康視明合劑降糖治療視網(wǎng)膜病變的實(shí)驗(yàn)研究

沈艷婷 林柳兵 徐燕豐 錢春美

摘要?目的：探討康視明合劑對(duì)糖尿病大鼠血糖、尿素氮、胰島病理的影響。方法：應(yīng)用鏈脲佐菌素（STZ）給大鼠造糖尿病模型，并連續(xù)灌胃6個(gè)月，觀察胰腺病理改變并檢測(cè)胰島素、血糖、尿素氮。結(jié)果：模型組的胰島數(shù)量減少，形態(tài)不規(guī)則，胰島素水平低于正常組，但陽(yáng)性藥組與中藥組改善胰島數(shù)量、形態(tài)，胰島素水平并不顯著;模型組胰島素水平明顯低于正常組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。模型組中糖化血紅蛋白水平與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;各給藥組與模型組比較，除了高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。模型組中尿素氮水平與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;各給藥組與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：康視明合劑能直接降低血糖或作用于胰島，防治視網(wǎng)膜病變，改善腎功能。

關(guān)鍵詞?康視明合劑;視網(wǎng)膜病變;糖尿病;血糖;胰腺;病理;尿素氮，糖化血紅蛋白

Abstract?Objective：To investigate the effect of Kangshiming Mixture on blood glucose， urea nitrogen， pathology of pancreas in diabetic rats. Methods：Diabetes was induced in rats by injection of STZ， and the rats were treated for 6 months by gavage. The pathological changes of the pancreas， insulin， blood sugar and urea nitrogen were observed. Results：The number of pancreas islets in the model group was lower， with irregular shape. However， the positive medicine group and the Chinese medicine group improved the number and morphology of islets， and the insulin content was not significant; while the high-dose Chinese medicine group had a certain effect on the improvement of glycohemoglobin and urea nitrogen， among which there was a significant difference in glycohemoglobin. Conclusion：Kangshiming Mixture can reduce blood sugar directly or on the pancreas islets， prevent retinopathy and improve renal function.

Keywords?Kangshiming Mixture; Retinopathy; Diabetes; Blood sugar; Pancreas; Pathology; Urea nitrogen; Glycosylated hemoglobin

中圖分類號(hào)：R289.5;R587.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.17.011

糖尿病是由遺傳因素、免疫功能紊亂等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致的代謝紊亂綜合征。而一系列的代謝失調(diào)是由胰島功能減退，胰島素過度分泌等引發(fā)的。糖尿病最主要的特點(diǎn)是高血糖，且出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦，即“三多一少”的臨床癥狀。一旦血糖控制不好，將會(huì)引發(fā)各種并發(fā)癥，如：糖尿病足病、糖尿病腎病[1]、視網(wǎng)膜病變、糖尿病合并高血壓等。其中的視網(wǎng)膜病變是糖尿病常見的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致糖尿病患者失明的重要原因[2-4]。

康視明合劑作為院內(nèi)制劑，前期在合劑的工藝研究及質(zhì)量控制上都有一定的研究[5-6]，且在我院臨床應(yīng)用15年以上，對(duì)于視網(wǎng)膜萎縮、視網(wǎng)膜硬化等眼底疾病取得了良好的治療效果?？狄暶骱蟿┑那捌谘芯渴怯晌以貉劭茍F(tuán)隊(duì)負(fù)責(zé)，旨在改善病患眼疾，提升視力，改善生命質(zhì)量。研究顯示，此制劑對(duì)病患眼疾癥狀及眼底病變有效，尤其是對(duì)非滲出型年齡相關(guān)性的黃斑變性有確切療效[7]，而且在治療糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜病變上有一定療效。是否通過作用胰島或者直接降低血糖，改善視網(wǎng)膜病變，還是直接延緩視網(wǎng)膜病變？本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)探索康視明合劑通過降糖、改變胰島形態(tài)等防治視網(wǎng)膜病變。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物?SD大鼠，清潔級(jí)，雄性，250～270 g，共55只，于上海市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房清潔級(jí)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滬）2014-0019。實(shí)驗(yàn)期間，大鼠自由飲水、攝食，2 d換1次墊料，以保障正常的飼養(yǎng)環(huán)境。

1.1.2?藥物?康視明合劑為我院院內(nèi)制劑，批號(hào)：20150805。鏈脲佐菌素（STZ），美國(guó)Sigma公司。

1.1.3?試劑與儀器

試劑：生理鹽水（廣東大冢制藥有限公司，批號(hào)：20150301）。羥苯磺酸鈣片（南京長(zhǎng)澳制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20150506）。0.1 mol/L，pH值4.4的檸檬酸緩沖液自行配制。大鼠胰島素（INS）酶聯(lián)免疫分析試劑（批號(hào)：201601），大鼠糖化血紅蛋白（GHb）酶聯(lián)免疫分析試劑（批號(hào)：201601），尿素氮（BUN）測(cè)試盒（批號(hào)：20160120），以上試劑均購(gòu)于南京建成。儀器：顯微鏡（上海史萊克，型號(hào)：Leica DM2500）。高速離心機(jī)[日本5200型（KUBOTA）]。電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠，型號(hào)：H.H.S254）。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：DHG-9053A）。輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)（型號(hào)：KO-1508），電腦生物組織包埋機(jī)（型號(hào)：KD-BM II），購(gòu)自浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第3版中的鏈佐霉素建立糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠模型。將STZ溶于0.1 mol/L的檸檬酸緩沖液（pH4.4）中，配制成最終濃度為2%的溶液[8-9]。在造模前，所有實(shí)驗(yàn)大鼠均需要禁食12 h，每只大鼠按60 mg/kg的劑量給予腹腔注射，72 h后斷尾測(cè)定血糖。（尿糖在+++以上，血糖高于16.7 mmol/L為成模標(biāo)準(zhǔn)）。除了正常組8只外，成模47只大鼠按照血糖高低，隨機(jī)分組，模型組17只，陽(yáng)性藥對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥低劑量組，每組10只。

1.2.2?給藥方法?成模分組后的第2天起，分別給予灌胃，1 mL/100 g，1次/d。正常組與模型組分別給予蒸餾水，陽(yáng)性藥對(duì)照組給予羥苯磺酸鈣片溶液，中藥高低劑量分別給予康視明合劑。

1.2.3?檢測(cè)指標(biāo)與方法?血清檢測(cè)如胰島素水平檢測(cè)、糖化血紅蛋白水平檢測(cè)[10]、尿素氮水平檢測(cè);胰島素、糖化血紅蛋白為酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)，尿素氮為比色法檢測(cè)。飼養(yǎng)期間，每月尾尖取血測(cè)量1次血糖，6個(gè)月后處死，腹主動(dòng)脈取血，離心血清。摘取胰腺、腎、肝等臟器，進(jìn)行病理切片觀察。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，若正態(tài)分布并方差齊性，采用多組間F檢驗(yàn)。否則，用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?胰腺病理觀察?顯微鏡下觀察正常組的胰腺腺泡與胰島均完好，胰島呈橢圓或圓形團(tuán)狀，外分泌腺與胰島之間邊緣清晰，胰島細(xì)胞密度高，細(xì)胞分布均勻，形態(tài)規(guī)則。模型組的胰島受損嚴(yán)重，周圍界限界不清，形態(tài)不規(guī)則，有變小或萎縮狀。為保證血糖平衡，胰腺需不斷分泌過量的胰島素，進(jìn)入胰島B細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞期，且過度地分泌會(huì)造成胰島B細(xì)胞功能下降。模型組中的胰島細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞分布稀疏不均勻，且胰島細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)顯示有空泡狀。與模型組比較，陽(yáng)性藥組與高劑量組的胰島細(xì)胞的完整性較好，邊際較清晰，胰島有變小。低劑量組的胰島與模型比較，除了胰島空泡狀有所改變外，其余差異并不明顯。見圖1、圖2。

2.2?康視明合劑對(duì)胰島素的影響?模型組胰島素水平明顯低于正常組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.3?康視明合劑對(duì)糖血紅蛋白的影響?模型組中糖血紅蛋白水平與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;各給藥組與模型組比較，除了高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.4?康視明合劑對(duì)尿素氮的影響?模型組中尿素氮水平與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;各給藥組與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3?討論

本實(shí)驗(yàn)采用的造模方法簡(jiǎn)單，通過一次性大劑量注射STZ，破壞胰腺B細(xì)胞，使細(xì)胞壞死。從而引起大鼠體內(nèi)胰島素水平的下調(diào)，隨之血糖升高，但動(dòng)物在飼養(yǎng)一個(gè)月后，精神萎靡，形體及其消瘦的大鼠將出現(xiàn)死亡情況。動(dòng)物飼養(yǎng)到6個(gè)月時(shí)，視網(wǎng)膜內(nèi)核層和神經(jīng)細(xì)胞層才出現(xiàn)VEGF mRNA免疫陽(yáng)性反應(yīng)，糖尿病并發(fā)癥視網(wǎng)膜病變更全面，腎病也隨之出現(xiàn)[11]。

Unger[12]于1981年提出了糖尿病發(fā)病的“雙激素學(xué)說”，此學(xué)說講到胰島A細(xì)胞及B細(xì)胞功能發(fā)生異常會(huì)引發(fā)糖尿病發(fā)病，即胰島素分泌相對(duì)不足，胰升糖素分泌相對(duì)增高。胰島素是胰島B細(xì)胞分泌的一種多肽激素，其主要功能是刺激細(xì)胞對(duì)葡萄糖的利用而降低血糖，糖尿病時(shí)血糖升高就因B細(xì)胞功能缺陷引起。胰島素抵抗的一個(gè)誘因是富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC），它是一種組織細(xì)胞分泌性基質(zhì)蛋白[13-14]。其中，血糖升高雖是代謝障礙的重要指標(biāo)，但不是發(fā)生并發(fā)癥的唯一因素，降低血糖趨于正常化是不能降低糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生率。相對(duì)于胰島素強(qiáng)化治療，中藥也起到一個(gè)長(zhǎng)期保持血糖平穩(wěn)發(fā)展的作用。參芪湯、益氣養(yǎng)陰活血湯等中藥可以降低血糖或減少尿蛋白，改善腎功能[15-16]。

康視明合劑由益氣聰明湯化裁而成，主要含黨參、當(dāng)歸、白芍、黃柏、葛根、蒼術(shù)、靈芝、枳殼、柴胡、甘草等14味中藥，具有益氣升陽(yáng)聰耳明目之功效，以益氣養(yǎng)黨參、黃芪甘溫以補(bǔ)脾胃，為主藥治其本;葛根、升麻、蔓荊子味辛性涼，合用入肝走胃，輕揚(yáng)升發(fā)，鼓舞清陽(yáng)，中氣既足，清陽(yáng)上升，則九竅通利，耳聰而目明;白芍養(yǎng)血斂陰，黃柏補(bǔ)腎生水，甘草甘緩以和脾胃，共佐補(bǔ)氣升陽(yáng)藥，以免升發(fā)太過，使中氣得到補(bǔ)益，清陽(yáng)上升，肝腎受益，目障清除，共奏益氣升清之功，主要用于治療視神經(jīng)萎縮視網(wǎng)膜動(dòng)脈硬化等眼底疾患是防治視網(wǎng)膜病變。那康視明合劑是否能直接降血糖或是通過胰島素的調(diào)控來(lái)控制血糖呢？本實(shí)驗(yàn)HE病理顯示，康視明合劑對(duì)于胰島的損傷作用，有一定的改善作用，主要表現(xiàn)在胰島細(xì)胞胞質(zhì)空泡性狀有所減少，而對(duì)整個(gè)胰島細(xì)胞數(shù)量、大小、邊界、形態(tài)等改善作用并不明顯。從胰島素的水平數(shù)據(jù)來(lái)看，沒有太大的影響?？赡懿皇情g接通過保護(hù)胰腺，促使胰島分泌激素，降血糖。血糖的穩(wěn)定有賴于胰升糖素與胰島素的相互協(xié)調(diào)。本研究結(jié)果未顯示中藥制劑能促進(jìn)胰島素分泌的作用，是否有通過胰升糖素的抑制作用，本實(shí)驗(yàn)尚未顯示。但從糖化血紅蛋白指標(biāo)看，康視明合劑對(duì)已持續(xù)升高的血糖較強(qiáng)的作用，且隨著康視明合劑水平的升高，控制血糖的效果越是顯著。可見，它可能通過直接降血糖，來(lái)控制血糖，減少糖尿病并發(fā)癥。本研究只是從一些表觀上初步發(fā)現(xiàn)康視明合劑與血糖有著直接聯(lián)系，對(duì)胰升糖素的作用，需要在后期實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證完善。

糖尿病患者最突出又直接的臨床表現(xiàn)是高血糖，而持續(xù)維持在高血糖狀態(tài)下，往往容易出現(xiàn)微循環(huán)血管、血液成分及血流動(dòng)力學(xué)異常。而糖尿病患者中最常見的微血管病變是視網(wǎng)膜病變和腎臟損害。有研究表明，1型糖尿病患者視網(wǎng)膜病變與其腎功能關(guān)系很密切，其中腎功能異常的糖尿病患者發(fā)生視網(wǎng)膜病變的概率比腎功能正常的糖尿病患者高[17]。尿素氮是機(jī)體蛋白代謝的產(chǎn)物，有研究表明，2型糖尿病患者24 h血尿素氮與糖尿病患者發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)[18]。尿素氮水平隨著糖尿病視網(wǎng)膜病變嚴(yán)重程度增加而升高[19]?？狄暶骱蟿└邉┝磕軌蛎黠@的抑制尿素氮的分泌，減少腎損傷，降低糖尿病腎病的發(fā)生。且間接反映此模型可以使視網(wǎng)膜病變與糖尿病腎病共存，而康視明合劑在改善視網(wǎng)膜病變的同時(shí)，對(duì)腎病也有一定的治療作用。后期實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步深入研究此降血糖是主要通過調(diào)控哪些機(jī)制進(jìn)行調(diào)控和治療腎病的研究。

參考文獻(xiàn)

[1]楊莉，徐玉秀，李小南，等.糖尿病合并腎病患者血液流變學(xué)檢測(cè)的意義[J].吉林醫(yī)學(xué)，2011，32（15）：2981.

[2]羅麗華，王艷玲.糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理改變[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（6）：176-177.

[3]Sameen M，Khan MS，Mukhtar A，et al.Efficacy of intravitreal bevacizumab combined with pan retinal photocoagulation versus panretinal photocoagulation alone in treatment of proliferative diabetic retinopathy[J].Pak J Med Sci，2017，33（1）：142-145.

[4]Hwang DJ，Shin JY，Yu HG.Oral Administration of Cilostazol Increases Ocular Blood Flow in Patients with Diabetic Retinopathy[J].Korean J Ophthalmol，2017，31（2）：123-131.

[5]徐玥，周園明，許偉英，等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)化康視明合劑的提取工藝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（13）：32-34.

[6]徐玥，蔡烽，張欽，等.康視明合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高研究[J].中國(guó)藥師，2014，17（2）：218-220.

[7]宋毅，朱鶯.康視明合劑治療年齡相關(guān)性黃斑變性臨床療效研究[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，37（2）：63-64，71.

[8]凌志紅，徐格致，龔紅華，等.實(shí)驗(yàn)性早期糖尿病鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)組織病理改變[J].中國(guó)眼耳鼻喉科雜志，2004，4（6）：347-349.

[9]龐東渤，符麗娟，劉學(xué)政.鏈脲佐菌素-糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管病理改變[J].眼視光學(xué)雜志，2005，7（1）：47-49.

[10]姚建華.糖化血紅蛋白測(cè)定在糖尿病診斷中的臨床意義[J].兵團(tuán)醫(yī)學(xué)，2015，44（2）：25-27.

[11]李明新.早期大鼠實(shí)驗(yàn)性糖尿病視網(wǎng)膜病變模型的建立及觀察[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25（5）：436-440.

[12]Unger RH，Orci L.Glucagon and the A cell：physiology and pathophysiology（first two parts）[J].N Engl J Med，1981，304（25）：1518-1524.

[13]Kos K，Wilding JP.SPARC：a key player in the pathologies associated with obesity and diabetes[J].Nat Rev Endocrinol，2010，6（4）：225-235.

[14]Harries LW，McCulloch LJ，Holley JE，et al.A role for SPARC in the moderation of human insulin secretion[J].PLoS One，2013，8（6）：e68253.

[15]高斌，白淑英，李淑華，等.參芪湯對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管形態(tài)改變的作用[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2006，13（3）：159-160.

[16]趙建明.益氣養(yǎng)陰活血湯治療糖尿病性腎病蛋白尿40例[J].陜西中醫(yī)，2013，34（9）：59-60.

[17]萬(wàn)貝貝，高永杰，徐軍.1型糖尿病患者視網(wǎng)膜病變與腎功能的關(guān)系[J].國(guó)際眼科雜志，2019，19（2）：272-274.

[18]王養(yǎng)忠，柳紅芳.2型糖尿病患者腎功能相關(guān)指標(biāo)與發(fā)生視網(wǎng)膜病變的相關(guān)性[J].國(guó)際眼科雜志，2017，17（1）：107-109.

[19]李翠萍，陳松.血清肌酐和尿素氮水平與糖尿病視網(wǎng)膜病變神經(jīng)纖維層厚度相關(guān)性觀察[J].臨床眼科雜志，2017，25（1）：1-4.

（2019-08-14收稿?責(zé)任編輯：楊覺雄）