不同產(chǎn)地鐵皮石斛中柚皮素和石斛酚含量測(cè)定

陳丹　吳梅青　張廣寧　李金科　李柯

【摘 ?要】目的：對(duì)15份不同產(chǎn)地鐵皮石斛中柚皮素和石斛酚的含量進(jìn)行測(cè)定，為科學(xué)評(píng)價(jià)及有效控制其質(zhì)量提供參考。方法：采用WelchUltimateXB-C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）;以乙腈-0.4%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)269nm，柱溫25℃。結(jié)果：柚皮素和石斛酚質(zhì)量濃度分別在4.31～86.2μg（r=0.9998）、2.57～51.4μg（r=0.9997）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系;平均加樣回收率（n=6）分別為96.74%、99.03%。結(jié)論：不同產(chǎn)地鐵皮石斛中柚皮素和石斛酚含量存在差異。

【關(guān)鍵詞】鐵皮石斛;柚皮素;石斛酚;高效液相色譜法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284 ?????【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ?????【文章編號(hào)】1672-3783（2020）06-0257-01

鐵皮石斛（DendrobiiOfficinalisCaulis）為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobiumofficinale KimuraetMigo的干燥莖，《中國(guó)藥典》一部（2015年版）稱(chēng)其性味甘，微寒，歸胃、腎經(jīng);具有益胃生津，滋陰清熱之功效，臨床上常用于緩解人體疲勞、增強(qiáng)免疫力、改善胃腸道功能、治療糖尿病與輔助抗腫瘤等[1-2]。文獻(xiàn)報(bào)道鐵皮石斛所含柚皮素具有明顯的抗炎、抑菌、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用[3]。聯(lián)芐類(lèi)化合物石斛酚具有抗誘變活性，可阻滯由脂多糖誘導(dǎo)的誘導(dǎo)型的一氧化氮合酶和環(huán)氧合酶-2的表達(dá)[4]。近年來(lái)石斛的保健功能日趨受到重視，人工栽培得到較大的發(fā)展，在全國(guó)多個(gè)省區(qū)（浙江、云南、福建、江西、安徽等）形成了大規(guī)模的人工種植區(qū)域，產(chǎn)地的自然環(huán)境差異大，為考察不同產(chǎn)地鐵皮石斛的質(zhì)量，本試驗(yàn)以柚皮素和石斛酚為指標(biāo)成分，采用RP-HPLC法對(duì)來(lái)自于不同產(chǎn)地的15批鐵皮石斛樣品進(jìn)行質(zhì)量分析，為鐵皮石斛藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)及合理利用該藥用植物資源提供參考。

1儀器、試劑與試藥

高效液相色譜儀（LC-20AT型，日本島津），紫外檢測(cè)器（SPD-20A型，日本島津），電

子分析天平（XPE105，瑞士MettlerToledo，十萬(wàn)分之一），超聲波清洗器（HX-06，武漢

恒信世紀(jì)科技有限公司）。

石斛酚對(duì)照品（批號(hào)：111875-201202）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;柚皮素對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16032406，含量以99.18%計(jì)）由成都曼思特生物科技有限公司提供;乙腈為色譜純（Tedia公司），甲酸為色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）;蒸餾水（華潤(rùn)怡寶飲料（中國(guó)）有限公司）。

鐵皮石斛藥材，無(wú)限極（中國(guó)）有限公司提供，批號(hào)：201603007、201603009、201604009、201605007、20160525、201606009、20160613、20160625、201607007、201607009、20160725、20160825、201609007、201609009、201610009，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員鑒定為蘭科植物鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo的干燥莖。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

WelchUltimateXB-C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）;柱溫：25℃;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.4%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（Time：0→5→10→25→45→60min;B：75%→70%→70%→60%→45%→30%）;檢測(cè)波長(zhǎng)：269nm;流速：1.0ml/min;進(jìn)樣量10μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2對(duì)照品溶液的制備

取柚皮素、石斛酚對(duì)照品各適量，分別精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1mL分別含柚皮素86.2μg、石斛酚51.4μg的對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取鐵皮石斛（批號(hào)：201603007）藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1.0g，精密稱(chēng)定，置100ml圓底燒瓶中，加甲醇50ml，加熱回流提取2h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述2種對(duì)照品溶液0.5、1、2、5、10mL，每種對(duì)照品溶液?jiǎn)为?dú)按濃度由低至高的次序加入至5個(gè)10mL量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣10μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積。以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得回歸方程，柚皮素：回歸方程y=4814x-478.19，r=0.9998;石斛酚：回歸方程y=9495.5x+1764.9，r=0.9997，結(jié)果說(shuō)明柚皮素和石斛酚質(zhì)量濃度分別在4.31～86.2μg/ml、2.57～51.4μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，以柚皮素、石斛酚峰面積計(jì)，結(jié)果：RSD分別為1.28%、1.52%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（201603007），分別于放置0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，以柚皮素、石斛酚峰面積計(jì)，結(jié)果：RSD分別為1.32%、1.75%，表明供試品溶液在24h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（201603007）適量，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算。結(jié)果，柚皮素、石斛酚含量平均值分別為0.1081mg·g-1、0.0275mg·g-1，RSD分別為1.67%、2.39%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批已知含量樣品（201603007）6份，分別加入與供試液中柚皮素、石斛酚約成1∶1對(duì)照品量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品含量，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果柚皮素和石斛酚的平均加樣回收率分別為96.74%（RSD=1.76%）、99.03%（RSD=2.65%），說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.9樣品含量測(cè)定

取15批鐵皮石斛，分別測(cè)定石斛酚、柚皮素含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

3討論

查閱文獻(xiàn)，柚皮素的最大吸收波長(zhǎng)有290nm，280nm，310nm，270nm，226nm等[5-9]，石斛酚的最大吸收波長(zhǎng)有230nm，270nm等[10-11]。采用紫外分光光度法對(duì)柚皮素及石斛酚的甲醇溶液進(jìn)行掃描，結(jié)果柚皮素在290nm處有最大吸收，石斛酚在269nm處有最大吸收，采用290nm和269nm對(duì)2種成分進(jìn)行測(cè)定，柚皮素含量相差不大，但石斛酚在269nm下含量更高，因此選擇269nm作為2種成分的測(cè)定波長(zhǎng)。

不同產(chǎn)地鐵皮石斛含量測(cè)定結(jié)果顯示，安徽霍山產(chǎn)柚皮素及石斛酚均可檢出，且含量高于其它3個(gè)產(chǎn)地，其它3個(gè)產(chǎn)地鐵皮石斛只能檢出柚皮素，石斛酚在鐵皮石斛中的含量很低，與文獻(xiàn)報(bào)道[11]相符。安徽藿山產(chǎn)鐵皮石斛為野生條件下生長(zhǎng)，其它產(chǎn)地均為種植基地栽培，石斛酚含量高低與產(chǎn)地、種植方式的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。

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作者簡(jiǎn)介：

陳丹（1982-），女，漢族，副教授，碩士。主要研究方向：中藥制劑開(kāi)發(fā)及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。