DB-WAX 毛細(xì)管柱氣相色譜法檢查藿香正氣水中乙醇量

吳麗榮，陳肇娜，蘇麗婷，石焱芳

（泉州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 藥學(xué)院，福建 泉州 362000）

前 言

藿香正氣水是一種由蒼術(shù)、陳皮、甘草浸膏、厚樸（姜制）、白芷、茯苓、廣藿香油、大腹皮、生半夏、紫蘇葉油等十味藥，以乙醇和水作為溶劑經(jīng)過一系列工序制得的酊劑[1]。采用氣相色譜法檢查藿香正氣水的乙醇量（應(yīng)為40%～50%），采用氰丙基苯基-二甲基聚硅氧烷（6∶94）為固定液的毛細(xì)管柱（屬于中等極性柱），以正丙醇為內(nèi)標(biāo)物[2]氣相色譜法進(jìn)樣量非常小，進(jìn)樣量很難保證準(zhǔn)確。內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點是進(jìn)樣量和色譜操作條件的微小變化對定量結(jié)果的影響不大，只要保證不超過柱的裝載量，且被測組分和內(nèi)標(biāo)物都能出峰并完全分離即可[3]。外標(biāo)法由于色譜條件很難保持一致，容易發(fā)生誤差[4]。本文采用以鍵合交聯(lián)聚乙二醇（PEG-20M）為固定液的石英毛細(xì)管柱（強(qiáng)極性柱[5]，簡稱DB-WAX）氣相色譜儀，以正丁醇為內(nèi)標(biāo)物的內(nèi)標(biāo)法測定乙醇量，方法快速、簡便，適用于藿香正氣水中乙醇量的檢查。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國安捷倫7820A 氣相色譜儀（配置EZChrome操作系統(tǒng)）；美國安捷倫DB-WAX 石英毛細(xì)管柱（30.0m×0.25mm，0.25μm）；氫火焰離子化檢測器。

1.2 試藥

無水乙醇（優(yōu)級純，含量大于99.8%）和正丁醇（分析純）均為西隴化工股份有限公司生產(chǎn)；藿香正氣水為云南白藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號為WTDA1711。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 正丁醇溶液的配制

精密量取恒溫至20℃的正丁醇（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)）5mL，置100mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm 微孔濾膜濾過。

2.1.2 乙醇溶液的配制

精密量取恒溫至 20℃的無水乙醇 5mL，置100mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過。

2.1.3 對照品溶液的配制

按照藥典規(guī)定，精密量取恒溫至20℃的無水乙醇5mL，置100mL 量瓶中，精密加入恒溫至20℃的正丁醇5mL，用水稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm 微孔濾膜濾過。

2.1.4 供試品溶液的配制

按照藥典規(guī)定，精密量取恒溫至20℃的供試品10mL，置100mL 量瓶中，精密加入恒溫至20℃的正丁醇5mL，用水稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm 微孔濾膜濾過。

2.2 色譜條件

美國安捷倫DB-WAX 石英毛細(xì)管色譜柱（30.0m×0.25mm，0.25μm）；載氣：氮氣（純度 >99.99%）；進(jìn)樣口溫度：200℃；壓力：9.2723psi；進(jìn)樣量：1μL；分流進(jìn)樣，分流比為 20∶1；FID 檢測器溫度：250℃；氫氣流量：30mL/min；氮氣流量：40mL/min；空氣流量：300mL/min；柱箱溫度按表1 采用程序升溫的控制模式。

表1 柱箱溫度程序升溫設(shè)置參數(shù)Table 1 The programming temperature parameters for column box

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

在2.2 項所述色譜條件下進(jìn)行測定，分別進(jìn)樣正丁醇溶液、乙醇溶液、對照品溶液各1μL，記錄色譜圖。根據(jù)正丁醇溶液和乙醇溶液的保留時間，確定對照品溶液中第一個峰為乙醇，第二個峰為正丁醇（圖1）。其中對照品溶液中：乙醇峰的保留時間tR1=3.60min；峰寬 W1=0.11min，根據(jù)公式計算出乙醇的理論塔板數(shù)為17146；正丁醇峰的保留時間tR2=5.27min；峰寬W2=0.10min，根據(jù)公式R=計算出乙醇與正丁醇的分離度為15.9。

圖1 對照品溶液的色譜圖Fig. 1 The chromatogram of reference substance solution

2.4 工作曲線的繪制

按照文獻(xiàn)[6]方法：精密量取無水乙醇1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL分別置100mL量瓶中，各精密加入5mL正丁醇（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)），用水稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾。各取1μL 注入氣相色譜儀中，在2.2項所述色譜條件下，記錄色譜圖。以乙醇的濃度為橫坐標(biāo)，以乙醇峰面積與正丁醇峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，得回歸方程為y=17.3380x-0.0086（r=0.9998,n=5）。

2.5 精密度試驗

按照文獻(xiàn)[7]方法，在2.2 項所述色譜條件下分析2.1.3 所配制的對照品溶液，記錄色譜圖。進(jìn)樣量為1μL，連續(xù)進(jìn)樣6 針。測得乙醇峰面積與正丁醇峰 面 積 的 比 值 分 別 為 0.8615、0.8572、0.8726、0.8702、0.8751 和 0.8618，其 RSD=0.83%（n=6）。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批號的藿香正氣水6 份，按2.1.4 項下方法配制后，在2.2 項所述色譜條件下分別進(jìn)樣分析，進(jìn)樣量為1μL，每份各進(jìn)一針，記錄色譜圖，測得乙醇峰面積與正丁醇峰面積的比值分別為0.7617、0.7532、0.7546、0.7625、0.7706 和 0.7483，其 RSD=1.1%（n=6）。

2.7 穩(wěn)定性試驗

按照文獻(xiàn)[8]方法，取同一份藿香正氣水按2.1.4項下方法配制后，在2.2 項所述色譜條件下，分別隔0、1、2、4、6、12h 測定一次，其中乙醇峰面積與正丁醇峰面積的比值分別為 0.7711、0.7689、0.7785、0.7804、0.7726 和 0.7684，其 RSD=0.65%（n=6）。表明供試品溶液在12h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 校正因子測定

按《中國藥典》（2015 年版）四部規(guī)定方法，按2.1.3 項下方法配制兩份對照品溶液，在2.2 項所述色譜條件下平行測定。每份對照品溶液進(jìn)樣3 針，記錄乙醇峰面積與正丁醇峰面積，測得數(shù)據(jù)見表2，計算出平均校正因子為1.16（RSD=1.1%）。

表2 校正因子測定的相關(guān)數(shù)據(jù)Table 2 The relevant data of the determination of correction factor

2.9 供試品測定

表3 供試品中乙醇量測定的相關(guān)數(shù)據(jù)Table 3 The relevant data of the determination of ethanol in the samples

按《中國藥典》（2015 年版）四部規(guī)定方法，按2.1.4 項下方法配制兩份供試品溶液，在2.2 項所述色譜條件下平行測定。每份供試品溶液進(jìn)樣3 針，記錄乙醇峰面積與正丁醇峰面積，測得數(shù)據(jù)見表3。根據(jù)表2 中平均校正因子為1.16，可計算出供試品溶液中乙醇量平均值為4.4%，再乘以稀釋倍數(shù)10，則該批供試品藿香正氣水中乙醇量為44%。

3 討 論

《中國藥典》（2015 年版）一部中收載的藿香正氣水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，要求檢查乙醇量，并規(guī)定應(yīng)為40%～50%。本文按照藥典的配制方法，以水為溶劑，以正丁醇為內(nèi)標(biāo)物。水的極性非常大，故嘗試選擇DB-WAX 極性柱；正丁醇的沸點比正丙醇高，毒性較小，故嘗試作為內(nèi)標(biāo)物。經(jīng)驗證，本文報道的方法可行，操作簡便，分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，具有參考價值。