(shù)資料顯著性檢驗(yàn)，采用四格表χ2檢驗(yàn)。EGFR得分與PD-1或PD-L1得分的相關(guān)性,采用Spearman相關(guān)分析。P值<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-1、PD-L1和EGFR在子宮內(nèi)膜癌及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)關(guān)系

在正常子宮內(nèi)膜樣本中PD-1陽(yáng)性表達(dá)率3.8%，而子宮內(nèi)膜癌中PD-1染色陽(yáng)性率占65.0%(P值<0.001)。共有34.6%的正常子宮內(nèi)膜樣本PD-L1染色陽(yáng)性，52.4%的子宮內(nèi)膜癌中 PD-L1染色陽(yáng)性(P=0.104)。另外，23.1%的正常子宮內(nèi)膜樣本EGFR染色陽(yáng)性，76.7%的子宮內(nèi)膜癌 EGFR染色陽(yáng)性(P<0.001)。其中PD1與EGFR在子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜病例中表達(dá)具有顯著性差異(表1)。

2.2 PD-1、PD-L1和EGFR表達(dá)與預(yù)后高危因素的關(guān)系分析

在103例子宮內(nèi)膜癌中PD-1陽(yáng)性表達(dá)67例(65.0%)。蛋白的表達(dá)與預(yù)后的高危因素組織學(xué)分級(jí)(P=0.001)、浸潤(rùn)深度(P=0.016)、腫瘤最大徑(P=0.043)相關(guān)，而與年齡(P=0.160)、淋巴間隙受侵(P=0.509)、宮頸黏膜腺體受侵(P=0.849)無(wú)顯著相關(guān)性。PD-L1陽(yáng)性表達(dá)54例(52.4%)，與組織學(xué)分級(jí)(P=0.025)有顯著相關(guān)性。79例EGFR陽(yáng)性表達(dá)，與組織學(xué)分級(jí)(P=0.002)、浸潤(rùn)深度(P=0.032)、腫瘤最大徑(P=0.003)及淋巴間隙受侵(P=0.019)相關(guān)(表2)。

表1 PD-1、PD-L1和EGFR在子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜病例中表達(dá)情況

表2 子宮內(nèi)膜癌病例中PD-1、PD-L1和EGFR表達(dá)和預(yù)后高危因素的關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中EGFR與PD-1、PD-L1表達(dá)相關(guān)性

在子宮內(nèi)膜癌組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)與PD-1、PD-L1陰性表達(dá)相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析顯示r值分別為0.260及0.295，P值均<0.05，表明EGFR表達(dá)與PD-1、PD-L1表達(dá)具有顯著負(fù)相關(guān)性(表3)。

表3 子宮內(nèi)膜癌病例中PD-1、PD-L1和EGFR表達(dá)相關(guān)性研究

3 討論

本研究對(duì)NCCN[8]指南提出的子宮內(nèi)膜癌高危因素與EGFR、PD-1、PD-L1表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行分析，以顯示三者對(duì)EC早期診斷、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)和評(píng)價(jià)預(yù)后意義。

我們的研究中EGFR表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌高危因素組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、腫瘤最大徑及淋巴間隙受侵相關(guān)。Cai[6]等發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)與FIGO分期、分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與本研究相一致。

我們的研究中在正常子宮內(nèi)膜樣本中PD-1陽(yáng)性表達(dá)率3.8%，而子宮內(nèi)膜癌中PD-1染色陽(yáng)性率達(dá)65.0%，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MO[9]等發(fā)現(xiàn)61.3%的EC中PD-1染色陽(yáng)性，幾乎只在腫瘤浸潤(rùn)性免疫細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細(xì)胞和正常子宮內(nèi)膜組織中均未見(jiàn)表達(dá)，PD-1表達(dá)在中、低分化腫瘤組織比高分化腫瘤更常見(jiàn)，與本研究相一致。本研究中PD-1表達(dá)與預(yù)后的高危因素腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤最大徑相關(guān)，而MO等研究中PD-1在不同臨床分期的患者中表達(dá)無(wú)差異，可能為所研究的樣本群體不同所致。

我們研究中PD-L1在54例(52.4%)子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)，與組織學(xué)分級(jí)有顯著相關(guān)性。MO[9]等研究75例子宮內(nèi)膜癌中，中低分化腫瘤組織中73.7%病例免疫細(xì)胞表達(dá)PD-L1,明顯高于高分化腫瘤，與本研究的趨勢(shì)相一致。

本研究進(jìn)一步分析子宮內(nèi)膜癌病例腫瘤組織中，EGFR與PD-1、PD-L1表達(dá)的相關(guān)性。李向敏[10]等研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變與腫瘤的微環(huán)境存在密切相關(guān)，尤其是和腫瘤中PD-L1的低表達(dá)相關(guān)。2013年，癌癥基因組圖譜將子宮內(nèi)膜癌分為POLE超突變、MSI高突變、低拷貝內(nèi)膜樣和高拷貝漿液樣4種亞型[11]。文獻(xiàn)報(bào)道PD-L1在子宮內(nèi)膜癌MMR缺陷型表達(dá)率更高[12,13]。本研究中發(fā)現(xiàn)EGFR表達(dá)與PD-1、PD-L1表達(dá)具有顯著負(fù)相關(guān)性，提示EGFR與PD-1、PD-L1蛋白表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜癌不同亞型相關(guān)，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，EGFR、PD-1及PD-L1表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后高危因素具有明顯的關(guān)系，有望成為EC早期診斷、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)和評(píng)價(jià)預(yù)后的生物標(biāo)志物。