比濁法與電泳法檢測(cè)單克隆病患者血清免疫球蛋白結(jié)果的差異分析

陳興財(cái) 梁瑞向

【摘要】探討免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法測(cè)定單克隆病患者血清免疫球蛋白結(jié)果的差異情況。方法 收集36例含不同濃度M蛋白的單克隆病患者和16例無(wú)M蛋白的健康體檢者（對(duì)照組）血清標(biāo)本，分別用免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法進(jìn)行免疫球蛋白定量檢測(cè)，對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 無(wú)M蛋白的正常對(duì)照組和當(dāng)M蛋白含量<29.3%時(shí)，兩種方法的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好r2=0.901，結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），當(dāng)M蛋白含量>29.3%時(shí)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異顯著（P<0.05）。結(jié)論 M蛋白含量>29.3%，免疫透射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白的結(jié)果明顯高于電泳法檢測(cè)結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】免疫球蛋白;免疫透射比濁法;瓊脂糖電泳法;M蛋白

【中圖分類(lèi)號(hào)】R392.7 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ?【文章編號(hào)】2107-2306（2020）03-234-02

血清免疫球蛋白（Ig）的檢測(cè)可以判斷機(jī)體體液免疫功能，是免疫性疾病特別是單克隆病輔助診斷和療效監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)。筆者在檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，在用免疫透射比濁法檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤或巨球蛋白血癥等單克隆病患者血清Ig時(shí)，常常出現(xiàn)Ig結(jié)果占球蛋白比例高達(dá)95%甚至超過(guò)球蛋白總量的情況，與血清蛋白電泳檢測(cè)的γ區(qū)免疫球蛋白結(jié)果也存在較大差異。因此，本文擬對(duì)兩種方法測(cè)得的單克隆病患者血清免疫球蛋白結(jié)果是否存在一致性進(jìn)行探討。

1 ?材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象 ?收集2019年4-12月在桂林市人民醫(yī)院檢測(cè)發(fā)現(xiàn)M蛋白的住院及門(mén)診復(fù)診患者36例。男15例，女21例，年齡18～88歲。 另外隨機(jī)選取同期在院檢測(cè)無(wú)M蛋白的患者16例，其中男7例，女9例，年齡22-76歲?；颊呔崭共裳?小時(shí)內(nèi)分離血清，排除溶血、脂血和黃疸標(biāo)本。

1.2儀器和試劑 ? 德國(guó)羅氏Cobas8000 c702全自動(dòng)生化分析儀，羅氏原裝IgA、IgG、IgM、TP試劑及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品。法國(guó)Sebia 全自動(dòng)瓊脂糖電泳分析儀及配套血清蛋白瓊脂凝膠板和試劑，配套掃描儀和分析軟件。

1.3方法

1.3.1 化學(xué)法 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM采用免疫透射比濁法檢測(cè)，根據(jù)免疫球蛋白的組成特點(diǎn)，IgD和IgE在人血清中含量甚微，檢測(cè)IgA、IgG、IgM三種免疫球蛋白就基本可以代表血清免疫球蛋白水平。本文擬將血清中免疫球蛋白=IgA+IgG+IgM，同時(shí)用雙縮脲法檢測(cè)血清總蛋白（TP）。

1.3.2 瓊脂糖電泳法 ?用其專(zhuān)用的電泳梳，每標(biāo)本加樣10ul置全自動(dòng)電泳儀上自動(dòng)完成瓊脂糖電泳，烘干，氨基黑染色，脫色，再烘干。然后應(yīng)用專(zhuān)用掃描儀對(duì)電泳后的蛋白各組分掃描并算出ALB、α1、α2、β、γ球蛋白的百分比，將β區(qū)或γ區(qū)出現(xiàn)的集中濃染帶判讀為M蛋白陽(yáng)性，根據(jù)其峰面積占總峰面積的比例計(jì)算百分比，再根據(jù)血清總蛋白濃度計(jì)算γ區(qū)球蛋白和M蛋白濃度。

1.3.3 結(jié)果差異計(jì)算 比濁法與瓊脂糖電泳法檢測(cè)血清免疫球蛋白的結(jié)果相對(duì)偏差=（化學(xué)法結(jié)果-電泳法結(jié)果）/電泳法結(jié)果×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0和Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 當(dāng)血清標(biāo)本無(wú)M蛋白或M蛋白含量較低時(shí)，免疫透射比濁法與電泳法檢測(cè)免疫球蛋白結(jié)果相關(guān)性良好，見(jiàn)圖1：

2.2 當(dāng)M蛋白含量>29.3%時(shí)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異顯著。見(jiàn)表1

3 討論

隨著老齡化人口的增加，單克隆丙種球蛋白異常的發(fā)生率也明顯上升 。單克隆免疫球蛋白是一種過(guò)度合成的單一類(lèi)型或亞型的異常免疫球蛋白，它的準(zhǔn)確檢測(cè)有助于臨床疾病的診斷和在診療過(guò)程中的療效觀察，尤其是惡性單克隆丙種球蛋白血癥和免疫缺陷綜合征[1]。目前，免疫球蛋白的定量檢測(cè)主要有免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法。根據(jù)Ig的組成，IgD、IgE含量微小，通常檢測(cè)IgG、IgA、IgM這三類(lèi)Ig就可以代表血清免疫球蛋白水平。而血清蛋白電泳的γ區(qū)也主要由IgG、IgA、IgM三種免疫球蛋白組成。

本實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)血清標(biāo)本無(wú)M蛋白或M蛋白含量較低時(shí)，免疫透射比濁法與電泳法檢測(cè)免疫球蛋白的結(jié)果相關(guān)系數(shù)r2=0.901，r=0.9386，回歸方程Y=1.0745x-0.7245，經(jīng)Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，P=0.374，>0.05差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而當(dāng)M蛋白濃度升高到一定程度后，兩種方法檢測(cè)免疫球蛋白的結(jié)果差異顯著（P<0.05）且相對(duì)偏差遠(yuǎn)大于免疫球蛋白檢測(cè)的允許TEa（IgG、IgA和IgM的TEa分別為11.98%、13.5%和16.8%[3]）。分析原因可能為：（1）單克隆免疫球蛋白是一種過(guò)度增殖的異常免疫球蛋白，其可能與各自的多克隆起源的多克隆免疫球蛋白在氨基酸組成和數(shù)量上有所不同，而這可能會(huì)影響其與抗體的結(jié)合，從而影響定量的準(zhǔn)確性;（2）相關(guān)學(xué)者[2]的研究表明在免疫透射比濁法中，異常增殖的IgG型，IgA型，IgM型M蛋白對(duì)其余2種免疫球蛋白的檢查均會(huì)產(chǎn)生干擾，且以正干擾為主，并有M蛋白濃度依賴(lài)性，即M蛋白濃度越高，干擾越大;（3）本研究用到的羅氏公司試劑采用的是預(yù)稀釋方法，即先對(duì)樣本進(jìn)行一定倍數(shù)稀釋后再加入試劑進(jìn)行反應(yīng)，如出現(xiàn)超過(guò)檢測(cè)線性范圍的還可以繼續(xù)再運(yùn)行固定倍數(shù)的稀釋?zhuān)摲m可避免因抗原過(guò)量導(dǎo)致的“鉤狀效應(yīng)”發(fā)生，獲得更寬的檢測(cè)范圍，但同時(shí)也可能因?yàn)闃?biāo)本稀釋破壞了抗原抗體反應(yīng)的基質(zhì)條件而引入了未知的誤差。而血清蛋白電泳是根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、分子量和分子形狀不同而在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不一樣將蛋白質(zhì)區(qū)分開(kāi)，且單克隆的免疫球蛋白也多是出現(xiàn)在γ區(qū)，所以電泳法在方法學(xué)上幾乎不受M蛋白的干擾。

總之，免疫透射比濁法在檢測(cè)單克隆病血清免疫球蛋白時(shí)易受M蛋白的干擾，當(dāng)M蛋白大量出現(xiàn)時(shí)可能導(dǎo)致不能獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果，但臨床實(shí)驗(yàn)室如果采用固定的標(biāo)本處理方式固定誤差，同時(shí)，必要時(shí)向臨床醫(yī)生解釋方法學(xué)的缺陷所引起的實(shí)驗(yàn)誤差，實(shí)際結(jié)果不會(huì)影響臨床醫(yī)生對(duì)病情趨勢(shì)的判斷，且化學(xué)法快速、方便、經(jīng)濟(jì)，更易開(kāi)展。瓊脂糖電泳法雖受M蛋白干擾較小，但需要特殊儀器，且耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，不利于基層醫(yī)院開(kāi)展。因此建議建議臨床采用同一種方法進(jìn)行病情監(jiān)測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]張?jiān)娫?shī)，王薇，趙海建，等.我國(guó)特殊蛋白質(zhì)檢驗(yàn)指標(biāo)允許總誤差和允許不精密度的初步研究[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2016，34（7）：602-607.

[2]韓建華，程歆琦，吳潔，等. M蛋白對(duì)免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白的干擾[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2019，34（3 ）：197-201