不同提取方法對刺五加嫩葉中黃酮類成分含量的影響

陳華　關(guān)穎麗

【摘要】 目的：分析比較不同提取方式對刺五加嫩葉中黃酮類成分含量的影響.方法：以刺五加嫩葉為原料，用微波提取法和超聲提取法分別提取其中總黃酮，并利用HPLC法測定其含量.結(jié)果：超聲提取法所得蘆丁的含量為0.3905mg/g，微波提取所得蘆丁的含量為0.3822mg/g.結(jié)論：超聲提取法更有利于蘆丁的提取，本方法操作簡便易行、準確.

【關(guān)鍵詞】 刺五加嫩葉;不同提取方法;蘆丁

【中圖分類號】R9 【文獻標志碼】A 【文章編號】1005-0019（2020）12-099-02

本文旨在利用HPLC法對刺五加嫩葉中總黃酮的含量進行測定，并比較不同提取方式對其含量的影響，為此后進一步研究和開發(fā)刺五加嫩葉的藥用價值奠定基礎(chǔ)[1]。

1 材料、儀器和試劑

刺五加，采自吉林省通化市地區(qū)，摘取刺五加嫩葉部分，粉碎，備用。

Agilent-G1322A型高效液相色譜儀，ACStation色譜工作站（華譜科儀北京科技有限公司）;JA2003P電子分析天平（上海越平科學儀器有限公司）; KQ-500超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;G70D.20CNIP-D2型微波儀（廣東蘭仕-微波生活電器制造有限公司）等。

蘆丁對照品（購置國藥集團化學試劑有限公司，批號F20090702，純度98%）;95%乙醇;石油醚;水為娃哈哈純凈水;甲醇;乙腈。所用試劑為分析純或色譜純。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動相：乙腈-0.3%磷酸（17：83），流速：0.8 mL·min-1;檢測波長：300nm;柱溫：常溫;進樣量：20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱定蘆丁對照品粉末3.3mg，加入合適量甲醇，制備成濃度為0.1042mg·mL-1的對照品儲備溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 微波提取[2]

精密稱取2g刺五加嫩葉，浸泡于石油醚中，室溫下靜置2h，過濾，濾去浸提液，重復(fù)操作數(shù)次，至浸提液無色以除去葉綠素。將處理后的藥材置于通風處干燥后，加入60mL 70%乙醇，放入微波爐中，微波功率為500 W，提取時間為65s，取出放至室溫，定容至50mL，備用。

2.3.2 超聲提取[3]

精密稱定1g刺五加嫩葉，加入10mL甲醇溶液浸泡30min，加甲醇溶液定容至50mL。精密稱定，記錄質(zhì)量。60℃超聲提取兩次，每次30min，抽濾，合并濾液，稱重，加入甲醇溶液至超聲前的質(zhì)量，備用。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取上述對照品溶液，依照上述色譜條件進行測定，進樣量依次為4μL、8μL、10μL、15μL、20μL，得色譜圖。以進樣量為橫坐標，色譜的峰面積為縱坐標，繪制蘆丁的標準曲線。所得回歸方程如下：y=14.909x-29.303，R=0.9997。研究表明，蘆丁在4.168×10-4mg ～ 2.084×10-3mg范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取蘆丁對照品溶液，連續(xù)分別進樣5次，進樣量為10μL，記錄峰面積，測定其峰面積的RSD值為2.94%。結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取兩種方法制備的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h的時間間隔，進樣20μL，記錄測定出的峰面積，據(jù)此測定RSD值，計算得出超聲提取的RSD值為2.82%，微波提取的RSD值為1.14%，說明在12小時內(nèi)供試品溶液的穩(wěn)定性較好。

2.7 加樣回收試驗

2.7.1 微波提取法加樣回收試驗

分別精密稱取6份已知含量的刺五加嫩葉粉末各2.0g，精密加入蘆丁對照品溶液，根據(jù)2.3.1項下制備供試品溶液，得色譜圖，并據(jù)此計算加樣回收率。得出微波提取法所得蘆丁的平均回收率為98.2%，RSD值為2.21%，結(jié)果表明加樣回收良好。

2.7.2 超聲提取法加樣回收試驗

根據(jù)2.7.1項及2.3.2項下制備供試品溶液，得出超聲提取法所得蘆丁的平均回收率為98.5%，RSD值為2.10%，結(jié)果表明加樣回收良好。

2.8 樣品含量測定

分別精密吸取微波提取法和超聲提取法制備的供試品溶液，各20μL，進樣，按上述色譜條件測定，得色譜圖，計算峰面積，得出樣品含量。其中保留時間在19min左右的為蘆丁的峰信號。如圖1～3所示。

3 結(jié)果

微波提取法中測得刺五加嫩葉中蘆丁的含量為0.3822mg/g，超聲提取法中測得刺五加嫩葉中蘆丁的含量為0.3905mg/g。

4 討論

刺五加嫩葉中黃酮類成份蘆丁的提取方式有較多，本文主要研究了超聲提取法和微波提取法這兩種方法對提取刺五加嫩葉中蘆丁含量的影響。對比兩種方法的提取效果，微波提取法相較超聲提取法省時，但是通過數(shù)據(jù)顯示超聲提取法提取的蘆丁含量較高，微波提取法提取的蘆丁含量較低。因此綜合各因素，建議采用超聲提取法作為刺五加嫩葉中蘆丁提取的方法。

參考文獻

[1]白雪，胡文忠，姜愛麗，等.刺五加活性成分的研究進展[J].食品工業(yè)科技，2016，4（37）：378-381

[2]劉忠英，晏國全，胡秀麗，等.中藥刺五加中總皂苷的微波輔助提取方法研究[J].藥物分析雜志，2007，27（1）：25-28.

[3]羅虎捷，楊宜婷，黃壽根，等.超聲提取法與索氏提取法提取陳皮黃酮類有效成分的分析比較[J].中藥材，2016， 39（2）：371-374.

基金項目：吉林省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目（201710202093）

通訊作者：關(guān)穎麗（1974-9），女，漢族，吉林通化人，副教授，碩士，主要從事中藥化學成分的活性研究，郵編134002。