SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體檢測在新型冠狀病毒肺炎中的診斷價值研究

李 泉，劉釘賓△，喬正榮，朱小嵐，彭孝斌，吳小蘭，劉 平，吳 彥，柏 艷，董姍姍

(重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院:1.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科；2.感染科，重慶 401220；3.重慶市長壽區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，重慶 401220；4.重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院呼吸重癥科，重慶 401220)

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是屬于β屬的冠狀病毒，其能夠在人與人之間通過飛沫和直接接觸傳播，在密閉環(huán)境下也可通過氣溶膠傳播[1-2]。SARS-CoV-2感染導(dǎo)致的肺炎為新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)。COVID-19以發(fā)熱、干咳、乏力為主要表現(xiàn)，常伴有氣促和呼吸困難等，在嚴(yán)重病例中，可出現(xiàn)嚴(yán)重急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、多器官功能衰竭，甚至死亡[3-4]。因此，對疑似COVID-19的患者進(jìn)行快速篩查、早期診斷、早期隔離及早期治療具有重要意義。目前，SARS-CoV-2主要采用實(shí)時熒光定量PCR進(jìn)行核酸檢測，實(shí)際工作中由于標(biāo)本類型、采集方式的差異，易導(dǎo)致核酸檢測結(jié)果的陽性率較低；同時，核酸檢測的時間較長，對實(shí)驗(yàn)室生物安全等級要求高，不便于各基層醫(yī)院開展。針對上述情況，本研究對重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院收治的COVID-19確診病例和疑似病例采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測，探討其臨床應(yīng)用價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1-2月就診于重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院的COVID-19患者25例作為COVID-19確診組。COVID-19確診組均符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第六版)》[5]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。選取同期疑似COVID-19患者17例作為COVID-19疑似組，該組患者均有臨床癥狀和流行病學(xué)史，影像學(xué)檢查顯示肺部有磨玻璃影或斑片狀影，血常規(guī)顯示白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常或降低，淋巴細(xì)胞絕對值降低，但核酸檢測結(jié)果為陰性。另選取排除COVID-19的健康者60例作為對照組。

1.2儀器與試劑 深圳亞輝龍生物科技有限公司生產(chǎn)的iFlash 3000-H化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套的SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體檢測試劑盒；美國ABI公司生產(chǎn)的ABI 7500實(shí)時熒光定量PCR儀；廈門愷碩生物科技有限公司生產(chǎn)的自動核酸提取儀；江蘇康健醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)的一次性病毒采樣管。

1.3方法 采用化學(xué)發(fā)光法檢測血漿SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體水平。將抗體檢測試劑盒中配套校準(zhǔn)品在iFlash 3000-H化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上做校準(zhǔn)曲線，然后上機(jī)檢測血漿標(biāo)本。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：IgM<10 AU/mL為陰性，≥10 AU/mL為陽性；IgG<10 AU/mL為陰性，≥10 AU/mL為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel表格對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

COVID-19確診組的25例患者中，有24 例患者IgM和IgG抗體均為陽性，檢測靈敏度為96%(24/25)。在COVID-19疑似組的17例患者中，共檢測出2例IgM和IgG抗體同時陽性患者，其中1例IgM抗體水平為2 529.59 AU/mL，IgG抗體水平為121.71 AU/mL，另1例IgM抗體水平為49.60 AU/mL，IgG抗體水平為128.01 AU/mL；單獨(dú)IgM抗體陽性1例，IgM抗體水平為16.24 AU/mL，連續(xù)2 d復(fù)查結(jié)果分別為16.41 AU/mL和16.29 AU/mL；單獨(dú)IgG抗體陽性1例，IgG抗體水平為11.83 AU/mL。對照組中未檢測出IgM或IgG抗體陽性。見表1。

表1 3組SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測結(jié)果比較(n)

3 討 論

根據(jù)目前研究和流行病學(xué)報道，SARS-CoV-2感染后，首先通過上呼吸道到達(dá)下呼吸道，潛伏期一般為3～7 d，最短為1 d，最長為24 d。SARS-CoV-2感染者分為輕型、普通型、重型和危重型。COVID-19患者機(jī)體不同部位存在的病毒數(shù)量有所不同，目前認(rèn)為這是因?yàn)椴煌课患?xì)胞所含病毒的受體數(shù)量不同。SARS-CoV-2受體在肺泡上皮細(xì)胞中表達(dá)最高，在氣道上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中表達(dá)較低，因此，SARS-CoV-2感染時下呼吸道中的病毒數(shù)量高于上呼吸道，而呼吸道中的病毒數(shù)量又高于血液?；谏鲜鲈?，肺泡灌洗液中最易檢出病毒核酸，其次是深咳痰液，最后是鼻咽部及口咽部。但是因?yàn)榕R床取樣操作和患者接受程度等原因，目前最常用的標(biāo)本是口咽拭子，其次是鼻咽拭子[6]。據(jù)報道，COVID-19患者糞便和尿液中也均可檢測出SARS-CoV-2核酸陽性。SARS-CoV-2感染人體后，其抗原可在 1～5 d產(chǎn)生，IgM抗體可在5～7 d產(chǎn)生,IgG抗體可在10～15 d產(chǎn)生[7]。

本研究COVID-19確診組中1例患者前后共進(jìn)行了14次核酸檢測，多次采集口咽拭子和鼻咽拭子進(jìn)行檢測，但結(jié)果均為陰性，最終在糞便拭子中檢測出陽性結(jié)果；此患者有流行病學(xué)史，血常規(guī)結(jié)果示淋巴細(xì)胞百分比和絕對值均下降，肺部CT提示雙肺呈磨玻璃影改變，此外，其配偶也確診為無癥狀感染者。另1例患者共檢測核酸4次，此患者為家庭聚集性病例，家中共6人確診。雖然SARS-CoV-2核酸可在患者感染后1～5 d的上呼吸道標(biāo)本中檢出，但受感染機(jī)制及采樣部位的影響，仍然存在上呼吸道標(biāo)本核酸檢測結(jié)果陰性，臨床癥狀、流行病史和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查又高度懷疑COVID-19的情況。本研究25例COVID-19確診患者中有24例IgM和IgG抗體均為陽性，與核酸檢測結(jié)果高度符合。值得注意的是，這24例陽性標(biāo)本均采集自患者感染后期，其中1例為IgM和IgG抗體檢測陰性但核酸檢測陽性，其原因可能為該患者處于感染初期，體內(nèi)IgM和IgG抗體尚未產(chǎn)生。而在COVID-19疑似組中，有2例患者IgM和IgG抗體同時陽性，且復(fù)查結(jié)果仍然均為陽性，這2例患者均有流行病學(xué)史，且臨床表現(xiàn)典型，肺部CT提示雙肺磨玻璃影，淋巴細(xì)胞百分比和絕對值均降低，流式細(xì)胞分析顯示自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)減少，臨床高度懷疑為COVID-19，但核酸檢測結(jié)果始終為陰性。1例疑似患者IgM抗體陽性，該患者1個月前發(fā)病，無流行病學(xué)史，僅肺部CT提示雙肺磨玻璃影，淋巴細(xì)胞百分比和絕對值均正常。臨床高度懷疑為COVID-19，但核酸檢測為陰性的可能原因如下：(1)采集口咽拭子或鼻咽拭子時，未采集到含有病毒的細(xì)胞，或感染者的細(xì)胞中病毒未達(dá)到一定數(shù)量；(2)核酸檢測試劑盒本身存在局限性；(3)COVID-19為一種自限性疾病，隨著疾病的進(jìn)展，病毒逐漸被免疫系統(tǒng)清除，導(dǎo)致核酸檢測結(jié)果為陰性。因此，在感染7～10 d后，檢測SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體將是對核酸檢測結(jié)果的補(bǔ)充，特別是對疑似 COVID-19患者的輔助診斷和排除具有重要意義。在疑似COVID-19患者中，如 SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體同時陽性，隔日復(fù)查仍然陽性，且臨床相關(guān)檢查均提示陽性可能(如淋巴細(xì)胞百分比及絕對值逐漸下降，流式細(xì)胞分析顯示NK細(xì)胞減少，肺部CT提示磨玻璃影改變)，則強(qiáng)烈建議進(jìn)行肺泡灌洗液核酸檢測來幫助診斷；在疑似COVID-19患者中，若SARS-CoV-2 IgM抗體陽性，IgG抗體陰性，間隔1周復(fù)查結(jié)果仍同前，可建議患者做肺泡灌洗液核酸檢測進(jìn)一步排查；在疑似COVID-19患者中，若SARS-CoV-2 IgM抗體陰性，IgG抗體陽性，間隔1周復(fù)查顯示IgG抗體水平增加4倍或以上，則可判斷為SARS-CoV-2急性感染或近期感染，如IgM、IgG抗體動態(tài)檢測結(jié)果無明顯變化，且核酸檢測結(jié)果為陰性，則可排除SARS-CoV-2急性感染。本研究中，健康對照組SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體均未檢測到陽性結(jié)果，提示IgM和IgG抗體檢測在健康人群的篩查中具有較高的臨床應(yīng)用價值。

4 結(jié) 論

隨著對SARS-CoV-2研究的不斷深入，檢測技術(shù)和方法不斷成熟，化學(xué)發(fā)光法檢測SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體技術(shù)將會被更多地應(yīng)用到COVID-19的診斷和篩查工作中，彌補(bǔ)核酸檢測的不足。