雙黃藍(lán)抗病毒口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定性研究

羅 躍（瀏陽(yáng)市人民醫(yī)院 瀏陽(yáng) 410300）

雙黃藍(lán)抗病毒口服液，在我院使用已有15年歷史，該口服液有良好的抗流感病毒作用,且不易產(chǎn)生耐藥性,毒副作用小,臨床上主要用于治療呼吸道感染 、小兒病毒性肺炎 、急性扁桃體炎等病毒性疾病 ，具有顯著的療效。處方由大青葉、銀花、蚤休、連翹、山茶根、黃連、北柴胡、喇叭花子、板藍(lán)根、射干、蒲公草、甘草組成。君藥：大青葉、銀花、板藍(lán)根。臣藥蚤休、連翹。使藥為甘草。功效為清熱解毒，祛濕，涼血。通過(guò)薄層層析實(shí)驗(yàn)對(duì)銀花、連翹、大青葉、黃芩進(jìn)行定性鑒別，更好地建立全面完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù),有利于提升該產(chǎn)品的質(zhì)量。為控制該口服液質(zhì)量及臨床安全用藥提供了保障。

1 儀器與材料

儀器：ZF-C型三用紫外分析儀（上海康禾光電儀器有限公司）、定量毛細(xì)管、數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市城東新瑞儀器廠）、超聲波清洗器。LD-2A型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）；硅膠G預(yù)制薄層板；所用對(duì)照藥材與實(shí)驗(yàn)用試劑為：對(duì)照品綠原酸（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-201415）、連翹苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110821-200610）、靛玉紅（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110717-201504），當(dāng)歸（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120927-200512），黃芩苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110715-200815）；自制純化水，所有試劑為分析純。

2 濃縮液的制備

以上十二味中藥飲片，加水煎煮2次，第一次煎煮的時(shí)間為2 h，第二次煎煮的時(shí)間為1 h，將2次煎液混合，經(jīng)濾網(wǎng)濾出，濾過(guò)的液體進(jìn)一步濃縮，使其密度約為1.02（40℃）的浸膏，將95%乙醇加入濃縮液，使?jié)饪s液的含乙醇量達(dá)到65%，放置于冷處24 h。將上清液進(jìn)行加熱，使乙醇揮發(fā)至沒(méi)有乙醇味，加入蔗糖68 g，向上清液中加水至1000 mL，靜置24 h，濾過(guò)，取得濃縮液。

3 供試液的制備

3.1 銀花藥品液，對(duì)照液的制備：取本品濃縮液10 mL置蒸發(fā)皿中，至水浴鍋中揮干，往蒸發(fā)皿中加入5 mL乙醇使其溶化，濾過(guò)，將濾液經(jīng)過(guò)蒸鍋進(jìn)行濃縮，濃縮液至約2 mL時(shí)收取液體，將此濃縮液作為供試品溶液備用。將對(duì)照品綠原酸加入乙醇溶液，溶解制成濃度為1 mg/mL的對(duì)照品溶液

3.2 連翹藥品液，對(duì)照液的制備：取本品濃縮液50 mL，濃縮至約5 mL，加硅藻土5 g，攪拌均勻，干燥，加乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，經(jīng)濾斗過(guò)濾，所得的液體置蒸發(fā)皿中并放于水浴鍋中揮干，加入1 mL甲醇至蒸發(fā)皿中使其溶解，將此液體當(dāng)作供試品溶液。稱取對(duì)照品連翹苷置于量瓶中，在量瓶中加入甲醇稀釋成濃度為1 mg/mL的溶液，將此溶液當(dāng)作對(duì)照品溶液。

3.3 大青葉藥品液，對(duì)照液的制備：取本品濃縮液，加三氯甲烷40 mL，至冷凝回流裝置中加熱1 h，將三氯甲烷液分離取出，將其在水浴鍋中濃縮到液體1 mL，并將此溶液當(dāng)作供試品溶液。將靛玉紅對(duì)照品稱量至量瓶中，將三氯甲烷加入量瓶稀釋成濃度為1 mg/mL的溶液，并將此作為對(duì)照品溶液。

3.4 黃芩藥品液，對(duì)照液的制備：取本品濃縮液50 mL，加乙醚振搖提取2次，單次30 mL，將乙醚液體去除，水液加鹽酸調(diào)節(jié)pH至2～3，將乙酸乙酯與上步提取液混合置于分液濾斗中不斷搖動(dòng)提取2次，每次提取使用乙酸乙酯30 mL，將兩次乙酸乙酯液體合并盛于蒸發(fā)皿中，并置于水浴鍋中揮干，將1 mL甲醇加入蒸發(fā)皿中使其溶解，將此溶解液體作為供試品溶液備用。將對(duì)照品黃芩苷置于量瓶中，將一定體積的甲醇稀釋配制成濃度為1 mg/mL的溶液，將此溶液當(dāng)作對(duì)照品溶液。

3.5 陰性對(duì)照液的制備：取缺銀花、連翹、大青葉、黃芩的雙黃藍(lán)抗病毒口服液藥材，分別按照濃縮液制備下的制備工藝，制成濃縮液，分別按照樣品液制備方法制成銀花陰性對(duì)照液、連翹陰性對(duì)照液、大青葉陰性對(duì)照液、黃芩陰性對(duì)照液。

4 薄層色譜條件與結(jié)果

4.1 銀花的定性鑒別：依據(jù)TLC法（2015年版《中國(guó)藥典》第四部收錄的通則0502）中的規(guī)范進(jìn)行操作，用移液管將三種溶液各吸取10 μL，在硅膠G薄層板同一水平線上點(diǎn)樣，將乙酸丁酯-甲酸-水（70∶25∶25）的上層溶液加入層析缸，讓溶劑向上展開(kāi)至薄層板2/3，將硅膠G薄層板取出，并置于室溫中晾干，選擇365 nm的紫外光燈下進(jìn)行斑點(diǎn)的鑒別。在硅膠G薄層板中供試品與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置，顯示同樣顏色的熒光斑點(diǎn)。在對(duì)應(yīng)位置空白對(duì)照液沒(méi)有此斑點(diǎn)。定位Rf=0.45。結(jié)果見(jiàn)圖1。

4.2 連翹的定性鑒別：依據(jù)TLC法（2015年版《中國(guó)藥典》第四部收錄的通則0502）中的規(guī)范進(jìn)行操作，用移液管將三種溶液各吸取10 μL，在硅膠G薄層板同一水平線上點(diǎn)樣，將三氯甲烷-甲醇（20∶3）的上層溶液加入層析缸，讓溶劑向上展開(kāi)至薄層板2/3，將硅膠G薄層板取出，并置于室溫中晾干，用10%的硫酸乙醇溶液噴向薄層板，并將板加熱（105℃）至顯示清晰顏色的斑點(diǎn)。將板放置于日光下鑒定。在硅膠G薄層板中供試品與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置，顯示同樣顏色的熒光斑點(diǎn)。在對(duì)應(yīng)位置空白對(duì)照液沒(méi)有此斑點(diǎn)。定位Rf=0.38。結(jié)果見(jiàn)圖2。

4.3 大青葉的定性鑒別：依據(jù)TLC法（2015年版《中國(guó)藥典》第四部收錄的通則0502）中的規(guī)范進(jìn)行操作，用移液管吸取供試品溶液、空白對(duì)照液各10 μL，對(duì)照品溶液5 μL，在硅膠G薄層板同一水平線上點(diǎn)樣，上層溶液加入層析缸，讓溶劑向上展開(kāi)至薄層板2/3，將硅膠G薄層板取出，并置于室溫中晾干，選擇365 nm的紫外光燈下進(jìn)行斑點(diǎn)的鑒別。在硅膠G薄層板中供試品與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置，顯示同樣顏色的熒光斑點(diǎn)。在對(duì)應(yīng)位置空白對(duì)照液沒(méi)有此斑點(diǎn)。定位Rf=0.48。結(jié)果見(jiàn)圖3。

4.4 黃芩的定性鑒別：依據(jù)TLC法（2015年版《中國(guó)藥典》第四部收錄的通則0502）中的規(guī)范進(jìn)行操作，用移液管將三種溶液各吸取10 μL，在硅膠G薄層板同一水平線上點(diǎn)樣，將乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）的上層溶液加入層析缸，讓溶劑向上展開(kāi)至薄層板2/3，將硅膠G薄層板取出，并置于室溫中晾干，用2%三氯化鐵乙醇溶液噴在薄層板上。將板放置于日光下，在硅膠G薄層板中供試品與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置，顯示同樣顏色的熒光斑點(diǎn)。在對(duì)應(yīng)位置空白對(duì)照液沒(méi)有此斑點(diǎn)?？瞻讓?duì)照液無(wú)此斑點(diǎn)。定位Rf=0.32。結(jié)果見(jiàn)圖4。

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)中雙黃藍(lán)抗病毒口服液：銀花的鑒別：展開(kāi)劑曾嘗試使用三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）作為展開(kāi)劑[1]，陰性出現(xiàn)干擾，分離效果不理想。后采用以乙酸乙酯一甲酸一水（10∶1.6∶2.4）[2]為展開(kāi)劑，出現(xiàn)明顯拖尾現(xiàn)象.后以乙酸丁酯-甲酸-水（70∶25∶25），分離效果好。

連翹的定性鑒別：展開(kāi)劑曾用三氯甲烷一甲醇（8∶1）展開(kāi)[3]，斑點(diǎn)沒(méi)有分離出來(lái)，達(dá)不到鑒別效果。后嘗試乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）展開(kāi)，存在很明顯的拖尾現(xiàn)象。后通過(guò)極性調(diào)整展開(kāi)劑采用三氯甲烷-甲醇（20∶3）為展開(kāi)劑分離效果好。

大青葉的定性鑒別：曾嘗試使氯甲烷-乙醇-濃氨水（7.5∶7.5∶1），展開(kāi)[4]，陰性存在干擾，后改用環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶2）為展開(kāi)劑，陰性存在干擾[5]，以環(huán)已烷-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶2）為展開(kāi)劑達(dá)到了預(yù)期效果。

黃芩的定性鑒別：曾嘗試醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）為展開(kāi)劑[6]，陰性存在干擾，后調(diào)整展開(kāi)劑改為醋酸[7]，分離效果不明顯。使極性增大改為以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開(kāi)劑，分離效果明顯，達(dá)到了定性鑒別的目的。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)展開(kāi)劑進(jìn)行摸索，找到了最佳的展開(kāi)劑及配比，使得各種藥材的有效成分得到了很好的分離，使該中藥制劑的質(zhì)量控制得到了很好的保障。下一步可聯(lián)合高效液相色譜法，對(duì)雙黃藍(lán)抗病毒口服液建立指紋圖譜，進(jìn)一步提升中藥制劑的質(zhì)量控制水平。