非變性Ⅱ型膠原蛋白改善犬骨關(guān)節(jié)炎的研究

王海燕 張曉秋 鄒國慶 劉愛青 閆 征

（1.北京盛美諾生物技術(shù)有限公司，北京 100000；2.北京懿德動(dòng)物醫(yī)院有限公司，北京 100000；3.安徽盛美諾生物技術(shù)有限公司，安徽淮北 235000）

骨關(guān)節(jié)炎是犬的一種退行性骨關(guān)節(jié)炎疾病，也是犬的一種比較常見多發(fā)的疾病。根據(jù)統(tǒng)計(jì)約有20%的1歲以上的犬，存在不同程度的關(guān)節(jié)炎，且在臨床上往往被忽略。隨著年齡的增加骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生率升高，約有95% 的病例發(fā)生在5歲以上的犬。關(guān)節(jié)炎通常影響大型犬，實(shí)際上所有年齡、不同品種的犬都可能發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎，而且所有關(guān)節(jié)都有可能發(fā)生[1]。據(jù)臨床統(tǒng)計(jì)犬骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率髖關(guān)節(jié)為42.5%，后肢膝關(guān)節(jié)18.5%，肘關(guān)節(jié)12.8%[2]。骨關(guān)節(jié)炎對(duì)寵物犬的健康與福利造成了嚴(yán)重的損害。

目前常用的改善癥狀藥物有非甾體類抗炎藥、糖皮質(zhì)激素以及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑如硫酸軟骨素、氨基葡萄糖、透明質(zhì)酸等[3]，但是藥物治療會(huì)有副作用，而營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的效果也備受爭(zhēng)議[4]。非變性II型膠原蛋白（也稱之為含II型膠原蛋白的軟骨粉）20世紀(jì)90年代開始用于人的關(guān)節(jié)炎治療[5]，此后也用于馬和犬骨關(guān)節(jié)炎治療上，具有明顯改善效果，且無任何毒副作用[6-7]。本研究選用非變性II型膠原蛋白治療骨關(guān)節(jié)炎犬，探討其作用效果和機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

由北京懿德動(dòng)物醫(yī)院有限公司征集30只無肝腎疾病的骨關(guān)節(jié)炎犬，平均年齡8±1.54歲，平均體重30kg±3.78kg。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為兩組，一組為對(duì)照組，正常飼喂犬糧；一組為實(shí)驗(yàn)組，每天飼喂添加40mg非變性II型膠原蛋白犬糧。非變性II型膠原蛋白由北京盛美諾生物技術(shù)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)時(shí)間3個(gè)月。根據(jù)參考文獻(xiàn)[8-9]，由臨床醫(yī)生進(jìn)行打分評(píng)估，分別記錄初始和3個(gè)月時(shí)分?jǐn)?shù)。打分方法：（1）整體疼痛評(píng)價(jià)：起來后坐下和坐下后站起來的疼痛和困難；（2）跛行疼痛評(píng)價(jià)：強(qiáng)體力活動(dòng)后進(jìn)行評(píng)估的，包括跛瘸的跡象和四肢的僵硬；（3）四肢疼痛評(píng)價(jià)：拉伸或者彎曲幾分鐘四肢的疼痛來評(píng)估。所有評(píng)分的參數(shù)分成5個(gè)等級(jí)，從0（無癥狀）到5（嚴(yán)重）。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，并進(jìn)行分析比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 整體疼痛評(píng)價(jià)

如圖1所示，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組開始時(shí)整體疼痛分值相似，組間差異不顯著（P>0.05）；3個(gè)月后對(duì)照組整體疼痛有所增加，但與起始值差異不顯著（P>0.05）；而實(shí)驗(yàn)組整體疼痛明顯降低，與起始值相比差異極顯著（P<0.01），且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間差異極顯著（P<0.01）。這這說明飼喂非變性II型膠原蛋白能夠極顯著改善犬骨關(guān)節(jié)炎癥狀，降低起來后坐下和坐下后站起來的困難，并能有效緩解疼痛。

圖1 整體疼痛評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2 跛行疼痛評(píng)價(jià)

如圖2所示，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組開始時(shí)跛行疼痛評(píng)價(jià)分值相似，組間差異不顯著（P>0.05）；3個(gè)月后對(duì)照組跛行疼痛評(píng)價(jià)略有提高，但與起始值差異不顯著（P>0.05）；而實(shí)驗(yàn)組跛行疼痛評(píng)價(jià)明顯降低，與起始值相比差異極顯著（P<0.01），且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間差異極顯著（P<0.01）。這這說明飼喂非變性II型膠原蛋白能夠極顯著改善骨關(guān)節(jié)炎犬的跛行，有效緩解運(yùn)動(dòng)后疼痛，減輕僵硬癥狀。

圖2 跛行疼痛評(píng)價(jià)

2.3 四肢疼痛評(píng)價(jià)

如圖3所示，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組開始時(shí)四肢疼痛評(píng)價(jià)分值相似，組間差異不顯著（P>0.05）；3個(gè)月后對(duì)照組四肢疼痛評(píng)價(jià)略有提高，但與起始值差異不顯著（P>0.05）；而實(shí)驗(yàn)組四肢疼痛評(píng)價(jià)明顯降低，與起始值相比差異極顯著（P<0.01），且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間差異極顯著（P<0.01）。這說明飼喂非變性II型膠原蛋白能夠極顯著降低骨關(guān)節(jié)炎犬四肢疼痛。

圖3 四肢疼痛評(píng)分

2.4 安全性評(píng)價(jià)

表1 開始時(shí)和3個(gè)月后體重

對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組開始時(shí)體重相似，3個(gè)月后對(duì)照組體重略有下降，實(shí)驗(yàn)組有所增加，差異不顯著（P>0.05），見表1。實(shí)驗(yàn)組經(jīng)臨床診斷，無明顯其他病癥，肝和腎功能（谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，血尿素氮，肌酐）相關(guān)數(shù)據(jù)未顯示任何顯著變化，說明非變性II型膠原蛋白具有安全性。

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis）是一種由創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)先天性異常、關(guān)節(jié)畸形、軟骨破裂或破壞等原因造成的慢性、漸進(jìn)性疾病。發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎時(shí)，由于骨的結(jié)構(gòu)之間發(fā)生摩擦可以引起犬關(guān)節(jié)不適、疼痛、活動(dòng)受限和關(guān)節(jié)畸形等癥狀。犬骨關(guān)節(jié)炎最明顯的癥狀就是“跛行”即瘸腿；常見的癥狀還有站立困難，活動(dòng)減少、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)僵硬等1。炎癥因子在骨關(guān)節(jié)炎軟骨病變中起了重要作用；細(xì)胞因子作用導(dǎo)致滑膜組織激活、軟骨內(nèi)在穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變、軟骨下骨受到損害，加速軟骨破壞[10]。

非變性II型膠原蛋白能夠改善骨關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理為口服免疫耐受（Oral tolerance，簡(jiǎn)稱OT），是指口服某種蛋白質(zhì)抗原后，導(dǎo)致局部腸相關(guān)淋巴組織特異免疫，從而抑制全身免疫應(yīng)答，是一種外周免疫耐受形式。非變性II型膠原蛋白是以動(dòng)物軟骨為原料，采用低溫技術(shù)提取技術(shù)，得到的完整保留大分子膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)未發(fā)生變化的膠原蛋白產(chǎn)品，分子量在30萬道爾頓左右[4]。國外也有人研究了非變性II型膠原蛋白對(duì)骨關(guān)節(jié)炎犬的作用。Peal等人2007年對(duì)骨關(guān)節(jié)炎犬飼喂非變性II型膠原蛋白120d和停止飼喂后30d分別進(jìn)行評(píng)估。從總體疼痛、跛行時(shí)疼痛、運(yùn)動(dòng)時(shí)跛行評(píng)分結(jié)果發(fā)現(xiàn)，安慰劑組無效果，而實(shí)驗(yàn)組可以顯著降低骨關(guān)節(jié)炎造成的疼痛；但停止飼喂后30d，疼痛恢復(fù)至原來水平[11]。Gupta等人2011年研究了非變性II型膠原蛋白對(duì)中度骨關(guān)節(jié)炎犬的改善，并以氨糖+硫酸軟骨素/天作為做對(duì)照，實(shí)驗(yàn)時(shí)間150d。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有非變性II型膠原蛋白能夠降低由骨關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的疼痛[6]。

在本研究中，發(fā)現(xiàn)每天飼喂骨關(guān)節(jié)炎犬40mg非變性II型膠原蛋白3個(gè)月后，整體疼痛、跛行以及四肢疼痛明顯改善，且具有安全無毒的特點(diǎn)，與前人研究結(jié)果一致。在國外非變性II型膠原蛋白已經(jīng)廣泛應(yīng)用于犬、貓等寵物食品中，但在國內(nèi)尚屬空白，只有極少數(shù)幾家在犬類營(yíng)養(yǎng)劑中添加，市場(chǎng)潛力巨大。