秦皮甲素納米混懸凝膠劑的制備及體外表征

石金燕，陳立江，宋 柯，褚宇琦，王驚雷，劉 洋

（遼寧大學 藥學院，遼寧 沈陽 110036）

秦皮甲素（Esculin）是一種香豆素衍生物，具有抗炎、抗腫瘤、降低血尿酸等作用[1-2]。文獻[3]表明秦皮甲素脂溶性差，在穿過胃腸道磷脂雙分子層時存在吸收障礙。文獻[4]報道口服秦皮甲素對降低血尿酸無效，給藥劑量大，在體內(nèi)滯留時間短?！吨袊幍洹?015 年版第四部凡例中，對秦皮甲素的溶解度進行試驗的結(jié)果表明：秦皮甲素屬于微溶[5]。本文鑒于秦皮甲素的理化性質(zhì)和口服吸收障礙特點，將秦皮甲素做成納米混懸凝膠劑用于局部皮膚給藥，并進行多因素考察、確定最佳處方，以及進行體外表征。

納米混懸凝膠劑同時具有納米混懸劑和凝膠劑各自的優(yōu)點，不僅可提高藥物的溶解度，易于吸收，并且可用于局部皮膚給藥，解決口服無效的問題[6-8]。近年來，對秦皮甲素的研究還尚有多種可能性。

1 儀器與材料

Mastersizer 3000 激光粒度分析儀（英國馬爾文儀器有限公司），F(xiàn)A25 高剪切分散乳化機（鞏義市予華儀器責任有限公司），Agilent 1200 高效液相色譜儀（安捷倫科技（中國）有限公司），110L 高壓微射流納米分散儀（美國 MFIC公司），KQ5200DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），差示掃描量熱分析儀（Diamond DSC，美國Perkin Elmer公司）。

秦皮甲素原料藥（批號 F1827013，質(zhì)量分數(shù) 98%，aladdin），秦皮甲素對照品（批號：110740-200104，質(zhì)量分數(shù)99.9%，aladdin），大豆卵磷脂（批號F20150015，沈陽天峰生物制藥有限公司），吐溫 80（批號 20190103，國藥集團化學試劑有限公司），十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）（批號 20151207，北京化學試劑公司），泊洛沙姆 188（poloxamer 188，F(xiàn)68）（批號 WPAK524B，西格馬里奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司），聚乙烯吡咯烷酮 K30（polyvinylpyrrolidone K30，PVP-K30）（批號 20121016，北京夢怡美生物科技有限公司），甲醇（批號 20181103026，山東禹王實業(yè)有限公司化工公司，色譜純），乙腈（批號20190409，山東禹王實業(yè)有限公司化工公司，色譜純），磷酸（天津科密歐化學試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 秦皮甲素納米混懸劑的制備

稱取一定量的秦皮甲素溶于 3 mL 甲醇，為有機相（1），另取處方量穩(wěn)定劑邊攪拌邊加入到 50 mL純水中，為水相（2）。（1）均勻滴入（2）中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，得到粗混懸液。高速剪切初步降低粒徑，再通過 1.36 × 108Pa 壓力下微射流高壓均質(zhì) 3 次，即得。

2.2 穩(wěn)定劑的篩選

2.2.1 單一穩(wěn)定劑種類的篩選

篩選 SDS、吐溫 80、大豆卵磷脂等單一穩(wěn)定劑，以 1︰1 的藥輔質(zhì)量比，按照“2.1”項下沉淀法和微射流高壓均質(zhì)法制備秦皮甲素納米混懸劑，結(jié)果見圖 1。以平均粒徑越小、多分散系數(shù)（polydispersity index，PDI）值越小、Zeta 電位絕對值在 20～30 mV 的范圍為穩(wěn)定性評價指標。圖1實驗結(jié)果所示，使用單一穩(wěn)定劑不足以維持秦皮甲素納米混懸劑的穩(wěn)定，因此下一步繼續(xù)篩選復合穩(wěn)定劑。

Fig. 1 Particle sizes, PDI (A) and Zeta potentials (B) of single stabilizer (n = 3)圖 1 單一穩(wěn)定劑的粒徑、PDI（A）和Zeta電位的考察（B）（n = 3）

2.2.2 復合穩(wěn)定劑種類的篩選

根據(jù)單一穩(wěn)定劑種類的篩選結(jié)果，考慮固定大豆卵磷脂，將 F68、PVP-K30、SDS 與其搭配使用。為了確保納米混懸劑系統(tǒng)的穩(wěn)定性，電荷保護劑和立體保護劑同時存在為最佳。結(jié)果顯示：大豆卵磷脂與 F68 聯(lián)合使用為最佳復合穩(wěn)定劑，降低粒徑顯著，穩(wěn)定性最好，見表1。

Table 1 Particle sizes, PDI and Zeta potentials of composite stabilizers (n = 3)表 1 復合穩(wěn)定劑的粒徑、PDI和Zeta電位的考察（n = 3）

2.2.3 助穩(wěn)定劑 PVP-K30 和 SDS 對最佳復合穩(wěn)定劑的影響

分別加入助穩(wěn)定劑 PVP-K30 和 SDS，考察助穩(wěn)定劑對復合穩(wěn)定劑的影響。結(jié)果顯示：助穩(wěn)定劑的加入并未對最佳復合穩(wěn)定劑起到加強穩(wěn)定作用（見表2），需進行其他因素的考察。

Table 2 Effects of stabilizer on optimal composite stabilizers (n = 3)表 2 助穩(wěn)定劑對最佳復合穩(wěn)定劑的影響（n = 3）

2.3 其他影響因素的考察

2.3.1 藥物與大豆卵磷脂質(zhì)量比的考察

在“2.1”項下，藥物 -F68 的質(zhì)量比為 1︰1，取藥物-大豆卵磷脂的質(zhì)量比分別為 1︰1、1︰3和 1︰5，測得過微射流 3 次的數(shù)據(jù)，見表 3。結(jié)果表明：隨著大豆卵磷脂用量的增加，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑逐漸減小，PDI 先增大后減小，Zeta 電位逐漸降低。

Table 3 Effects of the mass ratio of drug and soybean lecithin on esculin nanosuspension (n = 3)表 3 藥物與大豆卵磷脂的質(zhì)量比對秦皮甲素納米混懸劑的影響（n = 3）

2.3.2 藥物與F68質(zhì)量比的考察

在“2.1”項下，藥物-大豆卵磷脂的質(zhì)量比為 1︰1，取藥物-F68 的質(zhì)量比分別為 1︰1、1︰3和 1︰5，測得過微射流 3 次的數(shù)據(jù)，見表4。結(jié)果表明：隨著 F68 用量的增加，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑逐漸增加，PDI 先減小后增大，Zeta 電位逐漸降低。

Table 4 Effects of the mass ratio of drug and F68 on esculin nanosuspension (n = 3)表 4 藥物與 F68 的質(zhì)量比對秦皮甲素納米納米混懸劑的影響（n = 3）

2.3.3 藥物用量的考察

在“2.1”項下，固定穩(wěn)定劑的質(zhì)量比，分別取秦皮甲素 50、100 和 150 mg，測得過微射流 3 次的數(shù)據(jù)，見表 5。結(jié)果表明：隨著藥物用量增加，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑逐漸增加，PDI 先減小后增大，Zeta 電位走偏低趨勢?？梢娝幬餄舛冗^高，加入的輔料不能維持藥物的穩(wěn)定性。

Table 5 Influence of drug dosages on esculin nanosuspension (n = 3)表 5 藥物的用量對秦皮甲素納米納米混懸劑的影響（n = 3）

2.3.4 溫度的考察

在“2.1”項下，藥物與輔料質(zhì)量比為 1︰1，分別考察 0、25、40 ℃ 下，測得過微射流 3 次的數(shù)據(jù)，見表6。結(jié)果表明：隨著藥物用量增加，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑呈增大趨勢，PDI 和 Zeta電位先增大后減小，可見藥物在高溫下，引起團聚，變的不穩(wěn)定。故選擇 25 ℃ 最適。

Table 6 Influence of temperature on esculin nanosuspension (n = 3)表 6 溫度對秦皮甲素納米混懸劑的影響（n = 3）

2.3.5 剪切轉(zhuǎn)速的考察

在“2.1”項下，藥物與輔料質(zhì)量比為 1︰1，25 ℃ 下，分別在 15 000、18 000 和 20 000 rpm轉(zhuǎn)速下進行剪切，測得過微射流 3 次的數(shù)據(jù)，見表7。結(jié)果表明：增加剪切轉(zhuǎn)速，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑在 200 nm 以下，藥物分散較好，在混懸液中以穩(wěn)定狀態(tài)存在。

Table 7 Influence of shear speed on esculin nanosuspension (n = 3)表 7 剪切轉(zhuǎn)速對秦皮甲素納米混懸劑的影響（n = 3）

2.3.6 微射流高壓均質(zhì)次數(shù)的考察

保持其他條件不變，分別高壓均質(zhì) 3、6、9 次，結(jié)果如表8所示。微射流高壓均質(zhì)次數(shù)對秦皮甲素納米混懸劑的粒徑、PDI、Zeta 電位的影響不大。

Table 8 Influence of micro-jet high-pressure homogenization times on esculin nanosuspension (n = 3)表 8 微射流高壓均質(zhì)次數(shù)對秦皮甲素納米混懸劑的影響（n = 3）

2.4 星點設(shè)計

通過多因素考察，確定大豆卵磷脂用量（A）、F68 用量（B）和剪切轉(zhuǎn)速（C）是影響秦皮甲素納米混懸劑處方的主要因素。采用 Design Expert 8.0 軟件設(shè)計星點設(shè)計-效應(yīng)面法，以秦皮甲素原料藥 50 mg、純水 50 mL 設(shè)計實驗，粒徑、PDI 和 Zeta 電位作為評價指標，篩選最優(yōu)處方[9]。見表9、表10和圖2。

Table 9 Factor and level for central composite design表 9 星點設(shè)計因素水平表

Table 10 Experimental actors and results of effect surface表 10 效應(yīng)面實驗因素水平及結(jié)果

Fig. 2 Predicted response surface diagram圖 2 預測效應(yīng)面圖

擬合回歸方程及其復相關(guān)系數(shù)如下：

多元線性回歸方程：

粒徑 = 156.95 - 32.81A+ 30.87B- 3.18C（r2= 0.573 6）

PDI = 0.33 + 0.027A- 0.011B- 0.030C（r2= 0.188 0）

Zeta電位 = -11.49 + 0.79A- 0.81B- 3.92C（r2= 0.255 4）

多元非線性回歸方程：

粒徑 = 172.93 - 40.55A+ 28.13B- 10.92C- 7.55AB+ 37.06AC+ 23.52BC- 9.37A2+ 2.71B2-9.01C2（r2= 0.931 0）

PDI = 0.30 + 0.042A- 0.026B- 0.055C- 7.593E-003AB+ 0.068AC- 0.071BC+ 0.023A2+7.837E-003B2- 0.021C2（r2= 0.949 5）

Zeta電位 = -9.96 + 4.68A- 3.20B- 6.90C- 5.22AB+ 1.17AC+ 5.86BC+ 4.14A2- 1.79B2- 3.15C2（r2= 0.963 3）

經(jīng)過多次重復實驗，非線性回歸擬合方程和多元線性回歸擬合方程的復相關(guān)系數(shù)r2值較低，表明模型擬合效果不好，自變量與因變量之間相關(guān)性較差。刪除幾個極端數(shù)據(jù)后，可以看出多元非線性回歸擬合方程相關(guān)系數(shù)r2值明顯提高，說明此回歸方程的擬合程度良好，可作為預測和優(yōu)化的模型。從模型中可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著大豆卵磷脂用量的增加，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑慢慢減小，逐漸達到平衡，F(xiàn)68 用量的增加使粒徑呈增大趨勢，剪切轉(zhuǎn)速的增大使粒徑先減小后增大；隨著大豆卵磷脂用量的增加，PDI 增加，F(xiàn)68 用量的增加和剪切轉(zhuǎn)速的增大使 PDI 先增加后減小；隨著大豆卵磷脂用量的增加，Zeta 電位隨之呈升高趨勢，F(xiàn)68 用量的增加使 Zeta 電位先提高后降低，加大剪切轉(zhuǎn)速使 Zeta 電位更穩(wěn)定。

Table 11 Verification of star point design-effect surface optimization method (n = 3)表 11 星點設(shè)計-效應(yīng)面優(yōu)化方法的驗證（n = 3）

驗證試驗：依據(jù)多元非線性回歸方程，選取處方推薦最佳用量：大豆卵磷脂為 35 mg、F68 為 30 mg、剪切轉(zhuǎn)速為 20 000 rpm，測得平均粒徑為（171.50 ± 5.22）nm，PDI 為 0.188 ± 0.024，Zeta 電位為（-19.10 ± 0.28）mV，所得結(jié)果穩(wěn)定性好，符合預期。由表11可以看出，本實驗所建立的數(shù)學模型，可用來預測秦皮甲素的結(jié)果評價指標。

2.5 秦皮甲素納米混懸劑的最佳處方

精密稱取 50.01 mg 的秦皮甲素溶于 3 mL 甲醇，為有機相備用（1），精密稱取 30.00 mg F68和 35.01 mg 大豆卵磷脂，溶于 50 mL 純水，為水相備用（2）。（2）攪拌至溶解后，將（1）均勻滴入（2）中，旋蒸 10 min（50 ℃），得到粗混懸液。用高速剪切機以 20 000 rpm 的轉(zhuǎn)速剪切 1 min，再通過 1.36 × 108Pa 壓力下，微射流高壓均質(zhì) 3 次，最終得到秦皮甲素納米混懸劑。

2.6 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的制備

精密稱取 0.25 g 卡波姆 940，加入 5 mL 水溶脹 24 h、依次加入秦皮甲素納米混懸劑 6 mL、丙二醇 2.0 g，充分攪拌混勻后，邊攪拌邊滴加新鮮配制的體積分數(shù)為 20% 的三乙醇胺，調(diào) pH 值至5.0～6.5，加純水至 20 g，即得，見圖3。

Fig. 3 Preparation road map of esculin nanosuspension gel圖 3 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的制備路線圖

3 體外表征

3.1 外觀

秦皮甲素納米混懸劑出現(xiàn)淡藍色乳光現(xiàn)象，秦皮甲素納米混懸凝膠劑涂布性好、稠度適中、細膩、手感好，見圖4。

Fig. 4 Esculin nanosuspension (A) and esculin nanosuspension gel (B)圖 4 秦皮甲素納米混懸劑（A）和秦皮甲素納米混懸凝膠劑（B）

3.2 秦皮甲素納米混懸劑的粒徑、PDI、Zeta 電位分布圖

制備的秦皮甲素納米混懸劑的粒徑在 200 nm 以下，分散性好，穩(wěn)定性高，見圖5。

Fig. 5 Particle size, PDI (A) and Zeta potential of of esculin nanosuspension (B)圖 5 粒徑、PDI（A）和Zeta電位分布圖（B）

3.3 透射電子顯微鏡（Transmission electron microscope, TEM）的考察

將秦皮甲素納米混懸劑適當稀釋，吸取 10μL 滴到粒度為 74μm 的銅網(wǎng)上，自然風干，再滴加 10μL 體積分數(shù)為 1% 的磷鎢酸（pH 6.4～7.0），靜置風干，采用 TEM 觀察其形態(tài)。結(jié)果如圖6所示，秦皮甲素納米混懸劑呈橢圓形分布，粒徑都在 200 nm 以下，與馬爾文激光粒度儀測定結(jié)果大體一致。

Fig. 6 TEM of esculin nanosuspension圖 6 秦皮甲素納米混懸劑的透射電鏡圖

3.4 掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope, SEM）的考察

將秦皮甲素納米混懸凝膠劑適當稀釋，滴于錫箔紙上，放置于烘箱內(nèi)，烘干，制備秦皮甲素納米混懸凝膠劑的 SEM 樣品，采用 SEM 觀察其形態(tài)。結(jié)果如圖7所示，藥物被包裹于凝膠基質(zhì)中，表面光滑且分布均勻。

Fig. 7 SEM of esculin nanosuspension gel圖 7 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的掃描電鏡圖

3.5 差示掃描量熱測定（differential scanning calorimetry, DSC）

分別取 4 mg 秦皮甲素原料藥、輔料和秦皮甲素納米混懸劑凍干粉放入坩堝，在 20～250 ℃ 區(qū)間，通過氮氣保護，每分鐘 10 ℃ 升溫，圖8為 DSC 圖譜。由圖8對比可見，測得的秦皮甲素納米混懸劑衍射圖中，除了 F68 的峰位，未見藥物熔點峰，表明藥物可能呈無定型狀態(tài)。因此，通過X 射線衍射進一步驗證藥物晶型是否發(fā)生改變。

Fig. 8 DSC curves of esculin, soybean lecithin, F68 and esculin nanosuspension圖 8 秦皮甲素原料藥、大豆卵磷脂、F68、秦皮甲素納米混懸劑的DSC圖

3.6 X射線衍射分析（X-ray diffraction, XRD）

采用 X 射線衍射分析檢測藥物的結(jié)晶度，將研磨好的秦皮甲素原料藥、F68 和秦皮甲素納米混懸劑凍干粉用 XRD-6000 衍射儀檢測，見圖 9。結(jié)果顯示：秦皮甲素原料藥在 2θ為 10°～30°之間有晶體衍射峰，而 F68 和秦皮甲素納米混懸劑的 XRD 圖譜顯示，秦皮甲素納米混懸劑特征衍射峰消失，說明藥物呈無定型狀態(tài)。與 DSC 結(jié)果一致，解釋了藥物晶型發(fā)生改變的結(jié)論。

Fig. 9 XRD patterns of esculin, F68 and esculin nanosuspension圖 9 秦皮甲素原料藥、F68、秦皮甲素納米混懸劑的XRD圖

3.7 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的粒徑、PDI、Zeta電位測定

取 0.5 g 秦皮甲素納米混懸凝膠劑，加 10 mL 的蒸溜水，超聲破壞凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，用馬爾文激光粒度儀檢測，測得秦皮甲素納米混懸凝膠劑的粒徑為（169.90 ± 3.41）nm、PDI 為 0.180 ± 0.037、Zeta 電位為（-27.80 ± 0.21）mV。結(jié)果顯示：做成凝膠后藥物被包裹，穩(wěn)定性更高。

3.8 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的穩(wěn)定性考察

將制備的秦皮甲素納米混懸凝膠劑，連續(xù)放置于 4 ℃ 的條件下 10 天，以秦皮甲素納米混懸凝膠劑的粒徑和 PDI 為考察指標，進行秦皮甲素納米混懸凝膠劑的穩(wěn)定性研究，見圖 10。結(jié)果顯示：秦皮甲素納米混懸凝膠劑的粒徑（黑色線）以及 PDI（藍色線）均沒有發(fā)生顯著性改變，溶液也未見沉淀渾濁現(xiàn)象。說明藥物制成納米混懸劑雖呈無定型，但分散在凝膠基質(zhì)中，可在此時間內(nèi)穩(wěn)定存放。

Fig. 10 The storage stability of esculin nanosuspension gel圖 10 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的穩(wěn)定性考察

3.9 秦皮甲素納米混懸凝膠劑含量測定

3.9.1 液相檢測波長的確定

以甲醇為空白對照，于 200～800 nm 波長下掃描。秦皮甲素在 334 nm 處有吸收，輔料在此處均無吸收。因此，選取秦皮甲素的檢測波長為 334 nm。

3.9.2 高效液相（HPLC）分析方法的建立

色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱（4.6 mm × 250 mm，5μm）（柱號 E2313718）；流動相：乙腈-0.09%（體積分數(shù)）磷酸水溶液（8︰92，體積比）；流速：1.0 mL?min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：334 nm；進樣量：10μL。

3.9.3 對照品溶液的配制

精密稱取秦皮甲素對照品 10.00 mg，置于 50 mL 量瓶中，用甲醇定容、搖勻，即得。

3.9.4 供試液的制備

按照“2.6”項下制備的秦皮甲素納米混懸凝膠劑，加適量甲醇超聲破碎，于 8 000 r?min-1離心，取上清液過 0.45μm 微孔濾膜，作為供試液，使用空白凝膠制備空白對照溶液。

3.9.5 標準曲線的制備

精密量取不同體積的秦皮甲素對照品溶液，用甲醇稀釋得質(zhì)量濃度分別為 20、30、40、50、60和 70 mg?L-1的系列溶液，按“3.9.2”中的色譜條件下，測定藥物峰面積。

做出標準曲線Y= 2.073 4×104X– 2.333 1×104（r= 0.999 0），在 20～70 mg?L-1的范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系。

3.9.6 精密度實驗

在同一日內(nèi)，配制高、中、低 3 個濃度秦皮甲素對照品溶液，采用 HPLC 進行分析，計算日內(nèi)精密度，RSD 分別為 1.30%、0.35% 和 0.90%。連續(xù) 3 日內(nèi)，將高、中、低 3 個濃度的秦皮甲素對照品溶液分別于同一時刻進樣，計算日間精密度，RSD 分別為 1.25%、0.47%、1.68%。RSD均小于 2%，表示儀器精密度良好。

3.9.7 專屬性考察

取秦皮甲素對照品溶液、供試品溶液、空白對照溶液，按“3.9.2”項進行 HPLC 分析，記錄色譜圖?？瞻讓φ杖芤涸谒幬锍龇逦恢貌⑽闯霈F(xiàn)色譜峰，故認為無雜質(zhì)干擾，色譜圖見圖11。

3.9.8 重復性實驗

對同一批秦皮甲素，制備 6 份秦皮甲素納米混懸凝膠劑供試液，按“3.9.2”中的色譜條件下測定藥物峰面積，計算 RSD = 0.78%。RSD < 2%，表明實驗重復性良好。

3.9.9 回收率考察

精密稱取秦皮甲素適量，加入處方比例的聚合物，配制高、中、低 3 個濃度的供溶液，按“3.9.2”項進行 HPLC 分析，見表 12。秦皮甲素的回收率在 98%～102% 之間，且 RSD 值均小于 2%，符合方法學要求，表明此分析方法可行。

Table 12 Recovery of esculin表 12 秦皮甲素的回收率結(jié)果

3.10 秦皮甲素納米混懸凝膠劑的體外釋放度考察

透析法是目前進行體外釋放度測定的常用方法，本實驗以 40 mL 磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）為釋放介質(zhì)，稱取約 0.5 g 秦皮甲素納米混懸凝膠劑注入預處理過的透析袋中，置于（37 ± 0.5）℃的恒溫振蕩器中，分別在 0、5、10、30、50、90、120、140 和 180 min 取 1 mL 釋放介質(zhì)，同時補充1 mL 空白釋放介質(zhì)，于 8 000 r?min-1離心，取上清液過 0.45μm 微孔濾膜，測含量并計算釋放百分率。稱取與秦皮甲素納米混懸凝膠劑中相應(yīng)含量的秦皮甲素原料藥、F68 和大豆卵磷脂，進行物理混合，得到的物理混合物同法進行試驗，作出釋放曲線，見圖12。由圖12可知：秦皮甲素納米混懸凝膠劑在 50 min 時，藥物體外累積釋放度已達到 84.52%，而物理混合物僅 49.61%。可見做成秦皮甲素納米混懸凝膠劑，能顯著提高秦皮甲素的累積釋放量。

Fig. 12 In vitro release curve of esculin nanosuspension gel and physical mixture (n = 3)圖 12 秦皮甲素納米混懸凝膠劑、物理混合物的體外釋放曲線（n = 3)

4 討論

當 PDI 在 0.1～0.3 之間時，可認為粒徑分布較好，Zeta 電位的絕對值大約在 20～30 mV 之間，可認為具有較好的穩(wěn)定性。由此可見，制備的秦皮甲素納米混懸劑和秦皮甲素納米混懸凝膠劑具有良好的穩(wěn)定性。除藥輔質(zhì)量比、溫度和剪切轉(zhuǎn)速以外，高壓均質(zhì)次數(shù)并未對粒徑、PDI 和 Zeta電位產(chǎn)生顯著的影響。由 2.3.4 可知，晶核的生成是放熱過程，較高的溫度會降低成核速度，導致粒徑增大，還會促進奧氏熟化現(xiàn)象。低溫和常溫有利于反應(yīng)，為了操作方便，因此，選擇常溫進行。由 2.3.1 和 2.3.2 可知，隨著大豆卵磷脂和 F68 用量的增加，秦皮甲素納米混懸劑的粒徑分別減小和增大，由此可以看出穩(wěn)定劑的用量是本實驗考察的因素，用量過大不僅會覆蓋藥物，導致粒徑變大，還會產(chǎn)生毒性。所以，要篩選最佳穩(wěn)定劑的用量。由 2.3.5 可知，合適的剪切轉(zhuǎn)速很重要，剪切轉(zhuǎn)速過大，容易引起藥物在溶劑中團聚；剪切轉(zhuǎn)速過小，降低粒徑力度不夠，分布不均勻。

秦皮甲素納米混懸凝膠劑體外累積釋放率優(yōu)于物理混合物。一是采用沉淀法和微射流高壓均質(zhì)法將藥物粒徑降至納米級別，使得藥物表面積增大；二是在秦皮甲素納米混懸凝膠劑中，秦皮甲素為無定型納米粒，藥物的結(jié)晶度越低，其飽和溶解度越大。與純藥物相比，秦皮甲素納米藥物的非晶態(tài)性質(zhì)和顆粒尺寸的減小，使其釋藥率顯著提高。能夠解決秦皮甲素的溶解度小、溶出速率慢、給藥劑量大等問題。而且，納米混懸劑均勻分散在凝膠的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中，不但能增加生物兼容性、提高藥物的親脂性、減少其聚集而增加穩(wěn)定性、防止藥物突釋、還能夠增加藥物在皮膚表面的保留時間，有利于藥物的經(jīng)皮滲透。

此實驗將秦皮甲素制成納米混懸凝膠劑用于外用經(jīng)皮給藥，可減少胃腸道不良反應(yīng)，避免首關(guān)消除等。其中采用常用的凝膠基質(zhì)卡波姆 940，能夠濕潤皮膚，增強藥物的透皮吸收。大豆卵磷脂是一種生物相容性高的離子表面活性劑，它是構(gòu)成生物膜的主要成分，它與新劑型結(jié)合，制成的秦皮甲素納米混懸劑，可以改善原藥的溶解度和生物膜滲透性[10-11]。在此研究中，可以看出做成納米級凝膠劑，不但可以提高藥物的溶解度，而且增加了藥物累積釋放量[12-13]，為秦皮甲素的研究提供了一種新的可能性。本實驗利用星點設(shè)計-效應(yīng)面優(yōu)化法，通過較少的實驗次數(shù)，可對未考察因素的水平有一定的預測。因此，類似方法可應(yīng)用于其他微溶性香豆素類化合物[14]。