外源激素處理對(duì)花椒插穗生根及其生理生化特性的影響

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（1.黃河下游森林培育國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271018；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，山東 泰安 271018；3.山東省陽(yáng)信縣職業(yè)中專，山東 濱州 251800；4.濟(jì)南市林業(yè)科技推廣站，山東 濟(jì)南271100；5.上海市環(huán)境學(xué)校，上海 200135；6.山東省國(guó)土空間數(shù)據(jù)遙感技術(shù)中心，山東 濟(jì)南 250002）

扦插繁殖是植物無(wú)性繁殖中應(yīng)用最廣泛的一種傳統(tǒng)技術(shù)，是用部分或全部營(yíng)養(yǎng)器官作為繁殖材料，在適宜條件下插入土壤或營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)中，促使其發(fā)生不定根或不定芽，利用植物細(xì)胞的全能性培育成完全獨(dú)立植株的一種無(wú)性繁殖方法[1-2]。

影響插穗扦插成活的因素較多，如植物品種、溫度、插穗成熟度、插床類型、基質(zhì)以及外源激素等[3]，其中，外源激素處理對(duì)花椒Zanthoxylum bungeanum扦插生根有顯著影響[4]。1935年，Zimmerman 等[5]發(fā)現(xiàn)α-NAA 和IAA 等8 種 新的有機(jī)化合物能促進(jìn)根系生長(zhǎng)，諸多學(xué)者便開(kāi)始研究生長(zhǎng)素對(duì)花椒扦插育苗的作用。陳榮江等[6]開(kāi)展了生長(zhǎng)素種類和濃度的正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍內(nèi)，IAA（indole-3-acetic acid）和NAA（indoleethyl butyric acid）配合使用可明顯提高花椒插穗的生根率；宋建偉等[7]用不同質(zhì)量濃度IBA 處理花椒硬枝插穗，發(fā)現(xiàn)50 ～100 mg/L IBA（indoleethyl butyric acid）處理12 h 效果較好，且明顯縮短了育苗時(shí)間。另外，在扦插基質(zhì)方面，王麗敏[8]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，適宜的溫度和濕度條件下，進(jìn)行小花花椒扦插時(shí)選用有機(jī)基質(zhì)比無(wú)機(jī)基質(zhì)成活率高，生根時(shí)間縮短，原因是有機(jī)基質(zhì)多由珍珠巖、蛭石以及草炭等材料組成，具有養(yǎng)分含量高、透水性強(qiáng)、透氣性好等特點(diǎn)。

隨著花椒產(chǎn)品資源的開(kāi)發(fā)和利用，以及人們對(duì)飲食要求的提高，花椒作為調(diào)味食品越來(lái)越受到青睞，其市場(chǎng)潛力巨大。若要增加花椒的生產(chǎn)效益，提高花椒的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，首先應(yīng)提高花椒的苗木質(zhì)量，并保持其優(yōu)良的生產(chǎn)特性。本試驗(yàn)中以‘獅子頭’嫩枝為試材，使用不同濃度不同種類的外源激素處理其插穗后進(jìn)行扦插試驗(yàn)，測(cè)定扦插生根關(guān)鍵物質(zhì)和生物酶活性，并持續(xù)觀測(cè)根系發(fā)育過(guò)程，旨在探索激素促進(jìn)花椒根系發(fā)生和發(fā)育的生理機(jī)制，為花椒優(yōu)良品種的繁育提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

在山東省泰安市夏張鎮(zhèn)優(yōu)木苗圃合作社溫室內(nèi)進(jìn)行扦插試驗(yàn)。溫室長(zhǎng)20.0 m，寬4.0 m，高2.5 m，溫室內(nèi)采用全日照間歇式噴霧裝置和水簾降溫系統(tǒng)控制溫濕度。扦插前10 d，噴施0.3%KMnO4溶液對(duì)基質(zhì)進(jìn)行消毒處理，同時(shí)將基質(zhì)深翻、攪勻后，用地膜覆蓋2 d，揭開(kāi)，攤晾通風(fēng)后備用。采用50穴育苗穴盤(pán)（54 cm×28 cm）進(jìn)行扦插，穴盤(pán)底部鋪設(shè)碎石子和河沙，防止水分積聚。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2019年6月，以生長(zhǎng)一致的2 ～3年生‘獅子頭’實(shí)生苗嫩枝為試材進(jìn)行扦插。將插穗在0.1%KMnO4溶液中浸泡消毒1 h 并洗凈后，在不同質(zhì)量濃度、不同種類的外源激素中浸泡插穗1 h，分別為250、500 mg/L 的IAA（處理編號(hào)T2、T3）、IBA（處理編號(hào)T4、T5）和NAA（處理編號(hào)T6、T7），然后剪掉插穗基部1 cm，將其洗凈用于扦插，以清水處理為對(duì)照（處理編號(hào)T1）。選用珍珠巖和蛭石的混合基質(zhì)（質(zhì)量比為2∶1）作為扦插基質(zhì)，采用直插法進(jìn)行扦插。采用完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每小區(qū)扦插150 株，重復(fù)3 次。

1.3 管理方法

扦插后，各處理穴盤(pán)做好標(biāo)記，且各扦插處理幼苗均采取統(tǒng)一田間管理措施。溫室內(nèi)環(huán)境溫度為24 ～28 ℃，相對(duì)濕度約為70%。生根前，每隔5～7 d分別用0.5%多菌靈溶液和0.3%KMnO4溶液進(jìn)行交替消毒，防止細(xì)菌、病蟲(chóng)導(dǎo)致的扦插苗基部感染或腐爛。生根后至移栽前，進(jìn)行消毒滅菌處理，給予幼苗良好的生長(zhǎng)環(huán)境。

1.4 測(cè)定方法

扦插后，每隔10 d 采樣1 次，觀察插穗基部變化情況。每個(gè)處理取10 株健康植株，剝?nèi)』? cm 的韌皮層，用蒸餾水洗凈后，在液氮中儲(chǔ)存，帶回實(shí)驗(yàn)室于-80 ℃保存待測(cè)。超氧物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性采用氮藍(lán)四唑法（nitroblue tetrazolium，NBT）測(cè)定[9]，過(guò)氧化物酶（peroxidase，POD）活性采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定，可溶性糖含量采用蒽酮比色法于630 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定，多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）活性采用鄰苯二酚比色法[10]測(cè)定，可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250 法于595 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定，吲哚乙酸氧化酶（indoleacetic acid oxidase，IAAO）活性采用紫外分光光度法于530 nm波長(zhǎng)下測(cè)定[11]。各指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3 次，并記錄數(shù)據(jù)。60 d 后，調(diào)查統(tǒng)計(jì)不同處理的插穗生根成活情況，包括生根數(shù)量、根長(zhǎng)、生根率、平均根長(zhǎng)、根數(shù)和生根指數(shù)，并記錄數(shù)據(jù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用Excel 2013 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用SPSS 22.0 軟件對(duì)所有指標(biāo)進(jìn)行方差分析和Duncan 多重比較。為避免使用單一指標(biāo)評(píng)價(jià)插穗生根效果的片面性，通過(guò)計(jì)算生根效果指數(shù)對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)分析。

生根效果指數(shù)=(成活率/插穗成活數(shù))×平均根長(zhǎng)×生根數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 花椒插穗根系發(fā)生進(jìn)程

扦插后，取樣觀察插穗生根進(jìn)展，結(jié)果如圖1所示。扦插后10 d 時(shí)，插穗基部皮孔膨脹、外凸、開(kāi)裂（圖1A），并在韌皮部與木質(zhì)部夾層形成乳白色幼嫩組織，即愈傷組織（圖1B）；扦插后15 ～20 d，愈傷組織繼續(xù)膨大，有愈傷組織形成的插穗數(shù)量繼續(xù)增加（圖1C）；扦插后25 ～30 d，愈傷組織已不再生長(zhǎng)，部分插穗愈傷組織開(kāi)始褐變；地上部分出現(xiàn)萌芽，幼葉也開(kāi)始發(fā)育，不定根從愈傷組織處（圖1D）或皮孔開(kāi)裂處（圖1E）發(fā)生后進(jìn)行伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，且數(shù)量逐漸增多（圖1F），同時(shí)，插穗地上部分形成幼嫩新梢（圖1G）。

成活的插穗中，愈傷組織和皮部均能生根，其中，愈傷組織生根株數(shù)占生根總數(shù)的73.25%，皮部生根株數(shù)占生根總數(shù)的25.62%，兩者均生根的比例為1.13%。由此可見(jiàn)，多數(shù)花椒扦插苗不定根的發(fā)生屬愈傷組織生根型，即插穗基部下切口以上3 cm 范圍出現(xiàn)明顯膨大且長(zhǎng)出根系（圖1F）。另外，若干皮部生根插穗的基部水分吸收過(guò)多，腐爛較為嚴(yán)重，甚至死亡（見(jiàn)圖1H）。少部分插穗組織腐爛卻正常生根（圖1I）?；ń非げ迳^(guò)程大致分為4 個(gè)階段：扦插后0 ～10 d為花椒愈傷組織誘導(dǎo)期；扦插后10 ～30 d 為不定根形成期；扦插后30 ～40 d 為不定根伸長(zhǎng)期；扦插40 d 以后為生根后期。

2.2 激素處理對(duì)花椒插穗生根指標(biāo)的影響

不同濃度激素處理中花椒插穗的生根情況存在差異（表1）。不同濃度激素處理后，花椒插穗的生根率、生根數(shù)量、平均根長(zhǎng)和生根效果指數(shù)等方面均具有顯著差異（F=23.35，P＜0.05）。按照IAA 處理后花椒成活率由高到低排序，各處理依次為T(mén)2、T3、T1，根系形態(tài)特性與之表現(xiàn)相同。在IBA 處理中，以250 mg/L IBA 處理效果最好，T4 和T5 處理的插穗成活率較T1 處理分別提高了119.53%、82.59%，T4 處理的插穗生根數(shù)量、平均根長(zhǎng)和生根效果指數(shù)較T1 處理分別提高76.58%、46.79%和159.70%。在NAA 處理中，按照插穗生根數(shù)量、平均根長(zhǎng)和生根效果指數(shù)由高到低，各處理依次均為T(mén)7、T6、T1，說(shuō)明在一定濃度范圍內(nèi)，較高濃度的NAA 更有利于根系的發(fā)生。

2.3 激素處理對(duì)花椒插穗生理生化指標(biāo)的影響

2.3.1 可溶性蛋白含量變化

不同激素處理中花椒插穗可溶性蛋白含量的變化不同（圖2）。T1 和T2 處理中，插穗可溶性蛋白含量隨扦插時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低，其他處理中其含量大致表現(xiàn)為“降低—升高—降低”的變化趨勢(shì)。扦插后0 ～20 d 時(shí)，插穗可溶性蛋白含量緩慢下降，其中，T4 和T7 處理中插穗可溶性蛋白含量下降速度較快，由最初的25.17 mg/g分別下降至20.08、21.34 mg/g，二者平均下降比例為19.71%。扦插后20 ～40 d 為不定根形成和伸長(zhǎng)階段，該時(shí)期插穗可溶性蛋白含量逐漸升高。另外，T3、T4 和T6 處理中插穗可溶性蛋白含量在扦插后40 d 時(shí)達(dá)到峰值，T5 和T7 處理中其含量在扦插后30 d 時(shí)達(dá)到峰值。而T1 和T2 處理中插穗可溶性蛋白含量持續(xù)下降，扦插后20 ～50 d時(shí)，T1 處理中其含量由22.35 mg/g 急劇下降至13.25 mg/g；T2 處理中其含量下降趨勢(shì)相對(duì)平緩，由22.07 mg/g 降至18.89 mg/g。

圖1 花椒扦插生根過(guò)程中不同階段插穗的情況Fig.1 Rooting development properties of Z.bungeanum in different cutting stages

表1 不同濃度激素處理中花椒插穗的生根情況Table1 Duncan multiple comparisons of rooting parameters with various exogenous hormones treatments in pepper cuttings

2.3.2 可溶性糖含量的變化

不同激素處理中花椒插穗可溶性糖含量的變化大致相似（圖3），均呈現(xiàn)“下降—上升—下降”的變化趨勢(shì)。扦插后0 ～10 d 時(shí)，可溶性糖含量持續(xù)下降。扦插后10 ～30 d 時(shí)，不定根開(kāi)始形成，插穗萌芽抽枝并展葉，可溶性糖含量提高。其中，T1、T5 和T7 處理中可溶性糖含量在扦插后40 d時(shí)達(dá)到峰值，其余處理在扦插后30 d 時(shí)達(dá)到峰值。與之不同的是，清水處理后不同時(shí)期中插穗可溶性糖含量均低于各激素處理，且有顯著差異。另外，在愈傷組織誘導(dǎo)期，清水處理中插穗可溶性糖含量的下降速度明顯高于各激素處理（P＜0.05）。扦插后30 ～50 d，不同處理的插穗不定根迅速伸長(zhǎng)，可溶性糖含量持續(xù)下降。

圖2 不同激素處理中花椒插穗可溶性蛋白含量的變化Fig.2 Changes of soluble protein contents during rooting process of pepper cuttings

圖3 不同激素處理中花椒插穗可溶性糖含量的變化Fig.3 Changes of soluble sugar contents during rooting process of pepper cuttings

2.3.3 SOD 活性的變化

不同激素處理中花椒插穗SOD 活性隨著生根進(jìn)程均呈先升高、后降低的變化趨勢(shì)（圖4），且除T5 處理中SOD 酶活性在扦插后10 d 時(shí)低于T1處理外，其他激素處理在不同測(cè)定時(shí)間的SOD 酶活性均高于對(duì)照（T1）。扦插后30 d 時(shí)，與T1相比，其他處理中插穗SOD 活性均提高，分別提高了36.47%、20.57%、38.35%、11.09%、51.50%和8.53%；而T1 處理在扦插后40 d 時(shí)SOD 酶活性到達(dá)峰值，之后便開(kāi)始逐漸下降。另外，對(duì)照組和激素處理組插穗SOD 活性峰值出現(xiàn)的時(shí)間均為不定根表達(dá)時(shí)期，而激素處理中SOD 活性峰值出現(xiàn)的時(shí)間早于T1 處理。

2.3.4 POD 活性的變化

不同激素處理中花椒插穗POD 活性在不同生根時(shí)期內(nèi)變化趨勢(shì)基本一致（圖5），均表現(xiàn)為“升高—降低—升高—降低”的變化趨勢(shì)，且不同處理之間差異顯著（P＜0.05）。扦插后0 ～10 d 時(shí)，為扦插前期，即愈傷組織誘導(dǎo)時(shí)期，POD 活性迅速上升，且大致在扦插后10 d 時(shí)達(dá)到峰值。之后POD 活性在扦插后20 d 時(shí)降低，且T1 處理中其活性均低于其他激素處理。隨后在不定根表達(dá)時(shí)期又出現(xiàn)1 個(gè)明顯的峰值，且此時(shí)POD 活性較第1 峰值顯著提高（P＜0.05），其中，T1、T2、T5 和T7 處理在扦插后30 d 時(shí)出現(xiàn)第2 峰值，而T3 與T6 處理峰值出現(xiàn)時(shí)間滯后于上述4 個(gè)處理，其第2 峰值在扦插后40 d 時(shí)出現(xiàn)。在生根伸長(zhǎng)期，不同處理中插穗POD 活性均下降。

圖4 不同激素處理中花椒插穗SOD 活性的變化Fig.4 Changes of superoxide dismutase (SOD) activity during rooting process of pepper cuttings

圖5 不同激素處理中花椒插穗POD 活性的變化Fig.5 Changes of peroxidase (POD) activity during rooting process of pepper cuttings

2.3.5 PPO 活性的變化

不同激素處理中花椒插穗PPO 活性的變化不同（圖6）。T1（CK）處理中插穗PPO 活性表現(xiàn)為先下降、后上升、再下降的變化趨勢(shì)，各激素處理組中PPO 活性均呈緩慢上升后下降的變化趨勢(shì)。扦插后10 d 時(shí)，即愈傷組織誘導(dǎo)期，此時(shí)T1處理中PPO 活性緩慢下降，但差異不顯著，激素處理則提高了PPO 活性，其活性為逐漸上升的變化趨勢(shì)。扦插后20 d 時(shí)，不定根開(kāi)始形成，T1 處理中PPO 活性降低，而激素處理同樣促進(jìn)了PPO活性的提高。生根后期，不同處理中PPO 活性均顯著下降。另外，T1 處理中插穗PPO 活性在扦插后30 d 時(shí)達(dá)到峰值；激素處理組表現(xiàn)不同，其在扦插后20 d 時(shí)即達(dá)到峰值，較T1 處理提前10 d。

圖6 不同激素處理中花椒插穗PPO 活性的變化Fig.6 Changes of polyphenoloxidase (PPO) activity during rooting process of pepper cuttings

2.3.6 IAAO 活性的變化

不同激素處理中花椒插穗IAAO 活性變化趨勢(shì)基本一致（圖7），大致表現(xiàn)為生根前期至中期時(shí)其活性有所升高，至生根后期呈現(xiàn)緩慢降低的變化趨勢(shì)。扦插后0 ～10 d 時(shí)，即愈傷組織誘導(dǎo)期，IAAO 活性提高。扦插后10 ～20 d 時(shí)，即不定根形成期，T1 處理IAAO 活性略有升高，各激素處理中其活性均劇烈下降。扦插后20 ～30 d 時(shí)，為不定根形成后期，各激素處理中IAAO 活性表現(xiàn)為上升的變化趨勢(shì)，而T1 處理表現(xiàn)相反。扦插后30 ～40 d 時(shí)，不定根開(kāi)始伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，IAAO 活性隨之逐漸下降。進(jìn)入生根后期時(shí)，各處理中IAAO活性變化趨于平緩，且不同激素處理間存在一定的差異，這與PPO 和POD 活性變化規(guī)律相似。

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明：‘獅子頭’花椒扦插生根類型以愈傷組織生根型為主，少數(shù)為皮部生根類型；在不同的激素種類和質(zhì)量濃度中，250 mg/L IBA處理花椒插穗后生根效果最好。扦插后，花椒不定根的形成大致分為4 個(gè)階段：扦插后0 ～10 d為花椒愈傷組織誘導(dǎo)期；扦插后10 ～30 d 為不定根形成期；扦插后30 ～40 d 為不定根伸長(zhǎng)期；扦插40 d 以后為生根后期。適宜濃度的外源激素可促進(jìn)生根關(guān)鍵酶活性的提高，促進(jìn)花椒不定根的發(fā)生，且不定根發(fā)生與插穗可溶性蛋白含量關(guān)系密切。外源IAA 和IBA 處理中，隨著激素濃度的增加，插穗成活率先升高、后降低，且在激素質(zhì)量濃度為250 mg/L 時(shí)到達(dá)峰值；外源NAA 處理中，500 mg/L 處理的插穗生根效果最好。花椒插穗生根過(guò)程中，可溶性蛋白和可溶糖含量表現(xiàn)為先降低、后升高、再降低的單峰型變化規(guī)律。在愈傷組織誘導(dǎo)期，呼吸作用增強(qiáng)，代謝旺盛，二者含量迅速下降；在不定根伸長(zhǎng)期，隨著葉片光合作用增強(qiáng)，光合產(chǎn)物不斷積累，二者含量到達(dá)最高點(diǎn)；隨著幼苗生長(zhǎng)消耗，其含量逐漸下降。外源激素的種類及其濃度對(duì)花椒扦插生根相關(guān)酶活性的提高有顯著影響。SOD 活性提高利于不定根的形成；PPO 與IAAO 變化趨勢(shì)相似，二者均與愈傷組織的形成關(guān)系密切；POD 同樣對(duì)根原基的誘導(dǎo)和不定根的發(fā)生起重要作用。

圖7 不同激素處理中花椒插穗IAAO 活性的變化Fig.7 Changes of indoleacetic acid oxidase (IAAO) activity during rooting process of pepper cuttings

植物激素具有促進(jìn)植物細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)的作用，可以促進(jìn)插穗不定根的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，植物生長(zhǎng)激素的種類及其濃度與植物生根有密切關(guān)系[12]。Yan 等[13]用1 500 mg/L IBA 處理繡球丁香Syringa microphylla后，插穗成活率顯著提高；郭其強(qiáng)等[14]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)使用100 mg/L ABT 溶液浸泡插穗3 h，對(duì)藏柏Cupressus torulosa和巨柏C.gigantea愈傷組織產(chǎn)生和根系發(fā)育有促進(jìn)作用；外源激素不僅可以提高插穗的成活率，還可以加快根原基的誘導(dǎo)，促進(jìn)不定根的發(fā)生[15]。不同種類的外源激素對(duì)植物的作用效果有所差異，且其濃度的不同對(duì)不定根發(fā)生與生長(zhǎng)的作用也有差異。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)嚴(yán)格選擇植物外源激素的種類，并控制激素的濃度和處理時(shí)間，做到因植物種類而異，因植物的生物學(xué)特性而異。在本試驗(yàn)條件下，從綜合成活率和生根效果指數(shù)來(lái)看，選取250 mg/LIBA 浸泡處理‘獅子頭’花椒插穗2 h 最為適宜。在相關(guān)研究報(bào)道中，在速蘸條件下，IAA 與NAA配合使用，‘大紅袍’插穗生根效果更佳[6]；在50 ～100 mg/L 的IBA 中浸泡12 h，插穗的生根率較高[5-6]；600 mg/L GGR 處理日本朝倉(cāng)花椒插穗，可提高其扦插成活率[16]。因此，各種生長(zhǎng)素混合使用，可以提高插穗的成活率，縮短育苗時(shí)間和幼苗生根發(fā)育進(jìn)程，促進(jìn)根系發(fā)育。本試驗(yàn)中激素種類和處理時(shí)間單一，應(yīng)對(duì)混合激素的種類、濃度和處理時(shí)間在花椒扦插繁育中的應(yīng)用進(jìn)一步研究。

在插穗愈傷組織發(fā)生和不定根生長(zhǎng)過(guò)程中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗，供應(yīng)細(xì)胞分裂與分化所需養(yǎng)分，維持插穗正常的生命代謝活動(dòng)[17]?？扇苄蕴强勺鳛楹粑孜镏苯颖焕?，在插穗切口處迅速積累，供給大量不定根形成所需的消耗，是插穗生根過(guò)程中的直接能量來(lái)源[18]。本研究結(jié)果表明，花椒插穗整個(gè)生根過(guò)程中可溶性糖含量均大于可溶性蛋白含量，與閩楠Phoebe bournei嫩枝扦插與楓楊Pterocarya stenoptera硬枝扦插的研究結(jié)論一致[19-20]。這是因?yàn)槎咴谘趸纸狻⑨尫拍芰康耐瑫r(shí)，保留葉片和插穗新梢葉片可通過(guò)呼吸作用加速淀粉水解為可溶性糖，同時(shí)將過(guò)剩的可溶性糖儲(chǔ)存，使得其含量增加。在本研究中還發(fā)現(xiàn)，外源激素處理?xiàng)l件下，可溶性糖和可溶性蛋白2 類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量在生根過(guò)程中呈現(xiàn)“下降—上升—下降”的變化規(guī)律，這與歐榛Corylus avellana和蒙椴Tilia mongolica的扦插試驗(yàn)結(jié)果相似[21-22]。產(chǎn)生這種變化趨勢(shì)的主要原因是，在愈傷組織誘導(dǎo)期，呼吸作用增強(qiáng)，代謝旺盛，為防止切口感染，插穗進(jìn)行自我保護(hù)而消耗能量，二者含量迅速下降；在不定根伸長(zhǎng)期，隨著葉片抽梢生長(zhǎng)，光合作用增強(qiáng)，光合產(chǎn)物不斷積累，二者含量到達(dá)峰值；在不定根形成后期，花椒幼苗進(jìn)行正常生理活動(dòng)，消耗糖和蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使得二者含量降低。而清水處理中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量變化相對(duì)較小，峰值出現(xiàn)的時(shí)間存在滯后現(xiàn)象，可見(jiàn)，適宜濃度的外源激素處理對(duì)花椒不定根發(fā)生的促進(jìn)作用與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的合成和積累密切相關(guān)[23]。

生根相關(guān)生物酶活性對(duì)花椒扦插苗不定根的發(fā)生與生長(zhǎng)具有直接或間接的作用[24-25]。本研究結(jié)果表明，SOD 和PPO 活性在生根進(jìn)程中均呈現(xiàn)先升高、后降低的趨勢(shì)，外源激素的添加促進(jìn)了花椒插穗生根前期誘導(dǎo)酶活性的升高，這與滇杠柳Periploca forrestii和青榨槭Acer davidii的扦插試驗(yàn)結(jié)果一致[26-27]。在本研究中，SOD 活性峰值出現(xiàn)在不定根表達(dá)時(shí)期，PPO 活性峰值出現(xiàn)在不定根形成期，這表明SOD 活性提高有利于不定根的形成與分化，這與東京野茉莉Styrax tonkinensis扦插生根過(guò)程中SOD 活性的變化趨勢(shì)一致[28]。PPO 促進(jìn)愈傷組織形成，在不定根伸長(zhǎng)期，較低活性的PPO可以提高IAA 水平，從而促進(jìn)不定根發(fā)育[29]。

POD 和IAAO 活性同樣可以作為評(píng)價(jià)愈傷組織形成能力和不定根生成能力的指標(biāo)[30]。本研究結(jié)果表明，POD 和IAAO 活性在愈傷組織誘導(dǎo)期均呈上升趨勢(shì)，之后下降，在不定根形成期又明顯升高，于不定根表達(dá)期再次下降，二者均呈雙峰型變化，分別參與愈傷組織的誘導(dǎo)和不定根的表達(dá)，這與朝鮮薊Cynara scolymus和文冠果Xanthoceras sorrborifolia的扦插試驗(yàn)結(jié)果一致[31-32]，但與王艷晶等[33]得出的研究結(jié)論不同?？梢?jiàn)，POD 和IAAO 對(duì)插穗產(chǎn)生不定根的影響較為復(fù)雜，可能因樹(shù)種或處理方式的不同而產(chǎn)生不同的作用效果，應(yīng)進(jìn)一步研究POD 和IAAO 影響花椒扦插苗根系發(fā)生的作用機(jī)理。