3 種黨參提取物體外抗氧化活性探究

馬 銘，白瑞斌，劉景龍，李 蕓，李應(yīng)東，胡芳弟*

（1.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf，素花黨參Codonopsis pilosulaNannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen 或川黨參Codonopsis tangshenOliv.的干燥根。性甘味平，具有健脾益肺、養(yǎng)血生津的功效［1］。

《百草鏡》中記載“黨參，一名黃參，黃潤者良，出山西潞安太原等處。有白色者，總以凈軟壯實(shí)味甜者佳”［2］?！端幓\小品》中記載“西產(chǎn)為上，體糯味甜、嚼之少渣者佳”［3］。因此糖類成分，尤其是有甜味的低聚糖可能也是黨參中的重要活性成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黨參水提物［4-5］、多糖［6-9］、醇提物［10-11］均具有良好的抗氧化活性，但尚未見對(duì)不同品種黨參抗氧化活性物質(zhì)及活性相關(guān)的比較研究，尤其是黨參低聚糖部分的抗氧化活性研究。

本研究從黨參主產(chǎn)地采集2015 年版《中國藥典》規(guī)定的3 個(gè)黨參品種，系統(tǒng)研究了不同品種、產(chǎn)區(qū)黨參乙醇提取物、水提取物、多糖、粗低聚糖及精制低聚糖含有量差異以及黨參各提取部分的體外抗氧化活性，以期為功能因子明確的黨參相關(guān)保健品開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑與儀器 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）（上海源葉生物科技有限公司）；Sephadex G-25（北京索萊寶生物技術(shù)有限公司）；維生素C（中國醫(yī)藥工業(yè)公司北京制藥廠）；無水乙醇（日本Sigma 公司）；葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)110833-201205，中國食品藥品檢定研究院）；其他試劑均為分析純。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本Eyela 公司）；恒溫電加熱板（上海科恒實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；恒溫水浴箱、電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；離心機(jī)（日本Hitachi 公司）；冷凍干燥機(jī)（美國Labconco 公司）；電子自動(dòng)分析天平（德國Sartorius 公司）；BS-100 N 自動(dòng)部分收集器、BT 100 N 數(shù)顯恒流泵（上海青浦滬西儀器廠）；UV-1700 紫外可見分光光度計(jì)（日本Shimadzu 公司）。

1.2 樣品 來自不同產(chǎn)地3 個(gè)品種黨參藥材共40 批，其中黨參1、黨參2 各10 批分別來自甘肅、山西，鑒定為Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf.；素花黨參Codonopsis pilosulaNannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen 共10 批，均采自甘肅文縣；川黨參Codonopsis tangshenOliv.共10 批，均購自荷花池藥材市場。以上黨參樣品均由蘭州大學(xué)藥學(xué)院周印鎖教授鑒定為正品［12］。信息見表1。

表1 樣品信息

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 黨參不同提取物制備

2.1.1 乙醇提取物 黨參粗粉，四分法取樣，精密稱取10 g，加入10 倍量95%乙醇，回流提取2 次，1 h/次，收集濾液，50 ℃，60 r/min 減壓濃縮，蒸干，冷凍干燥至恒定質(zhì)量，得黨參乙醇提取物，計(jì)算得率。平行3 份。

2.1.2 水提取物 將“2.1.1”項(xiàng)下藥渣晾至無乙醇味，加入10 倍量水，煎煮提取3 次，45 min/次，合并濾液，50 ℃，60 r/min 減壓濃縮至原體積的1/4，取1/2 體積上述水提濃縮液（另外1/2 體積用于黨參多糖和寡糖的制備），50 ℃，60 r/min 減壓濃縮，蒸干，冷凍干燥至恒定質(zhì)量，得黨參水提取部分，計(jì)算得率，平行3 份。

2.1.3 粗黨參多糖及粗黨參低聚糖 將 “2.1.2”項(xiàng)下另外1/2 體積濃縮水提液中緩慢加入95% 乙醇至乙醇終濃度為80%，放置過夜后離心，10 600×g離心力離心15 min，收集上清液與沉淀。所得沉淀部分，冷凍干燥至恒定質(zhì)量，得黨參多糖，標(biāo)記為粗黨參多糖；上清液回收乙醇，蒸干，冷凍干燥至恒定質(zhì)量，得粗黨參低聚糖。平行3 份。

2.1.4 黨參低聚糖精制 取適量粗黨參低聚糖溶于少量水中，上2.6 cm×70 cm 的Sephadex G-25 純化［13-14］，蒸餾水洗脫，每管收集5 mL；50 ℃、60 r/min 減壓濃縮至快干，用少量水從濃縮瓶中溶出后，置于-80 ℃冰箱中4 h，冷凍干燥24 h 后即得到精制黨參低聚糖，計(jì)算純化得率，苯酚硫酸法［15］測定其低聚糖含有量。

2.2 DPPH 自由基清除活性測定［16］

2.2.1 樣品溶液制備 精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的黨參乙醇提取物、黨參水提取物、粗黨參多糖、粗黨參低聚糖及精制黨參低聚糖各50 mg，蒸餾水溶解，定容至10 mL，逐倍稀釋至2.50、1.25、0.63、0.31 mg/mL，即得。

2.2.2 活性測定 按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備維生素C 溶液，作為對(duì)照。精密稱取DPPH 20 mg，用無水乙醇溶解并定容至500 mL 棕色量瓶中，得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4% 的DPPH溶液，4 ℃下避光保存，備用。空白組（2 mL 無水乙醇+2 mL DPPH 溶液）、樣品組（2 mL 待測溶液+2 mL DPPH溶液）、本底組（2 mL 待測溶液+2 mL 無水乙醇）。各組進(jìn)行DPPH 自由基清除實(shí)驗(yàn)。吸取各組相關(guān)溶液進(jìn)行混合，避光反應(yīng)30 min，在517 nm 波長下測定A值。對(duì)照品維生素C 溶液同法測定。DPPH 自由基清除率% ＝1-（A樣品-A本底）/A空白。用Origin 8.0 軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果見圖1～2。

3 結(jié)果

3.1 黨參各提取部分得率 采集于黨參主產(chǎn)區(qū)40 批樣品中，黨參乙醇提取物、水提取物、粗黨參多糖及粗低聚糖含有量見表2。

表2 不同品種黨參中各提取物的得率（g/100 g，，n=10）

表2 不同品種黨參中各提取物的得率（g/100 g，，n=10）

由表2 可知，黨參1 與素花黨參的乙醇提取物得率相近，分別為（31.82±2.61）、（34.86±2.05）g/100 g，川黨參的乙醇提取物的得率為（17.94±0.81）g/100 g，約為黨參1 和素花黨參乙醇提取物得率的一半；然而川黨參的水提取物得率為（43.42±0.57）g/100 g，高于黨參1 和素花黨參；值得一提的是，黨參2 的乙醇提取物部分得率僅為其他品種黨參的一半，而水提取物部分的得率在所有樣品中最高；3 個(gè)品種黨參中粗黨參多糖含有量，川黨參高于黨參高于素花黨參。粗黨參低聚糖含有量，黨參高于素花黨參高于川黨參。多糖和低聚糖含有量均為山西產(chǎn)區(qū)的樣品含有量高。

黨參水提取物、醇提取物以及黨參多糖和低聚糖含有量的高低，是決定其品質(zhì)的重要標(biāo)志，但本實(shí)驗(yàn)所選取的黨參分別來自甘肅渭源、漳縣、文縣以及山西，四川等地，且包括3 個(gè)品種，這可能是導(dǎo)致上述結(jié)果的一個(gè)重要原因。另外黨參成分的差異也與黨參生態(tài)適應(yīng)性有關(guān)。近年來有關(guān)黨參適宜產(chǎn)地研究和黨參道地性研究越來越受到關(guān)注［17］。

3.2 黨參各提取物DPPH 自由基清除活性 黨參乙醇提取物、水提取物、粗黨參多糖、粗低聚糖DPPH 自由基清除活性見圖1。

圖1 不同品種黨參提取物DPPH 自由基清除活性比較

由圖1 可知，在質(zhì)量濃度為0～5.00 mg/mL 時(shí)，不同品種黨參中的各提取物的DPPH 自由基清除活性由高到低依次為黨參粗低聚糖、黨參水提取物、粗黨參多糖。

3.3 粗黨參低聚糖與精制黨參低聚糖DPPH 自由基清除活性 不同品種黨參的各提取物中，粗低聚糖DPPH 清除活性強(qiáng)于其余各部分，因此將其純化，進(jìn)一步測定不同黨參品種中精制低聚糖DPPH 自由基清除活性，結(jié)果見圖2、表3。

圖2 不同品種黨參低聚糖DPPH 自由基清除活性

表3 精制黨參低聚糖、粗黨參低聚糖DPPH 自由基清除率比較（%）

由圖2 可知，在質(zhì)量濃度為0～5.00 mg/mL 時(shí)，不同品種黨參精制黨參低聚糖DPPH 自由基清除活性隨其質(zhì)量濃度的增加而增大，清除率最大可達(dá)94.3%～98.8%。由表3 可知，同一產(chǎn)地的精制黨參低聚糖與粗黨參低聚糖質(zhì)量濃度均為5.00 mg/mL 時(shí)，純化后的黨參低聚糖的DPPH 自由基清除能力強(qiáng)于粗低聚糖。

4 結(jié)論

通過對(duì)采自4 個(gè)黨參主產(chǎn)區(qū)的3 種黨參不同提取部分的得率及DPPH 自由基清除活性研究發(fā)現(xiàn)，黨參乙醇提取物、水提取物、黨參多糖以及黨參低聚糖成分均具有DPPH自由基清除活性，黨參低聚糖成分的DPPH 自由清除活性為首次發(fā)現(xiàn)，且證實(shí)黨參低聚糖成分的DPPH 清除活性強(qiáng)于其他提取部分，以期該結(jié)果為傳統(tǒng)觀念中所認(rèn)為的“黨參味甜者佳”提供理論依據(jù)，為黨參品質(zhì)評(píng)價(jià)和功能因子明確的健康產(chǎn)品開發(fā)提供參考。黨參因品種及產(chǎn)地不同各部分提取物的含有量差異較大可能與其品種及產(chǎn)地適應(yīng)性相關(guān)，有待進(jìn)一步研究。