一例地方豬保種場豬偽狂犬凈化案例

瞿蕾

（江蘇省常熟市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 215500）

偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒 （Pseudorabies virus，PrV）引起的多種家畜急性傳染病,會(huì)造成妊娠母豬流產(chǎn)、死胎,公豬不育,新生仔豬大量死亡,育肥豬呼吸困難、生長停滯等危害。此外,豬作為該病的自然宿主和主要貯存宿主,患病豬會(huì)持續(xù)不斷地向外界排毒,影響整個(gè)生豬養(yǎng)殖場的生豬生產(chǎn),給養(yǎng)殖場造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于地方保種場而言,一旦種豬大規(guī)模感染,將影響整個(gè)地方豬種的生存,后果極其嚴(yán)重。

常熟市牧工商有限公司主要開展“二花臉” 豬種的培育和保護(hù)工作,公司在2014 年被原農(nóng)業(yè)農(nóng)村部評(píng)為國家級(jí)二花臉豬保種場,現(xiàn)有二花臉母豬85 頭,公豬15 頭,6 個(gè)家系。為進(jìn)一步提升種豬的質(zhì)量,我們利用3 年的時(shí)間指導(dǎo)常熟市牧工商有限公司對(duì)公豬、母豬、生長豬實(shí)施采血檢測、隔離淘汰等技術(shù)措施,同時(shí)嚴(yán)控生物安全體系,完成對(duì)該場的豬偽狂犬凈化任務(wù),從很大程度上提升了場內(nèi)種豬健康水平。

1 材料與方法

1.1 目標(biāo)豬場

常熟市牧工商有限公司。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 疫苗

偽狂犬gE 缺失活疫苗（Bartha-k61 株）,生產(chǎn)廠商為南農(nóng)高科。

1.2.2 診斷試劑及診斷方法

偽狂犬免疫抗體gB 蛋白ELISA 抗體檢測試劑盒和野毒抗體gE 蛋白ELISA 抗體試劑盒為美國IDEXX 公司產(chǎn)品。血清樣品的檢測步驟和結(jié)果判定均按照試劑盒說明書(說明書略)。

1.3 檢測對(duì)象

公豬、母豬、生長豬。

1.4 試驗(yàn)方法與內(nèi)容

1.4.1 生豬偽狂犬病流行病調(diào)查

了解目標(biāo)豬場不同種豬群的健康狀態(tài)、免疫情況、免疫保護(hù)水平和感染狀況,以此準(zhǔn)確評(píng)估目標(biāo)豬場偽狂犬病感染狀況。

1.4.2 凈化步驟

1.4.2.1 目標(biāo)豬場普查采樣

公豬群：全部采樣。

生產(chǎn)母豬群：隨機(jī)采集樣本40 份。

生長豬群：100～120 日齡的生長豬隨即采集樣本20 份、150～160 日齡生長豬隨機(jī)采集樣本20 份。

根據(jù)普查結(jié)果分析豬群偽狂犬病的感染情況,針對(duì)不同程度的感染選擇相對(duì)應(yīng)的控制凈化方案：種豬群普查結(jié)果分析：陰性群、穩(wěn)定控制群（種豬陽性率10%以下）、風(fēng)險(xiǎn)感染群（種豬陽性率10%～30%）和嚴(yán)重感染群（種豬陽性率30%以上）；通過對(duì)生長豬群的監(jiān)測可以分析、評(píng)估豬偽狂犬病的風(fēng)險(xiǎn)程度和控制情況。

1.4.2.2 監(jiān)測控制方案

（1）低陽性場

①繁殖豬群（公豬和母豬）：全群采樣檢測,野毒抗體gE陽性的豬只立即淘汰處理,1 個(gè)月后再次進(jìn)行繁殖豬群全群檢測,野毒抗體gE 陽性繼續(xù)淘汰,間隔4～6 個(gè)月后再次全群檢測,檢測不到野毒抗體gE 陽性則假定為陰性場。

②生長豬（后備公豬、后備母豬）逐頭進(jìn)行野毒抗體gE和偽狂犬免疫抗體gB 檢測,確保野毒抗體gE 陰性且疫苗免疫水平達(dá)標(biāo)。

③繁殖群完成淘汰后,經(jīng)產(chǎn)母豬按10 倍的比例、全部公豬、20 周齡左右生長豬隨機(jī)選取30 份進(jìn)行野毒抗體gE 和偽狂犬免疫抗體gB 檢測,監(jiān)測豬群野毒感染情況,同時(shí)評(píng)估疫苗免疫效果。

（2）高陽性場

①公豬：野毒抗體gE 陽性的豬只立即淘汰處理,1 個(gè)月后再次進(jìn)行繁殖豬群全群檢測,野毒抗體gE 陽性繼續(xù)淘汰,間隔4～6 個(gè)月后再次全群檢測,檢測不到野毒抗體gE 陽性則假定為陰性場。

②生長豬（后備公豬、后備母豬）逐頭進(jìn)行野毒抗體gE和偽狂犬免疫抗體gB 檢測,確保野毒抗體gE 陰性且疫苗免疫水平達(dá)標(biāo)。

③公豬群完成淘汰后,經(jīng)產(chǎn)母豬按10 倍的比例、全部公豬、20 周齡左右生長豬隨機(jī)選取30 份進(jìn)行野毒抗體gE 和偽狂犬免疫抗體gB 檢測,監(jiān)測豬群野毒感染情況,同時(shí)評(píng)估疫苗免疫效果。

④經(jīng)檢測,若母豬群的野毒感染率在一個(gè)比較低的水平（如10%左右）,則目標(biāo)豬場偽狂犬凈化可參照低陽性場方案進(jìn)行。

1.4.2.3 結(jié)果判定

經(jīng)檢測,目標(biāo)豬場繁殖豬群野毒抗體gE 連續(xù)2 次抽檢結(jié)果均為陰性,且偽狂犬免疫抗體gB 合格率≥80%,則判定該豬群為凈化豬群；否則,按照凈化步驟循環(huán)進(jìn)行,直至滿足上述要求。

每次樣品的采集、檢測、陽性豬的處理均應(yīng)在10d 內(nèi)完成。

1.4.3 凈化維持。

種公豬每年3～4 次進(jìn)行全群采血檢測,確保野毒抗體gE陰性和偽狂犬疫苗免疫水平合格。

后備母豬和后備公豬在入群前必須逐頭檢測,野毒抗體gE陰性和偽狂犬疫苗免疫水平合格。

每4 個(gè)月對(duì)生產(chǎn)母豬和生長豬進(jìn)行采血監(jiān)測一次,其中生產(chǎn)母豬60 份、130～150 日齡生長豬30 份,野毒抗體gE 和偽狂犬免疫抗體gB 檢測,以監(jiān)測豬群野毒感染情況,同時(shí)評(píng)估疫苗免疫效果。

1.5 技術(shù)措施

1.5.1 免疫常規(guī)動(dòng)物疫病疫苗使用情況

由表1 可知,偽狂犬疫苗為公豬每年1 月偽狂犬2 頭份頸后肌注,母豬跟胎4 頭份頸后肌注。由于本場為封閉式陰性場,生長豬不做免疫,但考慮到仔豬出售往其他陽性場后極易感染發(fā)病,于2017 年9 月開始對(duì)部分生長豬進(jìn)行偽狂犬免疫,斷奶后2 頭份頸后肌注,30d 后二免。

1.5.2 生豬安全管理措施

自繁自養(yǎng),不從外場引種。嚴(yán)格的全進(jìn)全出制度,豬只調(diào)入調(diào)出前后對(duì)欄舍徹底清洗消毒,不同消毒藥物交替使用,確保消毒效果。加強(qiáng)檢測,淘汰不合格的種豬。嚴(yán)格控制傳染源：病豬及時(shí)從正常豬群中挑出,進(jìn)入隔離欄進(jìn)行治療,必要時(shí)對(duì)病豬實(shí)施安樂死,防止病毒擴(kuò)散,死豬進(jìn)行無害化處理。加強(qiáng)人員、物品、環(huán)境消毒,提升發(fā)酵效果,使病原微生物始終處于抗體保護(hù)之下,提高豬群抗病力,減少易感豬只。同時(shí),加強(qiáng)豬只日常保健,對(duì)轉(zhuǎn)群豬及產(chǎn)前產(chǎn)后母豬尤其要注意做好預(yù)防保健工作。

1.5.3 病原分離診斷

在試驗(yàn)中若出現(xiàn)有病死豬,及時(shí)采集相關(guān)病理組織,經(jīng)合理保存后送到有資質(zhì)的檢測單位,采用熒光PCR 方法對(duì)病原學(xué)樣品進(jìn)行檢測診斷,找出病因,確診病種。

2 結(jié)果與分析

2016～2019 年,我們對(duì)目標(biāo)豬場內(nèi)各類生豬偽狂犬免疫抗體gB 水平和野毒抗體gE 水平進(jìn)行了6 次監(jiān)測。

第1 次：2016 年7～9 月,全場普查,公豬全群采樣15 份,母豬全群采樣121 份,生長豬隨機(jī)采樣40 份。檢測結(jié)果顯示,母豬群gB 抗體69.42%；公豬群免疫不到位,gB 抗體僅為20.00%；生長豬不進(jìn)行免疫,無免疫抗體。野毒抗體gE 陽性母豬1 份,其余均為陰性,抗體陽性率為0.83%,抗體陽性母豬立即作淘汰處理。具體結(jié)果見表2。

表1 免疫情況登記表

第2 次：2017 年2 月24 日,全場普查,公豬全群采樣14份,母豬全群采樣125 份,生長豬隨機(jī)采樣20 份。檢測結(jié)果顯示,母豬群和公豬群偽狂犬疫苗免疫水平均有所提高,母豬群gB 抗體98.40%；公豬群gB 抗體57.14%；生長豬不進(jìn)行免疫,無免疫抗體。野毒抗體gE 均為陰性,抗體陽性率為0.00%。該場假定為陰性場,按維持凈化方案實(shí)施。具體結(jié)果見表3。

第3 次：2017 年6 月26 日,全場普查,公豬全群采樣13份,母豬全群采樣120 份,生長豬全群采樣35 份。檢測結(jié)果顯示,母豬群gB 抗體98.33%；公豬群gB 抗體38.46%；生長豬不進(jìn)行免疫,無免疫抗體。野毒抗體gE 均為陰性,抗體陽性率為0.00%。具體結(jié)果見表4。

第4 次：2017 年12 月5 日,生長豬全群采樣30 份,該批生長豬已于2017 年9 月進(jìn)行偽狂犬疫苗注射。檢測結(jié)果顯示,生長豬gB 抗體93.33%,免疫有效。野毒抗體gE 均為陰性,抗體陽性率為0.00%。具體結(jié)果見表5。

第5 次：2018 年10 月17 日,全場普查,公豬全群采樣10 份,母豬全群采樣105 份,生長豬隨機(jī)采樣40 份。檢測結(jié)果顯示,母豬群gB 抗體91.43%；公豬群gB 抗體90.00%；生長豬gB 抗體57.70%。野毒抗體gE 均為陰性,抗體陽性率為0.00%。具體結(jié)果見表6。

第6 次：2019 年6 月26 日,全場普查,公豬全群采樣15份,母豬全群采樣85 份,生長豬隨機(jī)采樣40 份。檢測結(jié)果顯示,母豬群gB 抗體92.94%；公豬群gB 抗體86.67%；生長豬gB 抗體2.50%。野毒抗體gE 均為陰性。具體結(jié)果見表7。

從以上檢測結(jié)果可以看出,前4 次檢測gB 抗體母豬群基本達(dá)到70%,免疫合格；公豬免疫不到位,群體免疫合格率均低于70%；生長豬不進(jìn)行免疫,無免疫抗體。從第5～6 次檢測結(jié)果可以看出,公豬、母豬免疫均有效,群體免疫合格率達(dá)到92%。野毒抗體gE 抗體檢測連續(xù)5 次檢測均為陰性,整個(gè)豬群無偽狂犬野毒感染,目標(biāo)豬場偽狂犬病凈化成功。

表2 第一次PrV-gB 和PrV-gE 抗體檢測結(jié)果

表3 第2 次PrV-gB 和PrV-gE 抗體檢測結(jié)果

表4 第3 次PrV-gB 和PrV-gE 抗體檢測結(jié)果

表5 第4 次PrV-gB 和PrV-gE 抗體檢測結(jié)果

表6 第5 次PrV-gB 和PrV-gE 抗體檢測結(jié)果

表7 第6 次PrV-gB 和PrV-gE 抗體檢測結(jié)果

3 討論與小結(jié)

要凈化偽狂犬疫病必須具備以下4 個(gè)條件：一是要有符合實(shí)際且行之有效的凈化方案,凈化方案必須對(duì)凈化過程中隨時(shí)可能出現(xiàn)的各種情況做出估計(jì),并提出相應(yīng)的解決方法；二是要建立嚴(yán)格的生物安全制度和措施,不從場外引種、全進(jìn)全出,封閉式飼養(yǎng)；三是要落實(shí)各項(xiàng)防疫措施,有效的防控措施不僅能促進(jìn)整個(gè)凈化過程順利開展,在凈化完成后更是保證豬只不受該病毒感染的重要措施；四是要有堅(jiān)決果斷的處理機(jī)制,一旦發(fā)現(xiàn)野毒感染陽性豬只要立即淘汰,防止病原擴(kuò)散。

由于任何檢測都不可能確保100%準(zhǔn)確,其中的人為操作因素、試劑因素都會(huì)對(duì)檢測結(jié)果造成一定誤差或誤判,所以檢測過程要進(jìn)行多次檢測或邀請(qǐng)多個(gè)檢測機(jī)構(gòu)檢測,以減少誤差帶來的誤判。

在對(duì)目標(biāo)豬場開展偽狂犬病凈化前,必須對(duì)其進(jìn)行偽狂犬陽性率的抽查,對(duì)陽性率處于不同階段水平的情況選取不同的凈化方案。第一次抽查結(jié)果顯示,本次凈化的豬場生豬屬于陰性群,按照低陽性場控制方案進(jìn)行凈化。若抽檢結(jié)果為風(fēng)險(xiǎn)感染群（種豬陽性率10%～30%）和嚴(yán)重感染群 （種豬陽性率30%以上）,則需按高陽性場控制方案進(jìn)行凈化。

后備豬如何引入也是影響目標(biāo)豬場偽狂犬凈化成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。必須在確保后備豬是偽狂犬感染陰性時(shí)才可以引進(jìn)。

盡管本場已完成偽狂犬的凈化,全場封閉式管理,作為陰性場可以不使用偽狂犬疫苗。但就目前國內(nèi)形勢(shì)而言,大部分豬場為偽狂犬陽性,豬只體內(nèi)存在偽狂犬病毒。如果這些豬場進(jìn)購本場仔豬,在生長過程中隨著母源抗體下降,仔豬極易感染發(fā)病。因此,偽狂犬疫苗的免疫必須同步開展,并且嚴(yán)格按照免疫程序開展防疫工作,全方位阻斷豬偽狂犬病的傳播途徑。