空腸彎曲菌快速檢測試劑盒研制及AOAC驗證

申進(jìn)玲 蔣 原* 趙麗娜 薛 峰 楊捷琳 祝長青 邵景東 韓 偉

（1 上海海關(guān)動植物與食品檢驗檢疫技術(shù)中心 上海200135 2 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 南京210095 3 南京曉莊學(xué)院 南京211171 4 張家港海關(guān)綜合技術(shù)中心 江蘇張家港215600）

空腸彎曲菌是一種人畜共患病病原菌，可通過受污染的食品、水和環(huán)境感染人類，它可引起急性腸胃炎，甚至可并發(fā)嚴(yán)重的格林-巴利綜合征，可導(dǎo)致人呼吸肌麻痹而死亡[1]。在歐美等發(fā)達(dá)國家，該菌已超過沙門氏菌、李斯特菌和志賀氏菌引起的食源性疾病病例數(shù)[2-3]。快速、準(zhǔn)確地對其檢測至關(guān)重要。傳統(tǒng)的基于生化的空腸彎曲菌檢測方法費時費力，且不夠準(zhǔn)確。根據(jù)ISO 10272-1 和GB 4789.9-2014 方法，馬尿酸鹽水解反應(yīng)是區(qū)分空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的唯一生化指標(biāo)。然而，最近發(fā)現(xiàn)一些空腸彎曲菌不能水解馬尿酸鹽或水解馬尿酸鹽的能力很弱，容易導(dǎo)致結(jié)果的誤判[4]。傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的另一個問題是不能檢測“活的不可培養(yǎng)狀態(tài)”的細(xì)菌，而空腸彎曲菌在受到諸如饑餓、壓力等因素脅迫或處于物理損傷狀態(tài)下很容易進(jìn)入此狀態(tài)，在條件適宜時又重新復(fù)活，從而引起疾病[5]。

實時熒光PCR 技術(shù)具有靈敏度高、特異性強、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、簡便快速等優(yōu)點，已成為檢測領(lǐng)域中一種重要的快速檢測手段[6]。作者自主研發(fā)出基于實時熒光PCR 的空腸彎曲菌快速檢測試劑盒，并按照美國分析化學(xué)家協(xié)會（Association of Official Analytical Chemists，AOAC）國際方法委員會制定的食品和環(huán)境表面微生物方法驗證指南“美國分析化學(xué)家協(xié)會國際方法委員會制定的食品和環(huán)境表面微生物方法驗證規(guī)范”[7]對試劑盒進(jìn)行特異性、靈敏度、穩(wěn)健性、批間重復(fù)性/保質(zhì)期、食品基質(zhì)驗證等性能測試。將建立的試劑盒方法用于食品中空腸彎曲菌的快速檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 試驗用菌種及信息見表1 和表2。包括115 株各種來源且遺傳背景多樣的空腸彎曲菌[8]和118 株非空腸彎曲菌株。

表1 所用空腸彎曲菌來源信息一覽表Table 1 The source information of Campylobacter jejuni strains used in this study

1.1.2 培養(yǎng)基和試劑 Bolton 肉湯及其添加劑、Preston 肉湯及其添加劑、哥倫比亞血瓊脂、mCCDA，購自英國OXOID 公司；Campy-Cefex 瓊脂、Skirrow 血瓊脂，購自青島海博生物技術(shù)有限公司；氧化酶試紙、過氧化氫、馬尿酸鹽、吲哚乙酸紙片，購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；彎曲菌顯色培養(yǎng)基、無菌脫纖維羊血，購自上?？片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司；微需氧產(chǎn)氣袋，購自日本三菱瓦斯化學(xué)株式會社；細(xì)菌基因組DNA 提取試劑盒、質(zhì)粒DNA 提取試劑盒，購自天根生化科技（北京）有限公司。

1.1.3 設(shè)備與儀器 微需氧培養(yǎng)罐，日本三菱瓦斯化學(xué)株式會社；恒溫培養(yǎng)箱，德國BINDER；5415R 離心機、移液槍，德國Eppendorf；比濁儀，梅里埃DensiCheck；Nano-Drop ND-1000分光光度計，美國Nano-Drop 科技公司；實時熒光PCR儀器，美國ABI StepOne Plus、美國ABI 7500/7500 fast、美國Bio-Rad CFX96。

表2 所用非空腸彎曲菌信息一覽表Table 2 The information of non-Campylobacter jejuni strains used in this study

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌DNA 模板制備

1.2.1.1 液體培養(yǎng)細(xì)菌DNA 模板制備 對于液體培養(yǎng)的細(xì)菌，吸取1 mL 增菌液12 000 r/min 離心1 min，用500 μL 無菌TE 緩沖液洗滌后，用200 μL TE 緩沖液重懸細(xì)菌沉淀，100 ℃煮沸10 min，12 000 r/min 離心5 min，吸取上清液待用。

1.2.1.2 平板上細(xì)菌DNA 模板制備 對于哥倫比亞血瓊脂，用無菌棉簽挑取適量菌株于無菌TE緩沖液中，調(diào)整麥?zhǔn)蠞岫葹?.5，吸取500 μL 菌懸液100 ℃煮沸10 min，冷卻至室溫，12 000 r/min離心5 min，吸取上清液待用。對于Campy-Cefex和mCCDA 平板，用1 μL 無菌非金屬接種環(huán)挑取平板上的單菌落于100 μL 無菌TE 緩沖液中，100℃煮沸10 min，冷卻至室溫，12 000 r/min 離心5 min，吸取上清液待用。

1.2.1.3 PCR 體系優(yōu)化所用DNA 提取 采用細(xì)菌基因組DNA 提取試劑盒提取NCTC 11168 DNA，并用Nano-Drop ND-1000 測量核酸DNA的質(zhì)量濃度和純度。DNA 濃度計算公式DNA（copies/μL）=（C×NA×10-9）/（n×MW），其中C 代表DNA質(zhì)量濃度（ng/μL），NA代表阿伏伽德羅常數(shù)（6.02×1023），n 代表彎曲菌的基因組長度（約1641 481 bp）[9]，MW代表平均每個堿基對的分子質(zhì)量（660 u）。

1.2.2 試劑盒研制

1.2.2.1 引物探針和內(nèi)部擴(kuò)增對照設(shè)計 針對空腸彎曲菌特異hipO 基因設(shè)計特異的引物探針。經(jīng)NCBI BLAST 后，確保不與其它菌種發(fā)生交叉反應(yīng)。內(nèi)部擴(kuò)增對照（Internal Amplification Control，IAC）DNA 為魚敗血病病毒的一段基因（accession no.X66134），前后分別添加hipO 上下游引物，因此IAC 與hipO 共用引物，但探針不同，空腸彎曲菌檢測探針用FAM 標(biāo)記，IAC 檢測探針用VIC 標(biāo)記（表3）。IAC DNA 共136 bp：GCAAAGAAGCAG CATAAATAGGATCGACCAGCTCAACTCAGGTGT CCTCATGAATTTGAAGACATAAACAAGGGACTG GTCTCCGTCCCAACCAAGATCATCCATCTCCCTT CCAATAACTTCAATGCTATAACTA，黑色加下劃線部分是魚敗血病病毒基因的一段序列。IAC DNA 由上海輝睿生物科技有限公司合成。將IAC DNA 克隆至pGH 載體（長度3 053 bp）上，并轉(zhuǎn)移至包含甲基化酶的大腸桿菌中，采用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒DNA。DNA 質(zhì)量濃度計算公式同1.2.1.3 節(jié)，其中n 代表質(zhì)粒長度（3 053 bp）。

表3 引物探針信息Table 3 Primers and probes used in this study

1.2.2.2 實時PCR 優(yōu)化 首先分別優(yōu)化出空腸彎曲菌和IAC 的單重實時PCR 引物和探針濃度，空腸彎曲菌和IAC 的引物濃度范圍0.2～1.2 μmol/L，探針濃度范圍0.12～0.6 μmol/L，然后采用優(yōu)化好的引物探針濃度進(jìn)行多重（含內(nèi)標(biāo)）實時PCR。含內(nèi)標(biāo)的實時PCR 反應(yīng)體系共25 μL，包括12.5 μL 2×PCR Master Mix，優(yōu)化好的空腸彎曲菌和IAC引物探針，DNA模板為4.7×100～4.7×106copies 的空腸彎曲菌10 倍倍比稀釋DNA 樣品，分別用101～106copies 的IAC DNA 與上述各濃度的空腸彎曲菌DNA 共擴(kuò)增，測試目標(biāo)基因和IAC擴(kuò)增情況。PCR 反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性5 s，60 ℃退火延伸34 s，40 個循環(huán)。

1.2.3 試劑盒特異性測試 采用1.2.1.2 節(jié)平板上細(xì)菌DNA 模板制備方法，提取表1 和表2 菌株的DNA，按照試劑盒使用說明，在3種實時熒光PCR 儀器包括ABI StepOne Plus（ROX I）、ABI 7500 fast（ROX II）和Bio-Rad（不適用ROX）上進(jìn)行特異性測試。

1.2.4 試劑盒靈敏度測試 將空腸彎曲菌標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC 11351 菌懸液10 倍倍比稀釋，按照1.2.1.1 節(jié)方法提取各稀釋液DNA，同時吸取0.1 mL 各稀釋度菌懸液涂布于Campy-Cefex 計數(shù)，在ABI 7500 上測試其靈敏度。

1.2.5 抗反復(fù)凍融能力測試 將試劑盒反復(fù)凍融1 次、5 次、10 次、20 次和30 次后，用NCTC 11168 DNA 稀釋10 000 倍，在AB7500 上做測試，比較目的基因Ct 值和熒光信號值的變化。

1.2.6 穩(wěn)健性測試 試驗過程中可能發(fā)生的合理范圍內(nèi)的小的參數(shù)的改變，以及因操作者不同引起的參數(shù)的改變，可能會引起測試結(jié)果的改變，因此按照AOAC 微生物方法驗證規(guī)范，需要將其引入驗證過程中。表4 列出了穩(wěn)健性測試的參數(shù)變化組合，共選擇3 個參數(shù)：增菌液體積、菌體加熱裂解時間和DNA 模板添加量。采用11 株空腸彎曲菌和5 株同屬的其它彎曲菌分別按照9 組不同的參數(shù)組合提取DNA 并在ABI StepOne Plus上進(jìn)行PCR，與正常組合（組合9）比較目的基因檢出情況。

1.2.7 保質(zhì)期/批間重復(fù)性測試 根據(jù)AOAC 微生物方法驗證規(guī)范，按照哥倫比亞血瓊脂上菌株DNA 提取方法，提取11 株空腸彎曲菌和5 株同屬的其它彎曲菌DNA，采用新生產(chǎn)的試劑盒、處于保質(zhì)期內(nèi)（生產(chǎn)4 個月后）的試劑盒和剛過保質(zhì)期（生產(chǎn)1年后）的試劑盒，在ABI 7500 fast 上進(jìn)行PCR。

表4 穩(wěn)健性測試中的參數(shù)變化組合Table 4 The combination of parameters in the robustness study

1.2.8 空白樣本加標(biāo)試驗 基質(zhì)驗證方法按照AOAC 微生物方法規(guī)范進(jìn)行。選擇雞肉、蔬菜和牛奶為基質(zhì)，樣品事先經(jīng)過ISO 10272-1 檢測不含空腸彎曲菌。經(jīng)過大量初期測試，對于每種基質(zhì)選取合適的空腸彎曲菌接種量，以達(dá)到部分檢出水平。稱取10 g 雞肉（或蔬菜）25 份，將6.4 CFU/10 g的空腸彎曲菌NCTC 11351 菌株分別接種于20份雞肉和20 份蔬菜中，其余5 份雞肉和蔬菜樣品為空白對照。將90 mL Preston 增菌液加入每份樣品中，按照1.2.1.1 節(jié)的方法培養(yǎng)菌株和提取DNA，在ABI 7500 上進(jìn)行PCR。同時，將各增菌液劃線于各種選擇性培養(yǎng)基。

牛奶中空腸彎曲菌檢測按照美國FDA BAM方法。共稱取25 份50 g 牛奶，調(diào)節(jié)pH 至7.6 左右，接種量為500 CFU/50 g 牛奶，共20 份，其余5份作為空白對照。檢樣按照美國FDA BAM 方法處理，42 度微需氧培養(yǎng)48 h 后按照1.2.1.1 節(jié)的方法提取DNA，在ABI 7500 上進(jìn)行PCR。同時，將各增菌液劃線于各種選擇性培養(yǎng)基。

1.2.9 實際樣品的檢測 利用試劑盒方法對50份生鮮雞肉樣品、50 份蔬菜和50 份牛奶樣品進(jìn)行空腸彎曲菌檢測，并與ISO 10272-1 和美國FDA BAM 方法比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 實時PCR 體系優(yōu)化

經(jīng)優(yōu)化，空腸彎曲菌和IAC 最適引物濃度均為0.6 μmol/L，探針最適濃度均為0.24 μmol/L。采用優(yōu)化好的空腸彎曲菌和IAC 引物探針濃度，用101～106copies 的IAC DNA 分別對100～106copies的空腸彎曲菌DNA 測試，結(jié)果表明，當(dāng)IAC DNA濃度≤1×103copies/PCR 時，空腸彎曲菌的檢測靈敏度為4.7 copies/PCR，IAC Ct 值≥32.5，IAC 重復(fù)性不夠好；當(dāng)IAC DNA 濃度>1×104copies/PCR時，IAC 重復(fù)性好，但空腸彎曲菌的靈敏度受到影響；IAC 濃度=1×104copies/PCR 時，空腸彎曲菌的檢測靈敏度與不添加IAC 時相比無明顯差異，IAC Ct 值29.5 左右，重復(fù)性好，因此此為最適IAC濃度（表5）。

表5 IAC DNA 添加量優(yōu)化結(jié)果Table 5 The optimization result of IAC DNA concentrations

2.2 試劑盒組裝

試劑盒的組分見表6，包括擴(kuò)增預(yù)混液、引物探針混合液、ROXI、ROXII、PCR 陽性對照、無菌雙蒸水。該試劑盒所含的試劑可至少做50 次（25 μL/PCR 反應(yīng)），含有不同濃度的ROX，可適用于不同品牌的實時熒光PCR 儀器。

表6 試劑盒各組分名稱及含量Table 6 The components and volume of the kit

2.3 試劑盒的特異性

此試劑盒對115 株空腸彎曲菌均能全部特異地檢出，而對118 株非空腸彎曲菌都不能檢出。在ABI StepOne Plus（ROX I），ABI 7500 fast（ROX II）和Bio-Rad（不適用ROX）3種實時熒光PCR儀上的特異性檢測結(jié)果一致。圖1 為部分菌株在此3 臺儀器上的目標(biāo)基因和IAC 擴(kuò)增圖。

2.4 試劑盒的靈敏度

涂布計數(shù)結(jié)果顯示，NCTC 11351 菌懸液濃度為6.4×107CFU/mL，圖2所示為原液及10 倍倍比稀釋液PCR 擴(kuò)增圖。由此可見，該試劑盒對空腸彎曲菌的檢測靈敏度達(dá)6.4 CFU/mL。

圖1 部分菌株在不同實時PCR 儀器上的擴(kuò)增圖Fig.1 The amplification curves of some strains on different real-time PCR instruments

圖2 試劑盒靈敏度測試結(jié)果Fig.2 The sensitivity results of the kit

2.5 試劑盒抗反復(fù)凍融能力

試劑盒反復(fù)凍融1 次、5 次、10 次、20 次、30次后，其目的基因Ct 值和擴(kuò)增信號值ΔRn 均無明顯變化（表7）。說明此試劑盒抗凍融能力強。

2.6 試劑盒的穩(wěn)健性

結(jié)果顯示，在11 株空腸彎曲菌和5 株同屬的其它彎曲菌中，菌體加熱裂解時間和DNA 模板添加量的變化均不影響PCR 反應(yīng)結(jié)果。對于增菌液體積，除了一株空腸彎曲菌ATCC 43430 對增菌液濃度較為敏感，其余菌株P(guān)CR 反應(yīng)均未受影響。當(dāng)ATCC 43430 增菌液至2.0 mL 時，PCR 反應(yīng)受抑制（目的基因和IAC 均未得到擴(kuò)增），需要將其稀釋10 倍或100 倍，才能得到準(zhǔn)確結(jié)果（表8）。

表7 試劑盒抗反復(fù)凍融能力測試結(jié)果Table 7 The repeated freezing and thawing resistance of the kit

表8 試劑盒穩(wěn)健性測試結(jié)果Table 8 The robustness study results of the kit

2.7 保質(zhì)期/批間重復(fù)性測試

3 個不同批次的試劑盒都能將16 株菌株準(zhǔn)確地檢測出來。表9 列出了3 批試劑盒對11 株空腸彎曲菌的擴(kuò)增Ct 值，對于每株空腸彎曲菌來說，3 批試劑盒Ct 值SD 均小于0.25，說明試劑盒在保質(zhì)期內(nèi)批間重復(fù)性好。

表9 保質(zhì)期/批間重復(fù)性測試結(jié)果Table 9 Stability/lot-to-lot testing results

（續(xù)表9）

2.8 基質(zhì)驗證結(jié)果

運用試劑盒對1.2.8 節(jié)中的人工添加樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，空腸彎曲菌在雞肉和蔬菜中接種量為6.4 CFU/10 g 時，20 份雞肉中試劑盒法檢出10 份陽性，其中9 份通過傳統(tǒng)分離方法確認(rèn)；20 份蔬菜樣品中試劑盒法檢出9 份陽性，8 份樣品全部通過傳統(tǒng)分離方法確認(rèn)；剩余的1 份雞肉樣品和1 份蔬菜樣品試劑盒檢測Ct 值約35，超出了傳統(tǒng)劃線分離方法的檢出限，因此傳統(tǒng)方法未分離到菌株。接種量為500 CFU/50 g 時，20 份牛奶中6 份為陽性，其中全部通過傳統(tǒng)分離方法確認(rèn)（表10）。結(jié)果表明，試劑盒和傳統(tǒng)分離方法結(jié)果基本一致，且試劑盒法比傳統(tǒng)分離方法具有更低的檢出限。

表10 試劑盒基質(zhì)驗證結(jié)果Table 10 Matrix validation results of the kit

2.9 實際樣品檢測

經(jīng)試劑盒法檢測，50 份雞肉樣品中有4 份為空腸彎曲菌陽性，蔬菜樣品和牛奶樣均為陰性。試劑盒法與傳統(tǒng)檢測方法結(jié)果一致。

3 討論

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，實時熒光PCR 技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于各種食源性致病菌包括空腸彎曲菌的快速檢測中[10-17]。目前該技術(shù)已被納入某些食源性致病菌的國際檢測標(biāo)準(zhǔn)中，如US FDA BAM 致瀉大腸桿菌檢測方法[18]、US FDA BAM 克羅諾桿菌檢測方法[19]、ISO/TS 13136-2012產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌檢測方法[20]、美國農(nóng)業(yè)部USDA FSIS 彎曲桿菌的檢測方法[21]等。本研究選取hipO 基因（馬尿酸酶編碼基因）做為空腸彎曲菌檢測的靶點，hipO 基因?qū)漳c彎曲菌具有非常高的特異性[17，22-23]，同時選擇與空腸彎曲菌hipO基因具有非常低同源性的魚敗血病病毒基因作為內(nèi)部擴(kuò)增對照DNA[24]，建立并優(yōu)化內(nèi)部擴(kuò)增對照體系，研制出帶內(nèi)標(biāo)的空腸彎曲菌快速檢測試劑盒。

由于食品樣品中往往含有某些抑制PCR 反應(yīng)的物質(zhì)，有時PCR 檢測結(jié)果陰性可能是由于食品基質(zhì)中的抑制物抑制了目的基因的擴(kuò)增，因此在PCR 反應(yīng)體系中需要添加IAC 以準(zhǔn)確反應(yīng)目的基因擴(kuò)增情況，排除“假陰性”[25]。一些文獻(xiàn)采用非競爭性的IAC 來指示PCR 中的抑制物，這種IAC 的引物與目標(biāo)基因引物不同，不同引物之間容易形成干擾，另外不同引物的最適反應(yīng)條件也不盡相同，IAC 和目標(biāo)基因的擴(kuò)增效率也不同，因此非競爭性IAC 不能準(zhǔn)確反應(yīng)目標(biāo)基因的擴(kuò)增情況[22，26]；本研究采用競爭性IAC，IAC 與空腸彎曲菌hipO 基因共用引物，因此可以較為真實地反應(yīng)目標(biāo)基因的擴(kuò)增情況和PCR 體系中的抑制情況，指示“假陰性”。由于與目標(biāo)基因共用引物，IAC 與目標(biāo)基因存在競爭關(guān)系，因此優(yōu)化出IAC 的最適添加量至關(guān)重要，IAC 濃度過高會抑制目的基因擴(kuò)增，IAC 濃度過少自身的重復(fù)性不好。本研究發(fā)現(xiàn)IAC DNA 濃度在104copies/PCR 時，既不影響目標(biāo)基因的靈敏度（4.7 copies/PCR），同時自身重復(fù)性較好。

雖然致病菌實時熒光PCR 國際檢測標(biāo)準(zhǔn)中均提供IAC 制備方法及添加量，但需要各實驗室自行制備IAC 并與原反應(yīng)體系優(yōu)化組合后才能進(jìn)行測試，一方面制備過程非常繁瑣，另一方面由于每個實驗室所用的Taq 酶性能差異、反應(yīng)體系組分差異等，可能需要多次優(yōu)化，才能達(dá)到理想的效果，較為費時費力[24，26-27]，影響IAC 的推廣應(yīng)用。由于試劑盒含有優(yōu)化好的IAC 和反應(yīng)體系，結(jié)果穩(wěn)定，具有可比性，目前美國農(nóng)業(yè)部已經(jīng)將某品牌經(jīng)過AOAC 認(rèn)證的彎曲菌快速檢測試劑盒納入其彎曲菌檢測標(biāo)準(zhǔn)中，越來越多的食源性致病菌檢測標(biāo)準(zhǔn)也將納入經(jīng)過驗證的試劑盒快速檢測方法。

本研究按照AOAC 微生物方法驗證規(guī)范對自主研制的空腸彎曲菌快速檢測試劑盒進(jìn)行性能驗證，結(jié)果表明該試劑盒特異性強、靈敏度高、可應(yīng)用于多臺不同品牌實時熒光PCR 儀器、開放性好、抗反復(fù)凍融能力強、穩(wěn)健性好、批間重復(fù)性好、內(nèi)含IAC可防止“假陰性”。對人工添加空白樣本和實際樣品檢測結(jié)果表明，試劑盒法與傳統(tǒng)生化檢測方法結(jié)果基本一致。各有1 份雞肉樣品和1份蔬菜樣品試劑盒檢測結(jié)果為陽性，但傳統(tǒng)檢測方法未分離到菌株，可能是因為空腸彎曲菌菌株進(jìn)入了“活的不可培養(yǎng)狀態(tài)”，這種情況仍需得到重視。試劑盒法未出現(xiàn)“假陰性”結(jié)果，這對于食品企業(yè)或第三方檢測機構(gòu)來說至關(guān)重要，需要避免“假陰性”的出現(xiàn)。

試劑盒可大大縮減檢測周期，簡化檢測流程。對于增菌液PCR 檢測陰性的樣品可不必進(jìn)行后續(xù)操作，直接報告結(jié)果；對于增菌液PCR 檢測陽性的樣品，可直接從選擇性平板上挑取可疑菌落提取DNA 進(jìn)行PCR 鑒定，從而省去了將可疑菌落重新復(fù)蘇及后續(xù)繁瑣的生化鑒定過程。適用于食品中空腸彎曲菌的快速檢測及推廣應(yīng)用。

目前該試劑盒已申請AOAC 操作性能測試方法（Performance tested method，PTM）認(rèn)證，這是我國微生物領(lǐng)域首次申請食源性致病菌快速檢測試劑盒的AOAC PTM 認(rèn)證，這有利于推動國產(chǎn)微生物檢測試劑盒的國際化和規(guī)范化，降低我國微生物檢測的成本，提高我國在世界食源性致病菌快速檢測方面的話語權(quán)。