黑老虎果皮和種子的抗氧化、抑菌和抑酶活性

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（1.湖南省芷江侗族自治縣質(zhì)量監(jiān)督檢驗及計量檢定所，湖南 芷江 419100；2.中南林業(yè)科技大學(xué)a.食品科學(xué)與工程學(xué)院；b.林產(chǎn)可食資源安全與加工利用湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410004；3.湖南省通道南楚農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，湖南 通道 418599）

黑老虎Kadsura coccinea是木蘭科五味子屬常綠藤本植物，別名冷飯團(tuán)，苗語稱“布福娜”等，主要分布于我國的湖南、貴州、四川、江西等地[1]。黑老虎的根和藤具有抗腫瘤、抗氧化等活性，還具有清熱解毒、袪風(fēng)活絡(luò)、調(diào)氣止痛、補血養(yǎng)顏等功效，是苗、侗等少數(shù)民族千百年來沿用至今的一種珍貴藥材[2]。黑老虎果實富含多種人體所需微量元素[3]，及多酚和維生素C 等活性成分[4]。果實成熟后，味道清甜可口，是一種營養(yǎng)豐富的藥食兩用水果，具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、保肝、養(yǎng)顏美白等作用[5]，侗族少女有將黑老虎果汁敷面的傳統(tǒng)，韓國最大的護(hù)膚品企業(yè)愛茉莉集團(tuán)的產(chǎn)品中也有應(yīng)用[6]。

黑老虎主要為鮮食野生水果，果肉可食部位僅40%～60%。在黑老虎果實的食用和生產(chǎn)加工過程中，其果皮和種子大多會被廢棄。現(xiàn)階段對黑老虎的研究主要集中在栽培、繁育[7]及根中化學(xué)成分[8]等方面，關(guān)于其果實皮和籽等副產(chǎn)物的生物活性的研究鮮有報道。

本研究中以2 種常見的黑老虎品種為原料，用乙醇提取黑老虎果皮、種子中的活性物質(zhì)，測定其抗氧化和抑菌活性及其對酪氨酸酶、α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制活性，評價其生物活性，旨在為黑老虎果皮和種子的加工利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

黑老虎果實采自湖南通道，包括大紅和紫黑2個品種。

試劑包括：DPPH（日本TIC 科技有限公司），ABTS（合肥博美生物有限公司），α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、酪氨酸酶（Worthington 化學(xué)公司），PNPG（上海斯信生物科技有限公司），阿卡波糖（拜耳醫(yī)藥保健有限公司）。

鼠傷寒沙門氏菌、枯草桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌均來自中南林業(yè)科技大學(xué)微生物教研室。

1.2 儀器與設(shè)備

UV1800 紫外可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司），Rotavator R-3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（天津市泰斯特儀器有限公司），L420 多功能酶標(biāo)儀（美國PerkinElmer 公司），F(xiàn)ORMA311 恒溫箱（美國Thermo 公司），JP-150A-8 高速多功能粉碎機（永康市久品工貿(mào)有限公司）。

1.3 方 法

1.3.1 活性物質(zhì)的提取

手工分離果皮和種子，用清水沖洗干凈粘附的果肉，晾干，置于45 ℃烘箱中干燥36 h 后，粉碎成粉末狀（過60 目篩）。稱取10 g 果皮（種子）粉末，加入50 mL 70%的乙醇，在室溫下浸提4 h后過濾，用等量的乙醇再次浸提1 次濾渣。合并2次的濾液，在40 ℃下真空減壓濃縮至20 mL，得到相當(dāng)于含生藥500 g/L 的乙醇提取液，-20 ℃下保存，待用。

1.3.2 提取液活性成分含量的測定

參考Bursal 等[9]的方法測定提取液的多酚含量。取1 mL 提取液，依次加入22 mL 去離子水、500 μL 福林試劑和300 μL 10%的碳酸鈉溶液，室溫下反應(yīng)30 min 后，于760 nm 波長下測吸光度，取3 次重復(fù)的平均值作為試驗結(jié)果。多酚含量以每克干樣品中沒食子酸當(dāng)量來計算（mg/g）。

參考Zielinski 等[10]的方法測定提取液的黃酮含量。取250 μL 提取液，加入2 720 μL 30%的乙醇溶液和120 μL 的亞硝酸鈉溶液（0.5 mol/L），振蕩30 s 后，靜止反應(yīng)5 min，再加入120 μL 10%的氯化鋁溶液反應(yīng)5 min，最后加入800 μL 氫氧化鈉溶液（1 mol/L），于510 nm 波長下測吸光度，取3 次重復(fù)的平均值作為試驗結(jié)果。黃酮含量以每克干樣品中兒茶素當(dāng)量計算（mg/g）。

1.3.3 提取液生物活性的測定

1.3.3.1 抗氧化活性的測定

采用3 種方法進(jìn)行抗氧化活性的測定[11]，每組試驗均進(jìn)行3 次平行試驗，取其平均值作為試驗結(jié)果?？寡趸芰σ悦靠烁蓸悠分蠺rolox 當(dāng)量（μmoL/g）計算。

DPPH·清除活性的測定方法：取300 μL 提取液，加入1.9 mL 的DPPH 溶液（0.094 mmol/L）混合均勻后，置于室溫下反應(yīng)30 min，以80%的甲醇調(diào)零，并于517 nm 波長下測定吸光度。

ABTS+·清除活性測定方法：取1 mL 提取液和4 mL ABTS+·混合溶液，搖勻，以無水乙醇作為空白，于734 nm 波長下測定吸光度。

鐵離子還原力（FRAP）測定方法：取900 μL提取液，加入2.7 mL 的FRAP 溶液和270 μL 超純水，振蕩均勻，置于37 ℃的水浴鍋中30 min。以80%的甲醇溶液作為空白，于595 nm 波長下測定吸光度。

1.3.3.2 抑菌活性的測定

試驗用菌種包括鼠傷寒沙門氏菌、枯草桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。采用打孔法[12]測定提取液的抑菌活性。每孔加入30 μL 不同濃度的樣品，以等量的無菌蒸餾水為陰性對照，以等量的0.3 mg/L 青霉素為陽性對照，在35 ℃的溫度條件下培養(yǎng)24 h。重復(fù)試驗3 次，取其平均值。采用刃天青法[13]測定提取液的最小抑菌濃度，取無菌96 孔板，向所需各孔中加入80 μL 液體培養(yǎng)基，第1排孔加80 μL 樣品（500 g/L）；用逐步梯度法稀釋樣品濃度，分別用無菌水和0.3 mg/L青霉素作為陰性對照和陽性對照。每孔加入10 μL 細(xì)菌稀釋液（5×106CFU/mL），混勻后，于37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)20 h，再分別加入10 μL 刃天青，放置2 h 后觀察試驗結(jié)果。粉紅色表示有細(xì)菌生長，藍(lán)色表示無細(xì)菌生長，以抑制細(xì)菌生長樣品的最小濃度作為最小抑菌濃度。

1.3.3.3 抑酶活性的測定

1）酪氨酸酶活性抑制率的測定。參考王雅等[14]的方法進(jìn)行酪氨酶活性的測定?？瞻捉M準(zhǔn)確量取30 μL去離子水和80 μL磷酸緩沖溶液于96孔板中，在37 ℃的恒溫水浴中保存10 min；再加入50 μL比活力為835 U/mg的酪氨酸酶溶液，反應(yīng)5 min后，用酶標(biāo)儀于492 nm 波長下迅速測定吸光度（A1）。酪氨酸對照組以50 μL 的L-酪氨酸溶液和30 μL的磷酸緩沖溶液代替空白組的磷酸緩沖液，測定吸光度（A2）；樣品對照組以30 μL 的樣品溶液代替空白組的去離子水，測定吸光度（A3）；試驗組以30 μL 的樣品溶液代替酪氨酸對照組的去離子水，測定吸光度（A4）。每組以4 個重復(fù)孔為平行，計算黑老虎不同部位提取液對酪氨酸酶活性的抑制率（R1），并且以維生素C 溶液（10 g/L）作為對照。

R1＝[1-(A4-A3)/(A2-A1)]×100%。

2）α-葡萄糖苷酶活性抑制率的測定。參考李項輝[15]的方法，并適當(dāng)修改，進(jìn)行α-葡萄糖苷酶活性的測定。取30 μL 黑老虎提取液置于96孔板孔中，試驗組加入50 μL 的α-葡萄糖苷酶（0.2 U/mg） 和50 μL 的PNPG（24 mmol/L），37 ℃條件下反應(yīng)30 min，加100 μL 的Na2CO3溶液（0.1 mol/L），37 ℃條件下反應(yīng)10 min，用酶標(biāo)儀于405 nm波長下測定吸光值（A1）。空白組（A2）以50 μL 磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L）代替50 μL的α-葡萄糖苷酶（0.2 U/mg）。樣品對照組（A3）以30 μL 磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L）代替30 μL 的樣品。溶劑對照組（A4）以80 μL 磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L）代替30 μL 的樣品和50 μL 的α-葡萄糖苷酶（0.2 U/mg）。以阿卡波糖作為陽性對照，通過下式計算黑老虎不同部位提取液對α-葡萄糖苷酶活性的抑制率（R2）。

R2＝[1-(A1-A2)/(A3-A4)]×100%。

3）α-淀粉酶活性抑制率的測定。參考葉瓊仙等[16]的方法進(jìn)行α-淀粉酶抑制活性的測定。取200 μL 樣品溶液與200 μL 的α-淀粉酶溶液混合，在37 ℃下孵育10 min 后加入400 μL 0.25%的淀粉溶液，置于37 ℃水浴中反應(yīng)10 min 后加入1.0 mL DNS 顯色劑，置于沸水中加熱10 min 后冷卻至室溫。加入10 mL 蒸餾水稀釋后，于540 nm波長下測定吸光度（A1），以200 μL 20 mmol/L pH6.9 的磷酸鈉緩沖液代替200 μL 的α-淀粉酶溶液作為背景對照（A2），以200 μL 20 mmol/L pH6.9 的磷酸鈉緩沖液代替200 μL 樣品溶液作為陰性對照（A3）。通過下式計算黑老虎不同部位提取液對α-淀粉酶活性的抑制率（R3）。

R3＝[1-(A1-A2)/A3]×100%。

以酶活性抑制率為50%時樣品的濃度為半數(shù)抑制濃度（IC50）。使用GraphPad Prism7.0 軟件計算IC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑老虎果皮和種子提取液的多酚和黃酮含量

黑老虎果皮和種子提取液中多酚和黃酮含量如圖1所示。由圖1可見，黑老虎果皮和種子提取液的多酚含量為0.21 ～0.95 mg/g，4 種樣品提取液的多酚含量存在顯著性差異（P＜0.05），按其含量由高到低依次為大紅果皮、紫黑果皮、紫黑種子、大紅種子，2 個品種黑老虎果皮的多酚含量均高于種子。黑老虎果皮和種子提取液的黃酮含量為0.66 ～1.61 mg/g，換算成鮮果皮和種子的黃酮含量為0.09 ～0.22 mg/g，低于貴州黑老虎鮮果皮和種子的黃酮含量（1.21 ～12.69 mg/g），接近湖南黑老虎鮮果皮和種子的黃酮含量（0.98 ～4.22 mg/g）[17]。其中，紫黑果皮的黃酮含量最高，紫黑種子的含量最低。與多酚含量相似，2 個品種黑老虎果皮的黃酮含量高于種子。黑老虎果皮的多酚和黃酮含量均高于種子，其他產(chǎn)地的黑老虎也存在這種差異[17]，可能與黑老虎的品種、部位以及果實成熟度等因素有一定關(guān)系。

2.2 黑老虎果皮和種子提取液的生物活性

2.2.1 抗氧化活性

使用3 種方法測得的黑老虎果皮和種子提取液的抗氧化活性見表1。由表1可知，提取液的DPPH·清除活性為0.35 ～0.40 μmol/g，各樣品中以大紅果皮的DPPH·清除活性最高。ABTS+·清除活性為0.16 ～0.29 μmol/g，4 種樣品中大紅果皮的活性最高。鐵離子還原力也是以大紅果皮提取液最高。此外，4 種樣品中除紫黑果皮的DPPH·清除活性外，其他均呈現(xiàn)出果皮抗氧化活性大于種子的趨勢。這可能是因為果皮較種子的多酚和黃酮含量高[18]。

圖1 黑老虎果皮和種子提取液中多酚和黃酮的含量Fig.1 The contents of polyphenols and flavonoids in extracts of peel and seed from K.coccinea

表1 黑老虎果皮和種子提取液的抗氧化活性?Table1 Antioxidant activity of peel and seed extracts from K.coccinea μmol/g

2.2.2 抑菌活性

抑菌試驗結(jié)果表明，黑老虎果皮和種子提取液對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌3 種細(xì)菌未顯示抑菌效果，對鼠傷寒沙門氏菌和枯草桿菌有一定的抑制作用，結(jié)果見表2。由表2可知，黑老虎果皮和種子提取液在試驗濃度下對鼠傷寒沙門氏菌的抑菌圈直徑為7.22 ～11.90 mm。其中，大紅果皮提取液的抑菌圈直徑最大，為(11.90±0.04) mm，大紅種子提取液的抑菌圈直徑最小，紫黑果皮和種子的抑菌圈直徑無顯著性差異。4 種樣品提取液對枯草桿菌的抑菌圈直徑為7.30 ～13.40 mm，紫黑果皮提取液抑菌圈直徑最大，為(13.40±0.05) mm，紫黑種子提取液的抑菌圈直徑最小。黑老虎果皮提取液對鼠傷寒沙門氏菌和枯草桿菌的抑菌效果均優(yōu)于種子，這可能是因為果皮中多酚和黃酮含量均高于種子。

最小抑菌濃度試驗結(jié)果（表2）也表明，果皮提取液的抑菌活性顯著優(yōu)于種子，大紅不同部位提取液的抑菌活性強于紫黑。由表2可知，在對鼠傷寒沙門氏菌的最小抑菌濃度試驗中，大紅果皮的抑菌效果最好，其最小抑菌質(zhì)量濃度最小，為31.25 g/L，顯著優(yōu)于紫黑果皮和紫黑種子提取液的抑菌活性，后兩者的最小抑菌質(zhì)量濃度均為62.5 g/L，也顯著高于大紅種子的抑菌活性，后者的最小抑菌質(zhì)量濃度為125 g/L。在對枯草桿菌的最小抑菌濃度試驗中，2 個黑老虎品種均為果皮的抑菌效果優(yōu)于種子，果皮的最小抑菌質(zhì)量濃度均為31.25 g/L，種子的最小抑菌質(zhì)量濃度均為62.50 g/L。黑老虎大紅種子提取液對枯草桿菌的抑菌效果與紫黑種子相當(dāng)，但對沙門氏菌的抑菌效果遠(yuǎn)不如紫黑種子。

2.2.3 抑酶活性

2.2.3.1 對酪氨酸酶活性的抑制率

黑老虎果皮和種子提取液對酪氨酸酶的抑制活性如圖2所示。由圖2可見，在一定的濃度范圍內(nèi)，隨著果皮和種子提取液濃度的增大，其對酪氨酸酶的抑制率均呈上升趨勢，當(dāng)提取液質(zhì)量濃度為67.5 g/L 時，對酪氨酸酶的抑制率為23.51%～45.13%，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到500 g/L 時，種子提取液的抑制率僅為55.43%～60.43%，而果皮提取液的抑制率可達(dá)到90%以上，低于對照組維生素C 溶液對酪氨酸酶活性的抑制率，維生素C溶液質(zhì)量濃度為10 g/L 時，抑制率為96.81%。IC50計算結(jié)果表明，大紅果皮提取液IC50為117.23 g/L，紫黑果皮為90.27 g/L，大紅種子為248.57 g/L，紫黑種子為310.64 g/L。因此，黑老虎果皮和種子提取液對酪氨酸酶的抑制活性由大到小依次為紫黑果皮、大紅果皮、大紅種子、紫黑種子。

表2 黑老虎果皮和種子提取液的抑菌活性Table2 The bacteria inhibition activities of peel and seed extracts from K.coccinea

圖2 黑老虎果皮和種子提取液對酪氨酸酶活性的抑制率Fig.2 The tyrosinase inhibition rate of peel and seed extracts from K.coccinea

2.2.3.2 對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制率

由黑老虎果皮和種子提取液對α-葡萄糖苷酶（圖3）和α-淀粉酶的抑制活性（圖4）可以看出，4 種提取液對2 種酶的抑制效果均呈劑量濃度效應(yīng)。當(dāng)提取液質(zhì)量濃度在125 g/L 時，抑制效果較弱，抑制率僅為3.43%～13.56%。隨著質(zhì)量濃度提升至250 g/L，提取液對2 種酶的抑制率明顯提高，尤其是大紅果皮提取液展現(xiàn)了最好的抑制活性，在此質(zhì)量濃度下，對α-葡萄糖苷酶的抑制率達(dá)到了(43.47±1.37)%，對α-淀粉酶的抑制率達(dá)到了(49.73±0.99)%。當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到500 g/L時，4 種提取液對α-葡萄糖苷酶的抑制率為31.18%～62.96%，仍以大紅果皮提取液的抑制活性為最高，大紅果皮提取液對α-淀粉酶的抑制效果也最好，達(dá)到了(71.68±1.25)%。

圖3 黑老虎果皮和種子提取液對α-葡萄糖苷酶活性的抑制率Fig.3 The α-glucosamine inhibitory rate of peel and seed extracts from K.coccinea

相同品種的黑老虎均是果皮提取液對2 種酶的抑制率大于種子，這可能是因為果皮中含有較多的多酚類物質(zhì)所致。但整體活性弱于陽性對照阿卡波糖，質(zhì)量濃度為5 g/L 的阿卡波糖對0.2 U/mL 的α-葡萄糖苷酶的抑制率為(85.14±2.29)%；質(zhì)量濃度為2 g/L 的阿卡波糖對0.5 U/mL 的α-淀粉酶的抑制率為(89.87±2.36)%。阿卡波糖對α-淀粉酶的抑制率明顯高于對α-葡萄糖苷酶的抑制率。

圖4 黑老虎果皮和種子提取液對α-淀粉酶活性的抑制率Fig.4 The α-amylase inhibition rate of peel and seed extracts from K.coccinea

3 結(jié)論與討論

本試驗中對湖南通道黑老虎果皮和種子提取液的生物活性進(jìn)行了測定，結(jié)果表明2 個黑老虎品種（紫黑和大紅）的果皮和種子提取液對鼠傷寒沙門氏菌和枯草桿菌有較好的抑菌活性，有較高的酪氨酸酶抑制活性，同時顯示了較好的抗氧化活性及對α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果，且果皮提取液的生物活性優(yōu)于種子提取液。其中，大紅果皮提取液對鼠傷寒沙門氏菌的抑制效果最佳，紫黑果皮對枯草桿菌和酪氨酸酶的抑制效果最佳。黑老虎作為我國少數(shù)民族的傳統(tǒng)中藥材，具有較高的藥用價值，但其果實目前主要作為鮮果食用，尚未得到充分利用，會產(chǎn)生大量的皮籽等副產(chǎn)物，該研究結(jié)果可為黑老虎果皮種子的綜合開發(fā)利用提供參考，尤其是其果皮提取液具有抑制酪氨酸酶的功效，可作為美容產(chǎn)品活性成分的來源。

保健和皮膚美白已成為廣大民眾關(guān)注的熱點。大量研究結(jié)果表明，人體很多疾病的發(fā)生與體內(nèi)活性氧自由基的增多有較大關(guān)系。血清中脂質(zhì)自由基的分解產(chǎn)物醛可與蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)中的氨基反應(yīng)，并使蛋白質(zhì)變性和酶失活，進(jìn)而被吞噬細(xì)胞吞噬，但這些變性物質(zhì)未能被完全消化，在細(xì)胞內(nèi)累積，使皮膚色素沉積。同時，色素的生成與酪氨酸酶有緊密關(guān)系，酪氨酸酶是生物體內(nèi)黑色素生成的關(guān)鍵酶，酪氨酸酶抑制劑被廣泛應(yīng)用于美白化妝品領(lǐng)域，在醫(yī)藥方面用于預(yù)防和治療黑色素瘤、黃褐斑等色素沉積性疾病。多酚類物質(zhì)能有效地清除自由基，酚類化合物通過羥基基團(tuán)提供氫質(zhì)子，使具有高度氧化性的自由基還原，進(jìn)而發(fā)揮清除自由基的目的，或通過抑制或阻斷氧化反應(yīng)的啟動/傳播鏈，將自由基轉(zhuǎn)化為危害性較小的分子，修復(fù)人體細(xì)胞的氧化損傷[19]。同時，一些多酚類化合物具有較好的抑制酪氨酸酶活性，如從紫花苜蓿鮮花瓣中分離得到山奈酚對蘑菇酪氨酸酶的50%酶抑制濃度（IC50）為67 mg/L[20]。篩選具有較高抗氧化活性成分的天然產(chǎn)物已成為研究熱點[21-22]。本試驗結(jié)果表明，果皮提取液對酪氨酸酶的抑制率明顯優(yōu)于種子，這可能與不同品種的果皮和種子中黃酮含量不同有關(guān)，這與櫸樹葉對酪氨酸酶抑制率的變化趨勢一致[23]，其抑制酪氨酸酶的具體化合物成分有待進(jìn)一步研究。

本試驗中，黑老虎提取液展示了較好的清除自由基活性、抑制酪氨酸酶活性和抑菌活性，且果皮提取液的生物活性強于種子提取液，可能與其所含的活性成分，尤其是多酚類化合物，有較大關(guān)系。多酚可以破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)而增加細(xì)胞通透性，或多酚結(jié)構(gòu)中的酚羥基易與蛋白質(zhì)分子多點結(jié)合，使酶的活性降低，減緩細(xì)菌能量代謝速度，達(dá)到預(yù)防并阻止微生物侵染的目的，因而具有抗菌活性[24]。劉麗[25]對五味子屬南五味子的研究結(jié)果表明果皮的抑菌效果一般優(yōu)于種子，與本試驗結(jié)果一致。南五味子醇提物對金黃色葡萄球菌也顯示出較好的抑菌活性[26]。有研究結(jié)果表明，黑老虎果皮中含有矢車菊素-3-木糖基-蕓香糖苷、飛燕草素-3-木糖基-蕓香糖苷、矢車菊素-3-葡糖基-蕓香糖苷和矢車菊素-3-蕓香糖苷等花青素[27]，這些活性成分主要通過抑制活性氧（ROS）的形成，抑制酶的活性，螯合參與自由基生成的微量元素等途徑發(fā)揮抗氧化作用，清除活性氧，以及上調(diào)或保護(hù)抗氧化防御系統(tǒng)[28]。同時，花青素類多酚化合物還有一定的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，如具有矢車菊苷元的矢車菊素-3-葡萄糖苷能改善H2O2氧化應(yīng)激引起的脂肪細(xì)胞對胰島素的抵抗[29]，富含矢車菊素-3-葡萄糖苷的紅樹莓花色苷提取物對α-葡萄糖苷酶的半抑制質(zhì)量濃度（IC50）為178.89 mg/L，低于陽性對照阿卡波糖[30]。另外，黑老虎果皮中的維生素C 也具有抗氧化活性，可促進(jìn)膠原蛋白的形成，具有抗氧化、抗衰老的作用，可用于皮膚美容。

黑老虎種子的主要成分為脂肪酸。有研究結(jié)果表明，黑老虎籽含有8 種飽和脂肪酸和4 種不飽和脂肪酸，其中不飽和脂肪酸總量為2.13×105mg/kg，占脂肪酸總量的87.19%，還含有一些黃酮類化合物（18.4 g/kg）[31]。但對于黑老虎種子中黃酮類化合物具體組成的研究尚未見報道。此外，生物活性成分的組成也受提取方法、提取溶劑的影響。本試驗中采用常規(guī)溶劑乙醇作為多酚提取劑，在超聲波產(chǎn)生的空穴效應(yīng)作用下，使果皮中更多的多酚類物質(zhì)釋放到溶劑中，但未能對多酚類化合物的具體組成及含量進(jìn)行檢測，后續(xù)將通過超高壓液相色譜-飛行時間質(zhì)譜儀（UPLCQ-TOF）等色譜手段進(jìn)一步對其具體活性成分進(jìn)行分析。