膠體金法檢測新型冠狀病毒特異性IgM和IgG抗體的假陽性結果分析

張亞楠

(包頭醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 包頭 014030)

2019新型冠狀病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)，因2019年12月中國武漢出現(xiàn)不明原因病毒性肺炎病例而被發(fā)現(xiàn)，并于2020年1月12日被世界衛(wèi)生組織命名[1]。2019-nCoV 感染者的臨床癥狀以發(fā)熱、干咳、乏力為主要表現(xiàn)，常伴有氣促和呼吸困難等，嚴重者可導致急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克，多功能衰竭甚至死亡[2]。2020年3月3日國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中，確診病例在原有核酸檢測和測序基礎上增加“2019-nCoV特異性IgM和IgG抗體檢測”作為臨床確診依據(jù)[3]。與病毒核酸檢測相比，血清特異性抗體檢測操作簡單便捷，對實驗環(huán)境及操作人員的要求也不苛刻，可以作為病毒核酸檢測的有效補充。本研究采用膠體金法，對我院1 067例血清樣本中2019-nCoV特異性IgM和IgG抗體進行檢測，對其假陽性率進行分析，并探討造成假陽性的可能因素，為有效識別假陽性并避免假陽性對臨床的誤導提供參考。

1 對象與方法

1.1對象 收集2020年2月26日至2020年3月15日就診于包頭醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院患者共計1 067例(男570例，女497例；年齡33歲～85歲)。

1.2方法 所有研究對象均采集空腹靜脈血3 mL，置于含分離膠的黃頭真空采血管內(nèi)，靜置待血液凝固，4 000 g離心10 min，取血清備用。采用2019-nCoV IgM/IgG抗體聯(lián)合檢測試劑盒(膠體金法)對所有研究對象的血清標本進行檢測。使用前將檢測卡充分恢復至室溫后，從錫箔袋中取出檢測卡，將其置于水平、干燥的平面上。用試劑盒中配套吸滴管吸取血清樣本，加一滴到試劑盒加樣孔中，再滴3滴稀釋液到試劑卡加樣孔中，10 min后觀察檢測卡，判定結果。

2 結果

從1 067例樣本中，用膠體金免疫層析技術檢出15例陽性，其中1例為IgM(+)IgG(+)，其余14例為IgM(+)IgG(-)。對上述15例患者標本進行新型冠狀病毒核酸檢測，結果陰性，進一步結合流行病學史及臨床表現(xiàn)排除新型冠狀病毒感染。該15例陽性結果均為假陽性。見表1。

表1 15例陽性抗體檢測結果

3 討論

抗體是機體免疫細胞被抗原激活后，B細胞分化成熟為漿細胞后所合成、分泌的一類能與相應抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。2019-nCoV感染人體后，也會激活人體免疫系統(tǒng)。IgM是初次體液免疫應答中最先出現(xiàn)的抗體，分泌型IgM為五聚體，主要存在于血液中，當血清中IgM升高時，提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。IgG是血清和體液中含量最高的抗體，是再次免疫應答產(chǎn)生的主要抗體。Guo等最近報道，2019-nCoV IgM約于5 d左右產(chǎn)生，而IgG約14 d左右產(chǎn)生[4]。

近期，國家藥品監(jiān)督管理局應急審批了幾家企業(yè)的2019-nCoV IgM、IgG抗體檢測試劑盒。有研究報道，2019-nCoV IgG、2019-nCoV IgM對新型冠狀病毒肺炎(Novel Coronavirus Pneumonia，NCP)診斷的敏感度分別為90.5 %(105/116)、75.9 %(88/116)，特異度分別為99.3 %(133/134)、94.0 %(126/134)，提示2019-nCoV IgG、IgM檢測可以作為臨床NCP診斷的必要補充[5]。然而，2019-nCoV特異性抗體檢測假陽性的出現(xiàn)，從技術本身而言，是無法完全避免的。因此，有效識別假陽性并避免假陽性對臨床的誤導，對于發(fā)揮2019-nCoV特異性抗體檢測對2019-nCoV感染的診斷和防控價值具有重要意義。

本研究從1 067例樣本中檢出15例陽性，結合病毒核酸檢測結果、流行病學史及臨床表現(xiàn)排除2019-nCoV感染，均為假陽性反應，假陽性率為1.41 %，其中3例孕婦(3/15，20 %)、1例惡性腫瘤(1/15，6.7 %)、1例動脈血栓(1/15，6.7 %)、1例消化道出血(1/15，6.7 %)、1例腹痛(1/15，6.7 %)，其余8例(8/15，53.3 %)分別是胃炎、膽囊結石、胃食管反流等。根據(jù)文獻報道，孕婦、惡性腫瘤、以及動脈血栓等患者血液處于高凝狀態(tài)，纖維蛋白原升高，干擾金標條上包被的特異性抗原，造成假陽性[6]。另外，已知自身免疫疾病患者體內(nèi)存在多種抗細胞核成分的自身抗體，與包被抗原成分發(fā)生抗原抗體反應，可導致假陽性[7]。而且，健康人群約3 %～15 %體內(nèi)含有異嗜性物質(zhì)，這些嗜異性抗體可通過交聯(lián)固相和標記的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性反應[8]。除此之外，由于某些基礎疾病或免疫功能異常，或長期服用某種藥物，患者血清中含有異常蛋白或特殊物質(zhì)，如類風濕因子、甲胎蛋白、補體等，也可導致假陽性。因此，患者血清中如含有上述物質(zhì)，均可造成抗體檢測結果假陽性。

本研究檢出的15例假陽性結果中，1例為IgM(+)IgG(+)，其余14例為IgM(+)IgG(-)。從本研究結果看，2019-nCoV IgM假陽性率明顯高于2019-nCoV IgG。一般情況下，根據(jù)病原微生物刺激機體產(chǎn)生免疫應答的規(guī)律而言，初次免疫應答的特點是主要為IgM類抗體，抗體特異性低、含量少、在體內(nèi)維持時間短；再次免疫應答的特點是抗體類型以IgG為主，抗體特異性高、含量多、維持時間長。也有報道稱，在類風濕患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有不同濃度的類風濕因子，是造成IgM假陽性的原因之一[9]。

對于2019-nCoV IgM/IgG抗體檢測結果的解讀，國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心建議，正確利用及觀察IgM/IgG的動態(tài)變化有助于2019-nCoV感染的診斷[9]。例如，IgM(+)/IgG(-)疑為急性感染，但需間隔一周左右再次檢測，若仍是IgM(+)/IgG(-)，后續(xù)可繼續(xù)檢測觀察，如果結果不變，則IgM可確認為假陽性；再如，IgM(+)/IgG(+)疑為急性感染，間隔一周左右再次檢測，若IgM(+)/IgG(+)或IgM(-)/IgG(+)，但IgG滴度持續(xù)增高，達4倍以上，則可判斷為急性或近期感染。本研究發(fā)現(xiàn)14例為IgM(+)IgG(-)，僅1例為IgM(+)/IgG(+)，以上結果提示，盡管2019-nCoV IgM和IgG聯(lián)合檢測對NCP的早期診斷更具有應用價值，但仍存在假陽性的可能。

本研究僅對我院1 067例血清樣本中2019-nCoV IgM和IgG抗體進行了檢測，并對其假陽性及造成假陽性的可能因素做了初步探討，但還存在以下不足之處：①因為臨床標本中的一些干擾物質(zhì)會造成假陽性結果，本研究由于標本采集的限制，沒有觀察IgM/IgG的動態(tài)變化；②針對造成假陽性結果的可能干擾因素，如類風濕因子、纖維蛋白原等，本研究沒有進一步深入分析探討；③2019-nCoV特異性IgM和IgG抗體檢測(金標法)是一個全新的方法，本研究對其臨床特異度和臨床敏感度缺乏充分驗證。

綜上所述，2019-nCoV特異性IgM和IgG抗體檢測在NCP的診斷、治療監(jiān)測和病程轉歸等方面提供有意義的數(shù)據(jù)，但應有效識別由于干擾物質(zhì)的存在所導致的假陽性結果。