17β-HSD1、NCoR和HER-2在子宮內(nèi)膜息肉組織中的表達(dá)及臨床意義

舒曉芳，沈 娟

(四川省綿陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科,四川綿陽 621000)

子宮內(nèi)膜息肉(EP)是婦科常見的增生性疾病，主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜局灶性增生,突出于子宮腔內(nèi)，形成結(jié)節(jié)狀的良性腫物[1]。隨著內(nèi)鏡、超聲、病理等技術(shù)的發(fā)展，EP的診斷方式不斷增加，診斷準(zhǔn)確率也不斷提高。EP可發(fā)生于女性育齡期及以后的各年齡段，早期癥狀主要為月經(jīng)量增多、經(jīng)期延長、異常子宮出血和接觸性出血等。EP患者常因異常子宮出血而出現(xiàn)貧血等并發(fā)癥，部分患者可能出現(xiàn)不孕，部分絕經(jīng)后患者甚至可能發(fā)展成為子宮內(nèi)膜腫瘤[2-3]。目前尚無有效的方法預(yù)防EP，且治療后容易復(fù)發(fā)，因此，研究EP的發(fā)病機制具有重要的臨床意義。本研究從激素水平及細(xì)胞增殖調(diào)控的角度出發(fā)，探討17β-羥類固醇脫氫酶1(17β-HSD1)、核受體輔阻遏子(NCoR)和表皮生長因子受體2(HER-2)在EP組織中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年6月至2019年6月在本院行EP切除術(shù)治療患者的息肉組織標(biāo)本40例作為觀察組，遠(yuǎn)離息肉的正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本40例作為對照組，另選取同期在本院行宮腔鏡檢查者的正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本40例作為空白組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)自愿參與本研究，并簽署知情同意；(2)年齡在18歲以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在子宮肌瘤、子宮腺肌癥、子宮內(nèi)膜異位癥及子宮惡性腫瘤等其他子宮病變；(2)合并其他系統(tǒng)的惡性腫瘤；(3)近1個月內(nèi)使用過激素類藥物或進(jìn)行過宮腔內(nèi)操作。所有標(biāo)本經(jīng)HE染色后由病理科副高及以上職稱醫(yī)師鏡下觀察后進(jìn)行診斷。觀察組平均年齡(47.27±6.44)歲，空白組平均年齡(46.94±7.29)歲，對照組平均年齡(47.83±8.61)歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2儀器與試劑 兔抗人17β-HSD1單克隆抗體、兔抗人NCoR多克隆抗體、兔抗人HER-2單克隆抗體、DAB顯色試劑盒、免疫組織化學(xué)(SP法)檢測試劑盒、辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素均購自北京中杉生物工程有限公司。

1.3方法 標(biāo)本取材后使用4%多聚甲醛固定，使用不同梯度乙醇脫水處理，二甲苯透明，石蠟包埋；石蠟塊切片，厚度為4 μm；行HE染色，核實組織學(xué)診斷。3%過氧化氫孵育10 min，水洗后使用pH7.4的0.01 mmol/L乙二胺四乙酸熱修復(fù)，室溫水洗，磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡5 min，兔血清封閉。免疫組織化學(xué)檢測采用SP法，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，具體如下：加入PBS微波20 min進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS沖洗2次，每次5 min，加入兔抗人17β-HSD1單克隆抗體、兔抗人NCoR多克隆抗體、兔抗人HER-2單克隆抗體4 ℃過夜，PBS沖洗2次，每次5 min，滴加酶標(biāo)二抗，室溫孵育30 min，PBS沖洗2次，每次5 min，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺顯色后水洗，蘇木精復(fù)染，脫水，樹膠封片觀察。

1.4觀察指標(biāo) 采用雙盲法，由2位病理科醫(yī)師分別閱片。17β-HSD1以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核呈棕黃色為陽性細(xì)胞；NCoR以細(xì)胞核呈棕黃色為陽性細(xì)胞；HER-2以細(xì)胞膜呈棕黃色為陽性細(xì)胞。光鏡下在陽性表達(dá)區(qū)域隨機采集10個高倍鏡視野的圖像，采用Image Pro6.0軟件檢測陽性細(xì)胞平均光密度，用其反映陽性細(xì)胞中17β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)水平。隨機觀察10個高倍鏡視野，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)在25%～50%為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)>50%為強陽性[4]。陽性率=(陽性例數(shù)+強陽性例數(shù))/總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1各組17β-HSD1、NCoR、HER-2表達(dá)水平比較 觀察組17β-HSD1、HER-2表達(dá)水平均高于對照組和空白組，NCoR表達(dá)水平低于對照組和空白組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；對照組17β-HSD1、HER-2表達(dá)水平均高于空白組，NCoR表達(dá)水平低于空白組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組17β-HSD1、NCoR、HER-2表達(dá)水平比較

2.2各組17β-HSD1、NCoR、HER-2陽性率比較 觀察組17β-HSD1、HER-2陽性率均高于對照組和空白組，NCoR陽性率低于對照組和空白組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；對照組17β-HSD1、HER-2陽性率均高于空白組，NCoR陽性率低于空白組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2～4。

表2 各組17β-HSD1陽性率比較

2.3相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，觀察組17β-HSD1表達(dá)水平與HER-2表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.634,P<0.05)，與NCoR表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.447，P<0.05)；HER-2表達(dá)水平與NCoR表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.522，P<0.05)。

表3 各組NCoR陽性率比較

表4 各組HER-2陽性率比較

2.417β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)情況與EP患者臨床特征的關(guān)系 觀察組17β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)與息肉數(shù)量無關(guān)(P>0.05)，而與臨床表現(xiàn)和月經(jīng)情況有關(guān)(P<0.05)。見表5。

表5 17β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)情況與EP患者臨床特征的關(guān)系[n(%)]

2.517β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)情況與EP治療效果的關(guān)系 對觀察組所有患者術(shù)后隨訪6個月，評估臨床治療效果。結(jié)果顯示，治療6個月后，觀察組17β-HSD1、HER-2、NCoR的表達(dá)與復(fù)發(fā)情況及陰道流血情況均有關(guān)(P<0.05)。見表6。

表6 17β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)情況與EP治療效果的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

EP是一種子宮內(nèi)膜良性病變，在臨床十分常見，主要是由于子宮內(nèi)膜過度增生導(dǎo)致，其結(jié)構(gòu)包括腺體和間質(zhì)兩部分。EP好發(fā)于育齡期和絕經(jīng)后女性，以35歲以上女性為主。研究顯示，EP發(fā)病率為7.8%～41.0%，且隨著年齡的增長，發(fā)病率也隨之升高[5]。EP病變多為良性，但存在惡變的可能，甚至可能出現(xiàn)其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移到子宮，從而表現(xiàn)為EP[6]。此外，EP治療后容易復(fù)發(fā)，且其發(fā)病機制尚未完全明確，所以針對其發(fā)病機制進(jìn)行研究，有助于完善臨床治療與預(yù)防方案。研究發(fā)現(xiàn)，EP與不孕癥、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征等疾病的發(fā)生存在一定關(guān)聯(lián)，且其可能也是1種激素依賴性疾病[7]。17β-HSD1與NCoR均與雌激素的代謝密切相關(guān)，而HER-2作為一種原癌基因，在子宮腫瘤中高表達(dá)，因此，本研究以此為切入點，探討了17β-HSD1、NCoR和HER-2在EP組織中的表達(dá)及臨床意義。

17β-HSD1具有較高的雌酮激活活性，是雌二醇(E2)合成路徑上的關(guān)鍵酶，可將雌酮上的酮基轉(zhuǎn)化為醇基，使雌酮激活成為E2，從而發(fā)揮雌激素的生物活性，17β-HSD1基因敲除可直接導(dǎo)致E2水平降低[8-9]。本研究結(jié)果顯示，觀察組17β-HSD1的表達(dá)水平和陽性率均明顯高于對照組與空白組，且對照組17β-HSD1的表達(dá)水平和陽性率也均高于空白組，說明EP患者息肉組織中存在17β-HSD1高表達(dá)，且尚未發(fā)生病變的息肉旁組織就已存在17β-HSD1的高表達(dá)，提示EP的發(fā)生、發(fā)展可能與17β-HSD1高表達(dá)后調(diào)控激素水平相關(guān)。

NCoR是非配體化核受體的結(jié)合蛋白，有組氨酸去乙酰化轉(zhuǎn)移酶活性，其C端含有受體作用區(qū)，可與核受體配體結(jié)合區(qū)上的疏水裂隙作用，從而抑制核受體的轉(zhuǎn)錄[10]。有研究顯示，NCoR可以在黃體酮的催化作用下與孕激素受體結(jié)合，抑制黃體酮靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而介導(dǎo)雌激素調(diào)節(jié)，影響內(nèi)膜組織增生，參與子宮內(nèi)膜癌變的過程[11]。本研究結(jié)果顯示，觀察組NCoR的表達(dá)水平均低于對照組和空白組，提示EP患者息肉組織中NCoR表達(dá)水平下降，與柳先廉等[12]的研究結(jié)果相同。究其原因，可能與NCoR表達(dá)水平降低引起核受體活性增強，從而增強了子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖作用有關(guān)。

HER-2是一種原癌基因，在人體正常組織中微量表達(dá)，而在多種惡性腫瘤，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、宮頸癌等組織中均呈高表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌患者中HER-2的高表達(dá)率可達(dá)50%[13-14]。HER-2在EP組織中主要表達(dá)于腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上，在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)細(xì)胞中均不表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，觀察組HER-2的表達(dá)水平、陽性率均高于對照組和空白組，提示EP組織中HER-2存在高表達(dá)，與吳坤英等[15]的研究結(jié)果一致。

本研究觀察了17β-HSD1、HER-2、NCoR間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)17β-HSD1表達(dá)水平與HER-2表達(dá)水平呈正相關(guān)，與NCoR表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)；HER-2表達(dá)水平與NCoR表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。提示上述3項指標(biāo)的變化趨勢具有一定的相關(guān)性，可能存在一定的相互作用，但具體機制仍有待進(jìn)一步研究。此外，本研究觀察了17β-HSD1、HER-2、NCoR在EP患者息肉組織中的表達(dá)情況與臨床特征間的關(guān)系，結(jié)果顯示，17β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)與息肉數(shù)量無關(guān)，而與臨床表現(xiàn)和月經(jīng)情況有關(guān)?？紤]這與17β-HSD1、NCoR、HER-2控制內(nèi)膜組織的增殖以及調(diào)控激素的生成和釋放具有一定關(guān)系。本研究還觀察了EP患者治療6個月后的療效與息肉組織中17β-HSD1、NCoR、HER-2表達(dá)情況間的關(guān)系，結(jié)果顯示，17β-HSD1、HER-2、NCoR的表達(dá)與患者復(fù)發(fā)情況及陰道流血情況均有關(guān)，說明17β-HSD1、NCoR、HER-2在EP患者息肉組織中的表達(dá)差異對于評估療效具有一定的臨床意義。

4 結(jié) 論

在EP患者的息肉組織中存在17β-HSD1、NCoR、HER-2的異常表達(dá)，且不同臨床表現(xiàn)、月經(jīng)情況及預(yù)后情況患者息肉組織中17β-HSD1、NCoR、HER-2的表達(dá)水平存在差異，3項指標(biāo)在EP患者的預(yù)后及療效評估中均有一定的臨床應(yīng)用價值。