結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在輔助診斷骨結(jié)核中的應(yīng)用價(jià)值分析

饒濤 竇吉辰 劉思源

【摘 要】目的：分析探討結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）在輔助骨結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法：通過對(duì)本院161例疑似骨結(jié)核患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)，病原學(xué)、影像學(xué)和組織病理學(xué)檢查結(jié)果，以及臨床抗結(jié)核治療效果開展診斷，確認(rèn)骨結(jié)核患者81例，非骨結(jié)核患者80例。治療前所有患者均接受過結(jié)核菌素純蛋白衍生物（TB-PPD）試驗(yàn)及T-SPOT.TB。對(duì)T-SPOT.TB在輔助診斷骨結(jié)核中的效能進(jìn)行分析。結(jié)果：T-SPOT.TB輔助診斷骨結(jié)核的敏感度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于TB-PPD試驗(yàn)數(shù)據(jù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷敏感性、特異性較高，可作為輔助工具來診斷骨結(jié)核[1]。

【關(guān)鍵詞】T-SPOT.TB;輔助診斷;骨結(jié)核;應(yīng)用價(jià)值

【中圖分類號(hào)】R529.2;R446.6 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1002-8714（2020）02-00-01

1 資料與方法

1.1臨床資料

選取2015年3月至2016年3月本醫(yī)院收治的疑診骨結(jié)核患者161例，男85例，女76例，年齡（32.62±18.3）歲;有卡介苗接種史156例（96.89%），合并肺結(jié)核或肺結(jié)核病史19例（11.8%），糖尿病史9例（5.6%），慢性腎病3例（3.1%）。根據(jù)臨床表現(xiàn)，影像學(xué)、病原學(xué)組織病理學(xué)檢查結(jié)果以及臨床抗結(jié)核治療效果等信息對(duì)患者進(jìn)行診斷分組。結(jié)果骨關(guān)節(jié)結(jié)核組81例，其中脊柱結(jié)核42例、膝關(guān)節(jié)15例、髖關(guān)節(jié)16例;排除骨關(guān)節(jié)結(jié)核的患者80例。

1.2采用北京祥瑞生物制品有限公司生產(chǎn)的結(jié)核菌素純蛋白衍生物進(jìn)行結(jié)核菌素純蛋白衍生物試驗(yàn)（藥品規(guī)格：5支/盒，20IU/ml.每支1ml，國(guó)藥準(zhǔn)字：S10960018），將TB-PPD[0.1ml（2U）]注射于患者前臂掌側(cè)皮內(nèi)，72h后觀察注射部位皮膚的狀況。參照《中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃實(shí)施工作指南》（2008版）標(biāo)準(zhǔn)[9]對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷：硬結(jié)直徑<5mm判斷為陰性;5～9mm判斷為弱陽性;10～20mm判斷為陽性;>20mm或局部出現(xiàn)水泡、淋巴管炎、壞死等判斷為強(qiáng)陽性。檢測(cè)均在患者治療前進(jìn)行。

1.3 T-SPOT.TB

在4h內(nèi)分離患者的新鮮肝素抗凝全血5～10ml，然后按1∶1的比例跟室溫預(yù)熱的RPMI-1640培養(yǎng)液混合均勻，將血樣按3：1比例加在Ficoll淋巴細(xì)胞分離液上層，注意血樣與分離液避免混合[2]。溫度18℃，離心22min，相對(duì)離心力1000g。將分離管中的單核細(xì)胞層轉(zhuǎn)移到新的15ml無菌尖底離心管內(nèi)。外周血單核淋巴細(xì)胞（PBMCs），按試劑盒說明將分離的PBMCs加入預(yù)包被抗人-γ干擾素抗體的板孔中，每個(gè)樣品加4個(gè)板孔，每孔約2.5×105個(gè)PBMCs，然后再將細(xì)胞培養(yǎng)液、ESAT-6抗原，CFP-10抗原及陽性對(duì)照分別加入4個(gè)已加樣板孔中，放置于培養(yǎng)箱中孵育16到20小時(shí)，要求培養(yǎng)箱內(nèi)37℃，5%CO2、并保持一定的濕度[3]。用堿性磷酸酶偶聯(lián)的二抗和底物顯色，洗板后統(tǒng)計(jì)斑點(diǎn)的數(shù)量。判定結(jié)果為：抗原ESAT-6或CFP-10板孔中任意1孔的點(diǎn)數(shù)減去對(duì)照孔點(diǎn)數(shù)大于或等于6判定為陽性，點(diǎn)數(shù)小于6判定為陰性。本檢測(cè)均在患者治療前進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別對(duì)T-SPOT.TB和TB-PPD兩種試驗(yàn)的敏感度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽性預(yù)測(cè)值、陽性預(yù)測(cè)值進(jìn)行計(jì)算，采用x2進(jìn)行檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

比較發(fā)現(xiàn)，T-SPOT.TB診斷骨結(jié)核的敏感度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值以及陰性預(yù)測(cè)值均高于TB-PPD試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1～3。

3 討論

傳統(tǒng)方法采用活檢結(jié)核分枝桿菌的方式來檢測(cè)早期骨結(jié)核，此種方法取材難，準(zhǔn)確率低，其檢測(cè)的敏感度、特異度不是很理想，效果也不明顯，一直以來醫(yī)生們都苦于沒有一種有效的方法來診斷早期骨結(jié)核[4]。進(jìn)幾年，核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）做為一種新的早期篩查方法，具有簡(jiǎn)便、快捷、成本低的特點(diǎn)，在結(jié)核病的診斷等方面因診斷效果明顯而被廣泛推廣應(yīng)用，成為目前診斷結(jié)核感染的一種常用方法[5]。本研究通過T-SPOT.TB與TB-PPD兩種試驗(yàn)對(duì)骨結(jié)核的診斷效能進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)T-SPOT.TB輔助診斷骨結(jié)核的敏感度為97.88、特異度為92.56、陽性預(yù)測(cè)值為92.33，陰性預(yù)測(cè)值為98.58均高于TB-PPD試驗(yàn)數(shù)據(jù)的51.23，73.15，69.51，61.24，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這種新的診斷方法為骨結(jié)核的檢測(cè)提供了更方便、快捷的方式，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，在輔助檢測(cè)骨結(jié)核上取得了良好的效果。

綜上所述，T-SPOT.TB在骨結(jié)核檢測(cè)過程中有較高的檢測(cè)敏感性和特異度，其檢測(cè)效果明顯優(yōu)于TB-PPD試驗(yàn)，而且整個(gè)檢測(cè)過程僅需要兩天的時(shí)間、檢測(cè)效率高，取材方便，可以作為一種有效的方法來輔助診斷骨結(jié)核，具有很高的臨床推廣應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 吳青，呂幸，李艷，等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在輔助診斷骨結(jié)核中的應(yīng)用價(jià)值[J].廣西醫(yī)學(xué)，2016，38（12）：1649-1650.

[2] 李建華，張文龍，鮑玉成，等.結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在骨結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2015（10）：1770-1772.

[3] 李自軍.結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在骨結(jié)核病診斷中的臨床價(jià)值[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2017，28（5）：388-389.

[4] 苗瑞瑞，張文龍，鮑玉成，等.T-SPOT.TB在骨與關(guān)節(jié)結(jié)核鑒別診斷中的價(jià)值[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，36（1）：76-77.

[5] 馬俊，肖和平.332例骨關(guān)節(jié)結(jié)核的臨床特點(diǎn)分析[C]//第三屆骨關(guān)節(jié)結(jié)核臨床診斷與治療進(jìn)展及其規(guī)范化專題研討會(huì)資料匯編.2015.