南極大磷蝦腸道曲霉菌Aspergillus sydowii NJF7的分離與代謝產(chǎn)物的研究

?？∧?，李靈智，樊成奇，韓清華，黃洪亮，馬麗艷，陸亞男，李月月，田曉清，3

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，上海 200090；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部遠(yuǎn)洋與極地漁業(yè)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200090；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090；4.上海海洋大學(xué)，上海 201306）

南極大磷蝦（Euphausiasuperba）因其區(qū)域特色、資源保有量?jī)?yōu)勢(shì)以及廣泛應(yīng)用價(jià)值為世界主要發(fā)達(dá)國(guó)家所青睞，國(guó)際上已形成磷蝦捕撈技術(shù)支撐、高附加值產(chǎn)品驅(qū)動(dòng)為一體的產(chǎn)業(yè)鏈［1－3］。我國(guó)更將南極大磷蝦商業(yè)化開(kāi)發(fā)納入國(guó)家海洋發(fā)展戰(zhàn)略，積極培育這一海洋生物精深利用新興產(chǎn)業(yè)。南極大磷蝦自身富含多種活性物質(zhì)，包括DHA／EPA等不飽和脂肪酸、磷脂、多種活性低溫酶等［4－8］。而腸道作為磷蝦等動(dòng)物體內(nèi)重要的消化吸收器官，其中棲息著數(shù)量龐大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的腸道微生物組（intestinalmicrobiota），與宿主的營(yíng)養(yǎng)代謝、遺傳、發(fā)育及進(jìn)化、免疫防御等重要生命過(guò)程休戚相關(guān)［9－11］。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)南極大磷蝦腸道菌群包含大量未知微生物新種屬，隨后通過(guò)菌株代謝產(chǎn)物及其生物活性篩選，從南極大磷蝦可培養(yǎng)菌株代謝產(chǎn)物中鑒定化合物48個(gè)，具有抗海洋病毒、抗海洋病原菌及抗污損等多種生態(tài)學(xué)活性［12－16］。因此，我國(guó)亟需繼續(xù)大力加強(qiáng)南極大磷蝦基礎(chǔ)生物學(xué)研究，積極拓展其資源綜合利用新途徑。本研究小組成員在參與第29次極地科學(xué)考察時(shí)，分離出南極大磷蝦共附生微生物133株，其中7%為未知種［17］，并且全部為細(xì)菌。丁壯等［18］總結(jié)了極地真菌的代謝產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)其代謝產(chǎn)物多樣性較好，且具有抗菌、增強(qiáng)抗癌藥物活性、核苷轉(zhuǎn)移抑制劑等活性。

因此，本文在前人研究的基礎(chǔ)上對(duì)第34次“雪龍?zhí)枴蹦蠘O考察采集到的南極大磷蝦共附生菌進(jìn)行真菌菌株分離鑒定，并對(duì)其次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行初步研究，以期為極地真菌以及南極大磷蝦綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

南極大磷蝦由2017年第34次“雪龍?zhí)枴蹦蠘O考察船采用框架拖網(wǎng)采獲。

培養(yǎng)基：孟加拉紅固體培養(yǎng)基［19］；PDA固體培養(yǎng)基；YPD固體培養(yǎng)基；YPD液體培養(yǎng)基。用于分離真菌菌株時(shí)每種培養(yǎng)基添加抗生素：青霉素、鏈霉素、氯霉素各30μg·mL－1。

色譜材料：柱層析硅膠（200 300目）及預(yù)制GF254 TLC硅膠板：青島海洋化學(xué)公司；MCI gel（CHP 20P，75 150μm）；C18反相硅膠（150 200目）：Merck公司；凝膠Sephadex LH 20：Pharmacia Biotech，Sweden。

試劑：乙腈、甲醇（色譜級(jí)，Merck公司）；其他試劑，如乙酸乙酯、甲醇、丙酮、正丁醇、石油醚、三氯甲烷等（AR，上海國(guó)藥集團(tuán)）；標(biāo)準(zhǔn)品尿嘧啶（5 g·瓶－1）（上海國(guó)藥集團(tuán)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

微生物恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)有限公司，DHP9162A）；大型恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱（上海天星實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司，TS 211C）；超聲波清洗器（上海漢克科學(xué)儀器有限公司，SK250LH）；光學(xué)顯微鏡（上海光學(xué)儀器一廠(chǎng)，XSP 44X.9）；半制備HPLC儀器（Shimadazu，SPD M20A PDA）；半制備HPLC儀器（Waters，2545）；液質(zhì)聯(lián)用儀（HR ESI MS，Agilent，1290 HPLC 6224 TOF MS，分辨率≥20 000）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)，RE3000A）；反相半制備色譜柱：YMC Pack ODS AQ column（250×10 mm，S 5μm，12 nm，分離流速2.5 mL·min－1）；正相半制備色譜柱：YMC Pack SIL 06 column（250×10 mm，S 5μm，6 nm，分離流速4.0 mL·min－1）；核磁共振波譜儀（Bruker AM 400 spectrometer）。

1.3 菌株的分離鑒定

將南極大磷蝦樣品在超凈工作臺(tái)內(nèi)用無(wú)菌海水沖洗表面，用研缽研碎，將處理好的樣品加入裝有10 mL無(wú)菌海水的50 mL無(wú)菌管中，樣品震蕩混勻后梯度稀釋10－1、10－2、10－3，不同梯度分別取300μL菌液涂布于孟加拉紅、PDA和YPD 3種固體培養(yǎng)基上，每個(gè)梯度樣品做3個(gè)平行。涂布好的平板倒置于15℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；培養(yǎng)約3～4周后長(zhǎng)出菌落，依據(jù)菌落特征進(jìn)行分離，挑取菌落接種至相應(yīng)培養(yǎng)基上劃線(xiàn)分離純化培養(yǎng)，直至得到純菌落。分離得一株真菌NJF7，菌株保存于YPD或孟加拉紅斜面固體培養(yǎng)基，置于4℃冰箱進(jìn)行保種；另用30%的甘油保種于－80℃的冰箱進(jìn)行長(zhǎng)期保存。然后轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基送至上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行一代測(cè)序。

同時(shí)將滅菌的載玻片45°傾斜插入涂布真菌菌種的固體培養(yǎng)皿中，28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d，用光學(xué)顯微鏡觀察菌絲形態(tài)特征，如菌落形狀、大小、色澤、質(zhì)地、有沒(méi)有產(chǎn)生孢子等特點(diǎn)，并作記錄。再參考張新軍［20］和孫晶晶等［21］的研究對(duì)真菌進(jìn)行初步的分類(lèi)、鑒定。

1.4 菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物分離純化

1.4.1 發(fā)酵液的獲取

NJF7菌株接種在2只50 mL試管中（內(nèi)有5 mL的YPD液體培養(yǎng)基），搖床恒溫27℃培養(yǎng)活化5～7 d。將活化的NJF7菌株接種至2只1 000 mL三角瓶（內(nèi)含500 mL YPD液體培養(yǎng)基）中，置于20℃160 r·min－1恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中，發(fā)酵培養(yǎng)5 d后得到種子發(fā)酵液。將發(fā)酵的種子液按一定比例接到裝有YPD液體培養(yǎng)基的2 L三角瓶中，在20℃160 r·min－1恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中發(fā)酵培養(yǎng)，共得到培養(yǎng)發(fā)酵液約35.5 L。

1.4.2 次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取分離

NJF7菌株發(fā)酵液35.5 L用布氏漏斗及定性中速（直徑18 cm）的濾紙真空抽濾分為菌絲體和胞外濾液兩部分。菌絲體置于－80℃冰箱中冷凍，48 h后取出放在室溫解凍，解凍后依次加入3 L的丙酮和甲醇，用超聲清洗器超聲提取，各提取2次，得到菌絲體部分浸膏。胞外濾液約35.5 L，每1.6 L菌液分別用200 mL的乙酸乙酯和正丁醇萃取各2次，旋轉(zhuǎn)濃縮得乙酸乙酯部分浸膏157.3 g，正丁醇部分浸膏19.0 g。乙酸乙酯部分與菌絲體提取濃縮的浸膏合并，質(zhì)量為163.2 g，用650 mL的純水溶解充分，再用325 mL的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3種試劑各萃取3次。萃取液真空低溫旋蒸，除去有機(jī)溶劑，得到石油醚部分浸膏10.5 g；乙酸乙酯部分浸膏0.32 g；正丁醇部分浸膏與第一次正丁醇部分合并共31.3 g。

乙酸乙酯部分經(jīng)Sephadex LH 20凝膠柱分離，通過(guò)TLC硅膠板點(diǎn)樣分析得到NJF7I～VII 7部分。NJF7I部分經(jīng)Waters正向柱制備，流動(dòng)相為乙酸乙酯 石油醚。NJF7III部分過(guò)硅膠分為IIIa和IIIb，然后再用HPLC制備，各部分HPLC梯度洗脫程序以及化合物見(jiàn)表1。

用MCI柱分離正丁醇部分：用1 000mL水洗脫MCI柱4個(gè)柱體積，后用400mL甲醇∶水（V∶V＝10∶90）淋洗，除去鹽、糖、蛋白等雜質(zhì)；依次用甲醇∶水（20∶80→50∶50→80∶20→100∶0）洗脫，每梯度洗脫液的用量為1 000 mL。洗脫下來(lái)的液體用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀依次濃縮得到20%甲醇、50%甲醇、80%甲醇和100%甲醇4個(gè)部分。50%和80%甲醇部分經(jīng)過(guò)硅膠分離后再通過(guò)HPLC制備，流動(dòng)相為乙腈 水（水含0.1%三氟乙酸），各部分梯度洗脫程序以及化合物見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種鑒定結(jié)果

曲霉屬菌種NJF7在孟加拉紅培養(yǎng)基培養(yǎng)，其培養(yǎng)特征（A）和在光學(xué)顯微鏡目鏡10倍、物鏡40倍條件下形態(tài)（B）見(jiàn)圖1。

真菌NJF7菌落特點(diǎn)：菌落的顏色為黃綠色；質(zhì)地絲絨狀，形成放射狀溝紋；沒(méi)有滲出液；分生出來(lái)的孢子頭形成疏松放射狀；頂囊近球形；分生的孢子形狀為球形、近球形。根據(jù)姚栗等［22］的研究結(jié)果，對(duì)照實(shí)驗(yàn)菌種的培養(yǎng)特征和顯微形態(tài)，其與黃曲霉菌顏色形態(tài)一致。

菌株序列與生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)GenBank（https：／／www.ncbi.nlm.nih.gov）進(jìn)行序列的相似性比較分析，尋找最高相似性在98%左右的菌株，選取比對(duì)結(jié)果中與其相似性較高的模式株，然后對(duì)菌株構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖2）。

基因序列同源性比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，菌株NJF7與Aspergillus屬模式種A.sydowii（KX958084.1）相似性最高，為99%，與A.sydowii（JN851025.1）在同一枝節(jié)。根據(jù)真菌的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，鑒定NJF7為曲霉Aspergillussydowii。

2.2 次級(jí)代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果

從菌株NJF7的代謝產(chǎn)物中分離出化合物，分別經(jīng)HR ESI MS、1H NMR波譜學(xué)方法，鑒定了其中13個(gè)化合物。結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖3。

表1 乙酸乙酯各部分梯度洗脫程序表及化合物Tab.1 Gradient elution procedures and compounds of EA

表2 正丁醇部分梯度洗脫程序表及化合物Tab.2 Gradient elution procedures and compounds of n butyl alcohol

圖2 基于菌株NJF7及其相應(yīng)模式菌株的18S rDNA構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Neighbour joining phylogenetic tree based on 18S rDNA gene sequence for the position of strain NJF7

化合物1：淺黃色粉末，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z261.117 7（［M＋H］＋，計(jì)算值為261.116 1），提示其分子式為C14H16N2O3。1H NMR（pyr，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH1.53（m，2H），1.81（m，1H），2.13（m，1H），3.29（dd，J＝14.7，6.3 Hz，1H），3.36（m，1H），3.58（m，3H），4.09（t，J＝8.0，8.5 Hz，1H），4.52（t，J＝5.2，5.5 Hz，1H），7.08（d，J＝8.4 Hz，2H），7.39（d，J＝8.1 Hz，2H），8.58（s，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［23］報(bào)道一致，因此化合物1結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（脯氨酸 酪氨酸）。

化合物2：淺黃色粉末，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z350.149 9（［M＋H］＋，計(jì)算值為350.146 0），提示其分子式為C20H19N3O3。1H NMR（CD3OD，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH2.61（dd，J＝13.4，6.3 Hz，1H），2.83（dd，J＝14.5，5.7 Hz，1H），3.03（dd，J＝14.7，4.1 Hz，1H），3.51（dd，J＝11.4，6.6 Hz，1H），3.58（m，1H），3.65（m，3H），3.90（m，1H），4.18（m，1H），6.60（m，2H），7.04（s，1H），7.07（m，1H），7.13（m，1H），7.17（m，3H），7.35（d，J＝7.9 Hz，1H），7.60（d，J＝8.0 Hz，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［24］報(bào)道一致，因此化合物2結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（色氨酸 酪氨酸）。

圖3 從NJF7中分離得到的化合物結(jié)構(gòu)式Fig.3 Structure formulas of com pounds isolated from NJF7

化合物3：黃色油狀物，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z245.127 9（［M＋H］＋，計(jì)算值為245.121 2），提示其分子式為C14H16N2O2。1H NMR（CD3OD，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH1.25（m，1H），1.82（m，2H），2.11（m，1H），3.18（m，2H），3.38（m，1H），3.55（m，1H），4.08（m，1H），4.46（m，1H），7.46（m，5H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［25］報(bào)道一致，因此化合物3結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（脯氨酸 苯丙氨酸）。

化合物4：黃色膠狀物，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z211.141 9（［M＋H］＋，計(jì)算值為211.140 2），提示其分子式為C11H18N2O2。1H NMR（CD3OD，400 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH0.97（m，6H），1.56（m，1H），1.67（m，1H），1.77（m，1H），1.92（m，2H），2.02（m，1H），2.33（m，2H），3.48（m，1H），3.56（m，1H），3.83（dd，J＝9.7，6.0 Hz，1H），4.26（m，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［26］報(bào)道一致，因此化合物4結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（纈氨酸 脯氨酸）。

化合物5：黃褐色無(wú)定型粉末，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z286.155 2（［M＋H］＋，計(jì)算值為286.151 1），提示其分子式為C16H19N3O2。1H NMR（D2O，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH0.13（d，J＝7.3 Hz，2H），0.69（d，J＝7.3 Hz，2H），1.33（m，1H），3.34（dd，J＝15.1，5.3 Hz，1H），3.43（s，2H），3.54（dd，J＝15.0，5.4 Hz，1H），3.77（m，3H），4.56（td，J＝4.6，1.7 Hz，1H），7.24（m，1H），7.29（m，2H），7.55（d，J＝9.3 Hz，1H），7.74（d，J＝6.7 Hz，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［27］報(bào)道一致，因此化合物5結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（纈氨酸 色氨酸）。

化合物6：淺黃色粉末，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z300.184 1（［M＋H］＋，計(jì)算值為300.166 7），提示其分子式為C17H21N3O2。1H NMR（pyr，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH0.83（t，J＝7.3，7.5 Hz，3H），1.10（d，J＝6.8 Hz，3H），1.18（m，1H），1.56（m，1H），2.15（m，1H），3.72（dd，J＝14.5，8.1 Hz，1H），3.95（dd，J＝14.5，4.6 Hz，1H），4.19（s，1H），4.77（m，1H），7.28（d，J＝1.1 Hz，1H），7.33（m，1H），7.53（s，1H），7.60（m，1H），8.11（d，J＝8.1 Hz，1H），9.10（d，J＝26.0 Hz，2H），11.98（s，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［27－28］報(bào)道一致，因此化合物6結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（異亮氨酸 色氨酸）。

化合物7：淺黃色粉末，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z315.169 3（［M＋H］＋，計(jì)算值 為315.141 2），提 示 其 分 子 式 為C16H18N4O3。1H NMR（CD3OD，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH0.98（m，1H），1.50（m，1H），1.70（m，1H），1.99（m，1H），3.29（m，1H），3.48（m，1H），4.02（m，1H），4.43（m，1H），7.03（m，1H），7.11（m，2H），7.35（dt，J＝8.2，0.8 Hz，1H），7.59（dt，J＝8.0，0.9 Hz，1H）。該化合物數(shù)據(jù)比文獻(xiàn)［29］報(bào)道的環(huán)（天門(mén)冬酰胺 色氨酸）的數(shù)據(jù)多一個(gè)亞甲基信號(hào)，因此化合物7結(jié)構(gòu)鑒定為環(huán)（谷氨酰胺 色氨酸）。

化合物8：白色粉末，1H NMR（D2O，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH3.43（s，2H），6.48（d，J＝17.2 Hz，1H），7.02（m，2H），7.64（m，3H）.該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［30］報(bào)道一致，因此化合物8結(jié)構(gòu)鑒定為對(duì)羥基肉桂酸甲酯。

化合物9：淺黃色針狀結(jié)晶，與標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照鑒定化合物為尿嘧啶。

化合物10：黃色無(wú)定形粉末，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z138.089 9（［M＋H］＋，計(jì)算值為138.087 4），提示其分子式為C8H11NO。1H NMR（CD3OD，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH2.53（t，J＝7.7，7.6 Hz，1H），2.80（t，J＝7.6，7.7 Hz，1H），6.69（m，1H），7.02（m，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［31］報(bào)道一致，因此化合物10結(jié)構(gòu)鑒定為對(duì)羥基苯乙胺。

化合物11：黃色油狀物，HR ESI MS譜得出準(zhǔn)分子離子峰m／z122.096 6，（［M＋H］＋，計(jì)算值為122.096 4），提示其分子式為C8H11N。1H NMR（CDCl3，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH2.71（m，1H），2.98（t，J＝7.7，8.0 Hz，1H），7.23（m，1H），7.31（m，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［32］報(bào)道一致，因此化合物11結(jié)構(gòu)鑒定為苯乙胺。

化合物12：白色粉末，1H NMR（CD3OD，400 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH2.56（t，J＝7.7，7.5 Hz，1H），2.80（t，J＝7.7，7.7 Hz，1H），3.62（s，1H），6.67（d，J＝8.1 Hz，1H），7.00（d，J＝8.6 Hz，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［33］報(bào)道一致，因此化合物12結(jié)構(gòu)鑒定為N 甲基酪胺。

化合物13：無(wú)色針狀晶體，1H NMR（pyr，600 MHz）數(shù)據(jù)如下：δH2.82（t，J＝7.9，7.5 Hz，1H），3.08（t，J＝7.7，7.7 Hz，1H），3.57（s，3H），7.10（d，J＝9.4 Hz，1H），7.26（d，J＝5.7 Hz，1H）。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［34］報(bào)道一致，因此化合物13結(jié)構(gòu)鑒定為大麥芽堿。

3 討論

曲霉NJF7是本課題組在南極大磷蝦腸道微生物中分離到的第一株真菌，從其發(fā)酵液提取物中鑒定了13個(gè)代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)，化合物結(jié)構(gòu)類(lèi)型包含二酮哌嗪（1～7）、芳香酸（8）、生物堿類(lèi)（9～13）?；衔?環(huán)（谷氨酰胺 色氨酸）（天然成分）首次從曲霉屬真菌中分離。環(huán)肽作為天然產(chǎn)物的一類(lèi)，通常單獨(dú)存在或嵌入在更大、更復(fù)雜的結(jié)構(gòu)中，在真菌、細(xì)菌、海洋海綿和植物中的次級(jí)代謝產(chǎn)物中都有獲得［35］。環(huán)肽類(lèi)化合物由于具有抗腫瘤、抗菌、抗真菌等生物活性而備受研究者關(guān)注［29］。例如化合物2對(duì)L 929、K 562和HeLa細(xì)胞系具有較弱的抗增殖和細(xì)胞毒作用［23］。目前已發(fā)現(xiàn)的上百個(gè)環(huán)肽類(lèi)化合物絕大部分來(lái)自于海洋生物，其中海洋微生物所產(chǎn)生的一些特殊環(huán)肽顯示出很好的抗腫瘤活性。本研究獲得的芳香酸和生物堿類(lèi)化合物也表現(xiàn)出良好的活性，例如化合物12可以刺激胃泌素的釋放，在低劑量（25μg·kg－1）時(shí)就可獲得最大的釋放活性［33］。后期對(duì)化合物7的活性將繼續(xù)探討。

但是，通過(guò)對(duì)NJF7次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究，發(fā)現(xiàn)目前鑒定的次級(jí)代謝產(chǎn)物種類(lèi)少、結(jié)構(gòu)單一、新穎性不足，結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的化合物未能被獲得，因此未進(jìn)一步開(kāi)展化合物的活性篩選。這可能由于本實(shí)驗(yàn)只使用了YPD一種發(fā)酵培養(yǎng)基且培養(yǎng)條件比較簡(jiǎn)單的緣故。后期將從培養(yǎng)基種類(lèi)以及培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，以期得到較為新穎、具有較好生物活性的化合物乃至具有新藥開(kāi)發(fā)前景的天然產(chǎn)物。RUI等［27］在海綿中結(jié)合宏基因組學(xué)的方法分離到11個(gè)環(huán)肽成分，在以后的研究中可以考慮首先通過(guò)宏基因組學(xué)對(duì)樣品中具有生物活性的小分子進(jìn)行預(yù)估，以節(jié)省分離時(shí)間，提高分離效率。