江香薷配伍的中藥牙膏添加物的研發(fā)與應(yīng)用*

★ 洪滔 李翊 李龍雪 雷丹 彭聰 丁龍艷 付宜謙 王中和 王慶鵬 陳雪劉志勇*（.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004；.江西省人民醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科 南昌 330006）

江香薷M.chinensis-jiangxiangru 為唇形科植物香薷的干燥地上部分帶根全草或地上部分，是江西道地中藥材，味辛，性微溫，歸肺、胃經(jīng)［1］。為常用中藥，入藥有發(fā)汗解表、化濕和中、利水消腫的功效，《中國藥典》（2005 版）將江香薷收載在內(nèi)，江西省宜春、分宜縣和渝水區(qū)等地是有分布或種植，為腸炎寧的成分之一。藥理藥效的研究表明，江香薷中含有很多活性成分，具有解熱和抗炎等藥理作用，江香薷中含有芳香物質(zhì)，該芳香物質(zhì)不僅對口內(nèi)細菌、厭氧菌、病毒及產(chǎn)酸酶有直接的殺滅作用，而且能抑制細菌、病毒、厭氧菌和產(chǎn)酸酶的活性［2］。國內(nèi)中草藥牙膏由于副作用小，發(fā)展時間長，很多中藥被研發(fā)成為添加劑加入牙膏［3-7］，我們探索將江香薷做為主要成分，配伍其他中藥材后，形成一款新型的中草藥牙膏的添加物。

1 材料與方法

1.1 藥品和實驗動物 江香薷，黃芪，金銀花，杭菊由江西匯中飲片公司提供，100 %的乙醇、椰油醇（SDS）、CaCO3、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）、甘油生產(chǎn)廠家為國藥集團有限公司，純度為分析純。雌性和雄性SD 大鼠各60 只，體重（200±20）g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，生產(chǎn)合格證號SCXK（湘）2016-0002，實驗場地為江西中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗部SPF 級環(huán)境，使用許可證為SYXK（贛）2017-0004。

1.2 主要設(shè)備 DHG -型鼓風(fēng)干燥箱（型號9055A，上海昕儀）；分析天平（ME204E）；磁力熱攪拌器（DF101S）；智能恒溫電熱套（ZNHW-II）；高精度智能酸度計（S -320）。

1.3 配伍思路 選用藥食兩用中藥材的江香薷、杭菊花、金銀花，與黃芪一起配伍，作為調(diào)整口腔菌群、防治口腔異味和牙周炎牙槽骨過度吸收的中藥組合物，其中江香薷利水消腫、和中化濕、消炎，為君藥；黃芪利水消腫、除毒生肌，是輔助君藥江香薷加強治療主病和主證的藥物，并針對兼病或兼證起治療作用的藥物，它可以改善因為炎癥導(dǎo)致的牙槽骨的過度吸收的問題，為臣藥；杭菊清熱解毒抗菌，是協(xié)助君藥江香薷、臣藥黃芪加強治療作用和直接治療次要兼證的作用；金銀花宣散風(fēng)熱、清解血毒、芳香透達又可祛邪，是本方中引經(jīng)藥，可引方中諸藥直達病所的藥物并調(diào)和諸藥的作用，使其合力祛邪。諸味原料通過配伍，共同發(fā)揮預(yù)防和調(diào)整口腔菌群的作用，從而改善口腔狀況，并預(yù)防牙周病牙槽骨的過度吸收。

1.4 江香薷組合物的制備 江香薷250 g、黃芪200 g、杭菊150 g、金銀花75 g，首先將各中藥原料（干品）進行粉碎；其次將粉碎后的各中藥原料混合均勻并加水浸泡1 h；對浸泡后的中藥原料加水煎煮3 次，三次煎煮時間分別為1 h、0.5 h、0.5 h，過濾得煎煮濾液；然后合并煎煮濾液，并在真空小于-0.08 MPa 條件下進行減壓濃縮，至藥液中含生藥10 g/mL 時停止?jié)饪s成為中草藥牙膏的添加物。對此物按下面方法做實驗觀察效果。

1.5 相關(guān)效果的檢測

1.5.1 對9 種標(biāo)準(zhǔn)菌株的影響實驗 江香薷組合提取物，用氯化鈉注射液稀釋成所需要的濃度，采用試管對倍稀釋法，考察不同濃度組合物的提取物對 9 種標(biāo)準(zhǔn)菌株（金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯氏菌、具核梭桿菌、變形鏈球菌、黏性放線菌、中間型普氏菌）的抑菌情況，并測出其最低抑菌濃度。同時選用甲硝唑注射液和市面上某口腔炎噴霧劑做對照。

1.5.2 對口腔潰瘍的影響 將40 只大鼠隨機分為4 組：模型對照組、白云山湯陰東泰藥業(yè)有限責(zé)任公司冰硼含片組（陽性對照組）、本組合大劑量組、本組合小劑量組，每組個數(shù)為10 只。大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，仰臥四肢固定于鼠板。以小棉球置于直徑為4 mm 的玻璃管的一端，其棉球端浸透在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為900 g/L 的苯酚溶液中后取出，將其置于大鼠一側(cè)頰黏膜上約一分鐘。玻璃管移去時可見該區(qū)域有直徑4 mm 左右的白色損害；次日可見大鼠口唇潮濕，流口水，頰黏膜處呈紅腫表現(xiàn)判為口腔潰瘍造模成功。本組合大劑量組：給本組合用相當(dāng)于臨床人日用量的15 倍為限，即用1 250 μL/100g平均分5 次滴入造模的潰瘍處，2 h 的間隔頻率用藥。本組合小劑量組：給本組合415 μL/100g 體質(zhì)量（相當(dāng)于人日用量的5 倍），平均分2 次滴入患處，間隔4 h。冰硼含片組：冰硼含片粉末的使用量為1.5 mg/g，平均分5 次投于患處，間隔2 h，模型對照組大鼠不給藥。對于上述的大劑量組、小劑量組、冰硼含片組，每次用藥后嚴(yán)格禁食、禁水30 min，不間斷給藥6 d。每日給藥前仔細觀察口腔患處愈合狀況，連續(xù)記錄6 d 口腔潰瘍面直徑的變化（以mm 表示）及口腔潰瘍愈合的時間以及數(shù)量變化。愈合的判定標(biāo)準(zhǔn)：潰瘍直徑<1 mm 判為愈合，潰瘍直徑≥1 mm 判為未愈合。

1.5.3 對牙周炎大鼠牙槽骨的影響 選用48 只無齲壞及牙周病的牙體牙列完整的5 周齡SD 大鼠，雌雄兼用，體重（200±20）g。隨機分成模型對照組和正常對照組，復(fù)方氯己定含漱液（陽性治療組，江蘇晨牌邦德藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20058018），中藥組合物A 組（按劑量分成低中高組）：組合物A 低劑量組0.5 mg/kg，組合物A 中劑量組1.5 mg/kg，組合物A 高劑量組4.5 mg/kg，每組8 只大鼠。以羅禮君文獻方法加以改進：使用大鑷子為開口器，眼科用彎剪實施對兩側(cè)牙齒周圍牙齦進行劃割剝離術(shù)，以10%的白砂糖水代替飲水、白砂糖水浸泡的軟飼料代替常規(guī)飼料，直至造模結(jié)束后改用正常飲食，并給予治療，并給予治療，每只動物按0.1 ml/100g 每天兩次口腔內(nèi)滴注各受試藥物，用藥后禁食4h 后再喂食和水。試驗結(jié)束取動物牙槽骨做病理切片觀察牙槽骨狀況。

1.5.4 對口腔粘膜的刺激性 20 只大鼠隨機分為本中藥組合組和正常對照組2 組，每組10 只。江香薷中藥組合2 500 μL/100g （人用量的30 倍），分5 次滴入大鼠兩側(cè)頰黏膜處，4 h 內(nèi)完成。正常對照組大鼠不給任何藥物。24 h 后，觀察記錄給藥部位充血情況和水腫情況，并依據(jù)水腫和充血情況進行評分，同時需要觀察動物有無全身不良反應(yīng)，持續(xù)7d 給藥和觀察，停藥后繼續(xù)觀察7 d。

1.5.5 牙膏的小試生產(chǎn) 委托牙膏企業(yè)對江香薷配伍制劑生產(chǎn)牙膏小樣。按照配方比例，順序?qū)DS、CaCO3、CMC-Na 等原料稱好，研磨，然后將糖精鈉、甘油、等原料溶于定量的去離子水中，攪拌50 min 后可基本無顆粒存在，即可加入江香薷提取物組合，不另外加香精，繼續(xù)攪拌30 min 完成制膏的過程，經(jīng)真空去泡成型后裝管。

2 結(jié)果

2.1 江香薷配伍制劑的抗菌效果比較 江香薷組合活性提取物對需氧和厭氧菌都有較顯著的抑菌作用。其中對大腸埃希氏菌、白色念珠菌、肺炎克雷伯氏菌的抑菌效果要明顯好于口腔炎噴霧劑；對變形鏈球菌、中間型普氏菌的抑菌效果要明顯好于甲硝唑注射液；而對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的抑菌效果與口腔炎噴霧劑基本一致；只有對具核梭桿菌和黏性放線菌的抑菌效果稍差于甲硝唑注射液，結(jié)果見表1。

表1 對需氧菌的抑菌效果比較

2.2 江香薷配伍制劑有助于潰瘍的愈合 與模型對照組對比，連續(xù)給藥6 d，本組合大、小劑量組大鼠口腔潰瘍面直徑減小，口腔潰瘍愈合大鼠數(shù)量增加，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01 或P<0.05），結(jié)果如表2 所示。

表2 各組大鼠口腔潰瘍面直徑對比（，n=10）

表2 各組大鼠口腔潰瘍面直徑對比（，n=10）

注：與模型組比較，※P＜0.01；與陽性對照組比較，﹟P＜0.05。

2.3 江香薷配伍制劑有利于預(yù)防牙周炎牙槽骨的過度吸收 江香薷組合物明顯抑制了實驗性大鼠牙周炎的牙槽骨的吸收，見圖1。

圖1 各組藥物對實驗性大鼠牙周炎的影響

2.4 江香薷組合制劑對大鼠口腔黏膜的刺激性實驗 粘膜充血、水腫評分標(biāo)準(zhǔn)見表3～4 所示，結(jié)果見表5。

表3 粘膜刺激性反應(yīng)及評分標(biāo)準(zhǔn)

表4 粘膜刺激強度賦分后的評價標(biāo)準(zhǔn)

表5 各組多次給藥后口腔黏膜刺激反應(yīng)平均分值（n =10）

從表5 實驗結(jié)果可知：江香薷中藥組合物對大鼠口腔黏膜無刺激性，是一個安全的中藥組合。

2.5 江香薷配伍制劑牙膏的生產(chǎn)應(yīng)用 制備的江香薷牙膏pH 大致呈中性，經(jīng)過100 次摩擦過后的載玻片無劃痕，表明試樣牙膏無過硬顆粒，該牙膏符合牙膏行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)要求。50 ℃的烘箱中穩(wěn)定性實驗前后對比基本無變化，常溫條件下儲存 1 月的牙膏樣品比較也無差異，說明江香薷牙膏樣品具備較強的穩(wěn)定性。

3 討論

口腔是細菌、病毒、真菌進入人體的主要途徑之一，除此以外，還有大量的內(nèi)源性微生物菌群寄生在口腔、牙齒和粘膜表面，這些菌群中有不少是有害菌，影響口腔的健康。另外一方面口腔菌群的失衡也是導(dǎo)致口腔問題的出現(xiàn)。牙膏是維護口腔健康的日化產(chǎn)品，中藥牙膏自1988 年問世以來，得到迅速推廣發(fā)展。中草藥牙膏占據(jù)了中國55%左右的市場份額，其市場規(guī)模也已超過122.1 億元。

中藥藥源豐富，相對安全，副作用少。用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對中草藥進行提取，精制其有效成分加入到牙膏中可抑制有害細菌從而保護口腔健康，江香薷在稀釋倍數(shù)為1∶128 倍時對白色念珠菌有較好的抑制作用，在1∶32 倍時對變形鏈球菌有很好的的殺滅作用，且都優(yōu)于對照組，而這與楊清嶺比較了含有田七總皂甘的田七特效牙膏、洋甘菊提取物的益達牙膏甘菊怡神、含丁香油康齒靈高級中草藥牙膏的主要抑制變形鏈球菌和白色念珠菌的作用類似［5］，本研究以江香薷為主要成分進行中藥配伍組合形成的牙膏添加物，實驗顯示有很好的抑制有害細菌作用。

牙齦炎嚴(yán)重影響牙周和牙槽骨的健康，嚴(yán)重的會導(dǎo)致牙槽骨的丟失，使牙失穩(wěn)，是早期掉牙的重要原因，更重要的是持續(xù)的炎癥所分泌的炎癥因子隨著血流影響全身，控制牙周炎包括牙齦炎是中草藥牙膏的目標(biāo)之一［8-9］。本研究把江香薷和金銀花，黃芪和菊花配伍后形成的添加物，發(fā)現(xiàn)其對于牙周炎下抗牙槽骨的吸收有很好的作用，但其作用機制有待進一步研究。

目前兩面針中藥牙膏、芳草中藥牙膏、黃岑、草珊瑚、三七、馬鞭草等各種用途的中藥牙膏各有特點，其中多以中藥的抗炎、止血、抗過敏等作用為主，而市場調(diào)查發(fā)現(xiàn)多功能的藥物牙膏或具有美白作用的美容藥物牙膏要比單一功能牙膏更能迎合消費者的需求。江香薷是江西道地中藥材，具有很好的安全性，又是藥食同源中藥材，同時具有顯著的抗菌消炎作用，以其添加到牙膏中，不管是水提液或精油都是一個很有前景的牙膏添加物，利用中藥配伍的理論形成的中藥配合物形成的中草藥牙膏具有更多的功能。