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    IncI1和IncN質(zhì)粒陽性沙門氏菌耐藥及質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移特征

    2020-09-17 02:58:58盛煥精李怡讕王澤維牛沁雅孟令緣曹晨陽廉魯昕楊保偉
    食品科學(xué) 2020年18期
    關(guān)鍵詞:供體沙門氏菌耐藥性

    盛煥精,李怡讕,王澤維,牛沁雅,孟令緣,曹晨陽,李 偉,廉魯昕,楊保偉

    (西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,陜西 楊凌 712100)

    沙門氏菌(Salmonella)是一種無芽孢、無莢膜的腸桿菌科革蘭氏陰性直桿菌,廣泛存在于人和動(dòng)物腸道中,是全球范圍導(dǎo)致食源性疾病爆發(fā)的重要病原菌之一[1-3]。在美國等發(fā)達(dá)國家,沙門氏菌感染的年發(fā)病率高達(dá)15.4%[4],由沙門氏菌引起的疾病爆發(fā)和住院治療均高于其他食源性細(xì)菌[5]。在中國,每年約3億人次因感染沙門氏菌而患病,達(dá)病原菌食源性疾病總數(shù)的70%~80%,給食品安全和消費(fèi)者健康帶來嚴(yán)重危害[6-7]。

    質(zhì)粒是獨(dú)立于染色體外、可自主復(fù)制、通常攜帶多種抗性和毒力基因的閉合環(huán)狀雙鏈DNA,質(zhì)粒的存在可使宿主菌產(chǎn)生耐藥性和致病性等附加特性[8]。其中,接合質(zhì)粒是一種與耐藥基因水平傳遞和細(xì)菌耐藥性獲得的重要可移動(dòng)元件[9]。在眾多質(zhì)粒中,IncI1型質(zhì)粒有助于blaCTX-M-1基因在禽類和人之間散播[10],IncN型質(zhì)粒已被歐洲多個(gè)國家的研究者報(bào)道攜帶blaCTX-M-1基因[11-12]。此外,研究還發(fā)現(xiàn)IncI1質(zhì)粒有時(shí)還可與IncN質(zhì)粒共同參與blaCTX-M-1耐藥基因的轉(zhuǎn)移,無論是IncI1還是IncN質(zhì)粒,在分離自禽類糞便的大腸桿菌、分離自零售肉類和動(dòng)物性產(chǎn)品的沙門氏菌中均有檢出[13-14],且該2 種不相容型質(zhì)粒往往被證明與某種特定耐藥基因的傳播密切相關(guān)。然而,我國關(guān)于此方面的研究還相對(duì)較少。

    本研究以分離于我國部分省市的食源、人源和動(dòng)物源沙門氏菌為材料,篩選攜帶IncI1和IncN質(zhì)粒的菌株,闡明IncI1和IncN質(zhì)粒在沙門氏菌中的流行狀況,質(zhì)粒陽性菌株的藥敏性、與(氟)喹諾酮抗生素耐藥相關(guān)基因和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended spectrumβ-lactamases,ESBLs)編碼基因的檢出情況以及該2 種質(zhì)粒通過水平轉(zhuǎn)移傳播耐藥基因和耐藥性的水平,以期為保障微生物食品安全問題提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 菌株

    表1 菌株信息Table 1 Information about the isolates used in this study

    所用菌株為實(shí)驗(yàn)室保存的分離于北京、上海、福建、河南、四川、廣東、廣西、陜西和新疆等地各類零售食品、臨床病人和食品性動(dòng)物的沙門氏菌(n=956)以及香港理工大學(xué)惠贈(zèng)的攜帶IncI1(n=12)和IncN(n=2)的人源性沙門氏菌[15-18](表1)。藥敏性測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株Escherichia coliATCC 25922和Enterococcus faecalisATCC 29212為中國藥品生物制品檢定研究院惠贈(zèng)。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    Luria-Bertani(LB)瓊脂、LB肉湯、Mueller Hinton瓊脂、麥康凱瓊脂 北京陸橋技術(shù)股份責(zé)任公司;XLT4培養(yǎng)基及其補(bǔ)充液 美國BD公司。

    1.1.3 抗生素

    藥敏性測(cè)定用抗生素:萘啶酮酸(nalidixic acid,NAL)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin,CIP)、阿米卡星(amikacin,AMK)、硫酸慶大霉素(gentamicin,GEN)、鏈霉素(streptomycin,STR)、卡那霉素(kanamycin,KAN)、頭孢曲松(ceftriaxone,CRO)、頭孢西?。╟efoxitin,F(xiàn)OX)、頭孢噻呋(ceftiofur,TIO)、頭孢哌酮(cefoperazone,PER)、氨芐西林(ampicillin,AMP)、阿莫西林/克拉維酸(amoxicillin-clavulanic acid,AMC)、氯霉素(chloramphenicol,CHL)、四環(huán)素(tetracycline,TET)、復(fù)方新諾明(trimethoprim/sulfamethoxazole,SXT)和多黏菌素B(polymyxin B,PB)(均為分析純) 美國Sigma公司。

    1.1.4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)引物

    ESBLs編碼基因(blaTEM、blaCTX-M、blaOXA、blaACC和blaPSE)和質(zhì)粒介導(dǎo)的(氟)喹諾酮耐藥相關(guān)基因(qnrA、qnrB、qnrS、acc(6’)-Ib和qepA)擴(kuò)增引物,IncN和IncI1不相容群質(zhì)粒PCR復(fù)制子分型用引物均由北京奧科鼎盛生物科技有限公司合成(表2)。

    表2 PCR引物序列和產(chǎn)物大小Table 2 Primers sequences used for PCR amplification and size of corresponding PCR products

    1.1.5 試劑

    1 mol/L Tris-HCl(pH 8.0)、0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)、5×TBE緩沖液、瓊脂糖凝膠、dNTP、PCR buffer、MgCl2、rTaqTMDNA Polymerase、DL2000 DNA Marker 寶生物工程(大連)有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Mycycler PCR儀、DNA電泳和凝膠成像系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司;Milli-Q純水儀 法國Millpore公司;磁力加熱攪拌器 美國Fisher公司;微波爐 廣州美的微波爐制造有限公司;-40 ℃低溫冰箱、-80 ℃低溫冰箱日本Sanyo公司;百分之一天平、萬分之一天平 德國賽多利斯公司;立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安高壓儀器設(shè)備有限公司;隔水式恒溫培養(yǎng)箱 北京科偉實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;移液器、高速離心機(jī) 德國Eppendorf公司;生物安全柜 美國Labgard公司;超凈工作臺(tái)蘇州凈化設(shè)備有限公司;濁度儀 美國DADE Behring公司;數(shù)顯恒溫水浴鍋 北京科偉試驗(yàn)儀器有限公司;恒溫?fù)u床 上海智誠分析儀器制造有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 IncI1和IncN質(zhì)粒分型

    基于PCR復(fù)制子分型方法對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行不相容群分析[19],用單一PCR法篩選攜帶IncI1和IncN不相容群質(zhì)粒的菌株。采用煮沸法制備DNA模板[20]。PCR條件:94 ℃預(yù)變性10 min;94 ℃變性1 min,相應(yīng)退火溫度條件下1 min、72 ℃延伸1 min,35 個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。退火溫度由相應(yīng)基因的引物序列決定。2 μL PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳和溴化乙錠染色后于凝膠成像系統(tǒng)下檢測(cè)。在低溫條件下將PCR粗產(chǎn)物送至上海桑尼生物科技有限公司測(cè)序,采用在線比對(duì)軟件BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)進(jìn)行比對(duì),確定質(zhì)粒類型。

    1.3.2 藥敏性測(cè)定

    采用美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institution,CLSI)[21]推薦使用的瓊脂稀釋法,測(cè)定供試抗生素對(duì)沙門氏菌的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentrations,MIC),參考CLSI的標(biāo)準(zhǔn)解讀藥敏性測(cè)定結(jié)果。

    1.3.3 耐藥基因檢測(cè)

    采用普通PCR檢測(cè)相關(guān)耐藥基因,引物如表2所示,PCR模板(菌株總DNA)、擴(kuò)增體系和具體條件如1.3.1節(jié)所示。

    1.3.4 質(zhì)粒膜接合實(shí)驗(yàn)

    表3 接合用菌株信息Table 3 Information about the isolates used for conjugation

    基于IncI1和IncN質(zhì)粒陽性菌株及受體菌藥敏性結(jié)果,選擇分別攜帶IncI1質(zhì)粒和IncN質(zhì)粒的沙門氏菌作為供體菌,不含該2 種質(zhì)粒的大腸桿菌和沙門氏菌為受體菌,采用膜過濾法進(jìn)行接合,接合用菌株相關(guān)信息如表3所示。接合方法如下:取OD600nm為0.6的供體菌和受體菌菌液各1 mL于5 mL LB肉湯中混勻,轉(zhuǎn)入孔徑0.22 μm的濾器過濾,過濾后將濾膜緊貼于不含抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基表面,有菌的一面向上,37 ℃過夜培養(yǎng)。用5 mL LB肉湯清洗過夜培養(yǎng)的濾膜,梯度稀釋后分別涂布于同時(shí)含有CRO(32 μg/mL)和CIP(16 μg/mL)或同時(shí)含有STR(64 μg/mL)和CIP(16 μg/mL)的LB平板上,雙抗平板的選擇根據(jù)供體菌和受體菌的耐藥表型確定,每個(gè)梯度3 個(gè)平行,37 ℃培養(yǎng)48 h,計(jì)數(shù)。將OD600nm為0.6的受體菌梯度稀釋后均勻涂布于不含抗生素的LB平板,每個(gè)梯度3 個(gè)平行,37 ℃培養(yǎng)過夜,計(jì)數(shù),用于菌液起始濃度的確定。同時(shí),將供體菌和受體菌分別涂布于相應(yīng)的雙抗平板上,每株菌3 個(gè)平行,37 ℃培養(yǎng)48 h,作為對(duì)照。培養(yǎng)結(jié)束后,確定供體菌和受體菌不能在相應(yīng)的雙抗平板上生長時(shí),再在涂布有不同稀釋度接合子的雙抗平板上隨機(jī)挑選10 個(gè)單菌落,以表2中的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物采用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳和測(cè)序分析,確定IncI1和IncN質(zhì)粒在接合過程發(fā)生了水平轉(zhuǎn)移。接合子攜帶的耐藥基因和藥敏性檢測(cè)方法同1.3.1節(jié)和1.3.2節(jié)。接合頻率計(jì)算公式如下:

    式中:T為陽性接合子平均菌落數(shù);R為受體菌平均菌落數(shù)。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    利用Minitab?18.1對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,用χ2檢驗(yàn)比較不同條件下的檢出率,P<0.05,差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 IncI1和IncN質(zhì)粒分型

    表4 IncN和IncI1質(zhì)粒陽性菌株篩選結(jié)果Table 4 Screening results of IncN and IncI1 plasmid positive isolates

    956 株沙門氏菌中,IncI1質(zhì)粒陽性菌的檢出率(n=42,4.39%)顯著(P<0.05)高于IncN質(zhì)粒陽性菌的檢出率(n=3,0.31%)。人源性沙門氏菌中共檢出27 株(27/404,6.68%)IncI1陽性菌,顯著(P<0.05)高于食源性沙門氏菌中IncI1(15/552,2.72%)陽性菌檢出率。陜西食源沙門氏菌中IncI1質(zhì)粒陽性菌的檢出率顯著(P<0.05)高于其他省市(表4)。

    2.2 藥敏性和耐藥基因檢測(cè)結(jié)果

    基于不同采樣時(shí)間,采樣省份或同一省份不同采樣地點(diǎn),分離沙門氏菌的食品類型,病人的年齡、性別、患病類型和醫(yī)院名稱,前期通過脈沖場凝膠電泳結(jié)合XbaI限制性內(nèi)切酶對(duì)IncI1和IncN質(zhì)粒陽性菌株分型的DNA帶譜類型結(jié)果,盡量選取來源和基因型不同的菌株作為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的材料。本研究從45 株IncI1和IncN陽性沙門氏菌中挑選出26 株代表性菌株(包括香港理工大學(xué)惠贈(zèng)的2 株IncN質(zhì)粒陽性沙門氏菌)用于藥敏性和耐藥基因檢測(cè)。菌株對(duì)TIO(100.0%)耐藥率最高,其次為對(duì)NAL(92.3%)、AMP(92.3%)、CFP(88.5%)、TET(84.6%)、CRO(80.8%)、SXT(76.9%)、STR(76.9%)和CHL(61.5%);對(duì)KAN(26.9%)、GEN(23.1%)、PB(23.1%)、CIP(19.2%)、AMC(15.4%)、FOX(11.5%)和AMK(3.8%)耐藥率較低(表4)。除TET(85.7%)外,攜帶IncI1型質(zhì)粒的菌株對(duì)TIO(100.0%)、NAL(100.0%)、AMP(100.0%)、CFP(95.2%)和CRO(95.2%)的耐藥率顯著(P<0.05)高于對(duì)其他10 種抗生素的耐藥率。IncI1質(zhì)粒陽性菌株比IncN質(zhì)粒陽性菌株的耐藥譜更寬,IncN型質(zhì)粒陽性菌株均對(duì)PB、AMC、FOX和AMK敏感,對(duì)部分氨基糖苷類藥物,如STR和GEN的耐藥率較IncI1型質(zhì)粒陽性菌株高(表5)。

    表5 藥敏性檢測(cè)結(jié)果Table 5 Results of antimicrobial susceptibility test

    26 株IncI1和IncN陽性菌對(duì)5 種常見的質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮抗性相關(guān)耐藥基因和5 種ESBLs編碼基因的攜帶狀況檢測(cè)結(jié)果如表6所示。未在IncN和IncI1質(zhì)粒陽性菌株中檢出qepA和blaACC,未在IncI1陽性菌中未檢出qnrA和qnrB,未在IncN陽性菌株中檢出blaCTX-M和blaPSE。IncI1質(zhì)粒陽性菌株中,blaTEM和blaCTX-M基因的檢出率均顯著(P<0.05)高于其他基因。

    表6 IncI1和IncN質(zhì)粒陽性沙門氏菌耐藥基因檢出情況Table 6 Prevalence of antibiotic resistance genes in IncI1 and IncN plasmids positive Salmonella

    2.3 接合實(shí)驗(yàn)

    4 株IncI1型質(zhì)粒陽性和2 株IncN型質(zhì)粒陽性供體菌與受體菌T9-81(Salmonella typhimurium)發(fā)生接合的接合頻率在3.2×10-5~2.0×10—3之間,與大腸桿菌1-15的接合頻率在8.7×10—7~9.6×10—5之間(表7)。接合過程中,IncI1質(zhì)粒與IncN質(zhì)粒均能從供體菌轉(zhuǎn)移到受體,相對(duì)而言,IncI1質(zhì)粒更容易通過接合作用轉(zhuǎn)移。

    通過PCR對(duì)供體、受體和接合子攜帶的耐藥基因檢測(cè)結(jié)果表明,除blaTEM基因在供體菌I14對(duì)應(yīng)的2 種接合子I14-S1和I24-S3中未檢出外,質(zhì)粒攜帶的ESBLs編碼基因(blaTEM和blaCTX-M)和(氟)喹諾酮耐藥相關(guān)基因(qnrB和acc(6’)-Ib)在接合過程中均可從供體菌轉(zhuǎn)移至受體菌。接合后部分接合子獲得了供體菌質(zhì)粒DNA編碼的相應(yīng)抗性表型,如KAN、STR、GEN、CRO等。部分受體菌株接受IncI1和IncN質(zhì)粒后對(duì)特定抗生素的耐藥表型與供體菌趨于一致。2 種不同類型的質(zhì)粒發(fā)生轉(zhuǎn)移后,對(duì)應(yīng)的接合子對(duì)SXT和TET的耐受性變化趨勢(shì)有所不同,表現(xiàn)出質(zhì)粒的差異。從2大類接合子的藥敏性變化趨勢(shì)看,接合子對(duì)抗生素的耐受性變化與受體菌種屬差異關(guān)系不大,受體菌種屬的差異僅對(duì)接合頻率有所影響。

    表7 供體菌、受體菌和接合子的藥敏性及耐藥基因檢測(cè)結(jié)果Table 7 Antimicrobial susceptibility profiles and antibiotic resistance genes of donors, recipients and transconjugants

    3 討論與結(jié)論

    耐藥沙門氏菌的廣泛存在已經(jīng)成為世界性公共衛(wèi)生問題[22]。質(zhì)粒介導(dǎo)的細(xì)菌耐藥性不僅可以由親代垂直傳遞給子代,而且可以在不同微生物間水平傳播,成為養(yǎng)殖業(yè)、食品安全和人類健康的重大安全隱患[23-24]。基于PCR的復(fù)制子分型方法是研究質(zhì)粒的不相容群和質(zhì)粒傳播耐藥性的重要手段,目前,該方法已廣泛應(yīng)用于在人源、食源和動(dòng)物源致病性細(xì)菌間傳播耐藥性的質(zhì)粒分類研究[25-26]。

    國內(nèi)外關(guān)于質(zhì)粒不相容群、質(zhì)粒不相容群和耐藥基因之間的關(guān)聯(lián)性研究越來越多。表明IncI1和IncN質(zhì)粒在分離自禽類糞便的大腸桿菌、零售肉類和動(dòng)物產(chǎn)品的沙門氏菌中十分普遍[13-14],在中國流行的腸炎沙門氏菌具有頭孢菌素抗性主要是由于其攜帶多種blaCTX-M基因的IncI1質(zhì)粒傳播[27]。IncN質(zhì)粒在腸桿菌科細(xì)菌中也普遍存在,并被報(bào)道攜帶多種抗性決定簇,包括ESBLs和碳青霉烯酶等[28-29]。此外,攜帶不同種類耐藥基因的可接合性IncN質(zhì)粒也在源于世界范圍內(nèi)患者和環(huán)境樣品的不同細(xì)菌中被廣泛報(bào)道[30-32]。然而,該2 種不相容質(zhì)粒大多集中在大腸桿菌和肺炎克雷伯菌中,關(guān)于沙門氏菌中IncN和IncI1質(zhì)粒的流行狀況及其介導(dǎo)的耐藥性研究較少。

    本研究對(duì)源自我國多個(gè)省市的人源性和食源性沙門氏菌進(jìn)行IncI1和IncN不相容質(zhì)粒陽性菌的篩查,但2 種質(zhì)粒陽性菌的檢出率均低于現(xiàn)有報(bào)道的結(jié)果[19,31-32]。導(dǎo)致結(jié)果差異的原因一方面可能由于現(xiàn)有報(bào)道的供試菌株基本分離于零售食品和病死的食品性動(dòng)物,另一方面,研究中供試篩選菌株的數(shù)量也會(huì)導(dǎo)致檢出率的差異。共篩查了956 株沙門氏菌,而現(xiàn)有研究的菌株數(shù)均較少。本研究還發(fā)現(xiàn)IncI1質(zhì)粒在人源性沙門氏菌中的檢出率(6.68%)顯著(P<0.05)高于食源性沙門氏菌(2.72%),陜西食源沙門氏菌中IncI1質(zhì)粒陽性菌的檢出率顯著(P<0.05)高于其他省市,這可能是由于其他省市菌株數(shù)量太少所導(dǎo)致。與此類似,其他研究在沙門氏菌和大腸桿菌中檢出IncN陽性菌株的比例為18.2%~25.6%,IncI1陽性菌株的比例為7.7%~31.8%[19,33-34]。盡管IncN和IncI1質(zhì)粒陽性菌株的檢出率均不高,但由于該2 種質(zhì)粒都是可接合性質(zhì)粒,能通過細(xì)菌之間的接合作用介導(dǎo)耐藥性在不同環(huán)境中傳播[10-12],導(dǎo)致細(xì)菌耐藥譜不斷增寬,耐藥性增強(qiáng),因此需要引起相關(guān)部門足夠的重視。

    質(zhì)粒通常攜帶多種抗性基因和毒力基因,賦予宿主耐藥性和致病性等多種附加特性[8]。IncI1質(zhì)粒攜帶β-內(nèi)酰胺和IV型菌毛編碼基因,可賦予菌株免受抗生素和毒力入侵的能力,比普通菌株具有更強(qiáng)的致病性。來自于人源和動(dòng)物源的細(xì)菌已在英國、巴基斯坦和洪都拉斯等國家被多次報(bào)道攜帶含有blaCTX-M-15基因的IncI1質(zhì)粒[35-36]。本研究在人源和食品源IncI1質(zhì)粒陽性菌株中主要檢出了blaTEM、blaCTX-M、acc(6’)-Ib、blaOXA和blaPSE基因。有研究表明,ESBLs常見型別編碼基因通常由質(zhì)粒介導(dǎo),可在同種或不同種屬的革蘭氏陰性菌間頻繁、廣泛地轉(zhuǎn)移[37]。方婷子[19]研究發(fā)現(xiàn),沙門氏菌中IncI1質(zhì)粒陽性菌(12.0%)均攜帶blaOXA-1;攜帶blaTEM-1基因的菌株攜帶IncHI2、IncP、IncI1和IncA/C等質(zhì)粒。此外,本研究在IncN質(zhì)粒陽性菌株中還檢出acc(6’)-Ib、qnrB、blaOXA、qnrA和qnrS等與頭孢菌素和(氟)喹諾酮類抗生素耐藥相關(guān)基因。據(jù)報(bào)道,IncN型質(zhì)粒是臨床檢出菌株中的主要質(zhì)粒類型,也是攜帶blaCTX-M、blaNDM和qnr等耐藥基因的主要質(zhì)粒[38],也是促進(jìn)blaCTX-M基因水平傳播的常見流行質(zhì)粒[11,39],IncI1質(zhì)粒有時(shí)還會(huì)與IncN質(zhì)粒共同參與blaCTX-M-1耐藥基因的轉(zhuǎn)移[13-14]。qnr、acc(6’)-Ib和ESBLs編碼基因通常會(huì)位于同一質(zhì)粒上,可通過接合、轉(zhuǎn)座作用轉(zhuǎn)移和傳播,因此攜帶該類質(zhì)粒的沙門氏菌可以被認(rèn)為是一個(gè)潛在的耐藥基因庫,如果此類沙門氏菌在社區(qū)或食品生產(chǎn)鏈中傳播,將會(huì)導(dǎo)致巨大的潛在危害[40]。本研究發(fā)現(xiàn)攜帶IncI1質(zhì)粒的菌株比攜帶IncN質(zhì)粒菌株的耐藥譜更寬,對(duì)頭孢類抗生素的耐受水平更高,而攜帶IncN質(zhì)粒的菌株對(duì)氨基糖苷類抗生素的抗性則更高一些。由此可以推論,IncN質(zhì)??赡苤饕閷?dǎo)氨基糖苷類藥物耐藥,而IncI1型質(zhì)粒主要介導(dǎo)頭孢類抗生素耐藥。當(dāng)然,該2 類質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性是否和本研究的推斷結(jié)果一致,還需進(jìn)行進(jìn)一步研究。

    通過耐藥質(zhì)粒傳遞耐藥性是細(xì)菌中間最為常見也是最為重要的一種耐藥機(jī)制。本研究中,供體菌與沙門氏菌的接合頻率高于與大腸桿菌的接合頻率。IncI1和IncN質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移還賦予了受體菌對(duì)KAN、TIO、CRO、AMP、STR和GEN的耐藥表型,與以前研究結(jié)果相似[41-42]。

    已有研究表明,IncI1型質(zhì)粒是人源和食品源大腸桿菌及沙門氏菌攜帶和傳播β-內(nèi)酰胺酶基因最常見的質(zhì)粒之一,blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaCMY和blaOXA基因通常會(huì)隨IncI1質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移而水平傳播[43-44]。blaTEM和blaCTX-M可通過IncN和IncI1在禽類和人之間廣泛傳播[10,41],IncN質(zhì)粒也被歐洲多個(gè)國家的研究者報(bào)道攜帶有blaCTX-M-1[11-12]。本研究中,blaCTX-M-55和blaCTX-M-3均被證明可隨IncI1和IncN型質(zhì)粒在接合過程從供體菌傳遞給受體菌。雖然blaTEM在大部分供體和接合子中均有檢出,但在I14作為供體菌時(shí)均未在接合子中檢出,表明IncI1質(zhì)??赡茉谵D(zhuǎn)移過程沒有將宿主細(xì)胞中的質(zhì)粒完整地轉(zhuǎn)移到受體菌,也可能在接合過程中部分基因丟失。當(dāng)然,導(dǎo)致未能發(fā)生轉(zhuǎn)移的具體原因尚待進(jìn)一步通過S1-PFGE結(jié)合Southern-blot和質(zhì)粒序列分析證明。除ESBLs編碼基因外,qnr和acc(6’)-Ib-cr也通常位于接合質(zhì)粒上,并且可以通過接合作用進(jìn)行轉(zhuǎn)移和傳播[46],本研究在IncN質(zhì)粒陽性菌株中檢出的qnrB和acc(6’)-Ib基因均可通過接合傳給受體菌。

    研究IncI1和IncN質(zhì)粒在沙門氏菌中的流行狀況及其在不同種屬細(xì)菌間的傳播其轉(zhuǎn)移規(guī)律,將有助于對(duì)細(xì)菌耐藥性傳播提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),對(duì)食源性疾病爆發(fā)的原因進(jìn)行溯源和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,降低或防止食品安全事件的發(fā)生提供依據(jù)。

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