兩種方法在胸腔積液、腹水、腦脊液細胞計數中的比較分析

呼延武，胡小芳，李 蓮，田彩霞，王美鈞

1.湖北省十堰市人民醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學院附屬人民醫(yī)院檢驗科，湖北十堰 442000；2.國藥東風總醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學院附屬國藥東風總醫(yī)院心內科，湖北十堰 442000

體液和血液是臨床診斷疾病極為重要的標本。胸腔積液、腹水檢驗在漏出液和滲出液，癌性和非癌性積液，病毒感染、化膿性感染和結核性積液的鑒別診斷及尋找致病原等方面具有重要意義。而腦脊液檢驗為中樞神經系統疾病的診斷和治療提供了依據[1]。體液細胞計數是臨床診斷疾病的重要參考指標，同時細胞計數的變化也是疾病療效觀察的指標。細胞計數的“金標準”是改良Neubauer計數板計數法，這種方法操作煩瑣，重復性差，受到的影響因素較多。隨著現代科技的發(fā)展，高端血液分析儀如Sysmex XN-9000被應用于細胞計數檢測。這類儀器提高了體液檢驗的檢測效率，而且儀器計數比人工計數重復性和準確性更好，可以減少人為因素的影響[2]。本研究收集來自十堰市人民醫(yī)院的306份體液標本，用Sysmex XN-9000全自動血液分析儀體液模式(儀器法)和改良Neubauer計數板人工顯微鏡計數(顯微鏡計數法)對胸腔積液、腹水、腦脊液細胞計數中的有核細胞數和紅細胞數進行檢測，并進行統計學分析，探討儀器法在胸腔積液、腹水、腦脊液細胞計數檢測中的應用。

1 材料與方法

1.1標本來源 收集體液標本306份，其中胸腔積液標本92份，腹水標本118份，腦脊液標本96份，均來自2019年2-6月湖北省十堰市人民醫(yī)院住院患者。分別將胸腔積液、腹水和腦脊液按有核細胞計數結果分為4檔：(0～100)×106/L、(>100～500)×106/L、(>500～1 000)×106/L和>1 000×106/L；按紅細胞計數結果分為3檔：(0～1 000)×106/L、(>1 000～10 000)×106/L和>10 000×106/L。

1.2儀器與試劑 日本Sysmex XN-9000全自動血液分析儀及與其配套的試劑、校準品和質控品。Olympus雙目鏡顯微鏡購自日本Olympus公司。改良Neubauer計數板購自深圳市海濱儀器有限公司。

1.3方法 標本均使用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管采集，并在標本采集后4 h內采用儀器法和顯微鏡計數法完成檢驗。儀器法：分析前對儀器進行校準，然后做室內質量控制，質控在控情況下檢測標本，新鮮體液標本按照《Sysmex XN-9000全自動血液分析儀中文操作手冊》的方法進行操作。標本必須2 h內檢測完成，每份標本檢測2次，取平均值作為最終結果進行分析。顯微鏡計數法：由2名中級以上職稱的檢驗師使用改良Neubauer計數板在顯微鏡下進行紅細胞和有核細胞計數。以2名檢驗師鏡檢結果的均值作為最終結果，細胞計數標準參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程(第4版)》。

2 結 果

2.1儀器法和顯微鏡計數法有核細胞檢測結果比較 胸腔積液、腹水、腦脊液有核細胞水平在(>500～1 000)×106/L時，儀器法和顯微鏡計數法結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)；而有核細胞水平在(0～100)×106/L、(>100～500)×106/L和>1 000×106/L時差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 儀器法和顯微鏡計數法有核細胞檢測結果比較(×106/L)

2.2儀器法和顯微鏡計數法紅細胞檢測結果比較 胸腔積液、腹水和腦脊液紅細胞計數在>10 000×106/L時，儀器法和顯微鏡計數法結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)；而紅細胞計數在(0～1 000)×106/L和(>1 000～10 000)×106時，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 儀器法和顯微鏡計數法紅細胞檢測結果比較[M(P25,P75)，×106/L]

3 討 論

顯微鏡手工計數是胸腔積液、腹水、腦脊液細胞計數的傳統方法，在不同檢測人員之間，其操作影響因素較多，重復性差，誤差較大，很難做到標準化。目前，顯微鏡手工計數及分類仍然是體液常規(guī)檢驗的“金標準”，但全自動血液分析儀的體液模式檢測可提高檢測結果的準確性和縮短標本檢測周轉時間[3]，因此，隨著臨床實驗室質量要求的不斷提高，實現體液標本檢測的自動化也受到越來越多的關注[4]。Sysmex XN-9000應用核酸熒光染色技術和鞘流電子阻抗原理，采用獨立的體液模式對體液細胞進行分析，因此具有計數、分類及腫瘤細胞的定量提示篩查功能[5]。

本試驗結果顯示，兩種方法的檢測結果比較有一定的差異，當有核細胞和紅細胞計數低的時候，儀器法和顯微鏡計數法有明顯差別，尤其是當紅細胞計數<1 000×106/L時，儀器法檢測結果極不準確，很多時候會將其計數成0，但通過顯微鏡計數法發(fā)現還是存在少量紅細胞。有時儀器法檢測結果顯示紅細胞計數為1 000×106/L，但顯微鏡計數法結果顯示，紅細胞計數小于1 000×106/L，有些甚至只有一兩百。可能是因為紅細胞的單位數量級太大而導致偏差太大。

儀器對紅細胞的最低檢測限為1 000×106/L，在實際工作中發(fā)現當標本中紅細胞計數≥1 000×106/L時，儀器法在紅細胞計數檢測中才比較準確[6]。對于比較清亮透明的體液，儀器法檢測有核細胞的結果相對可靠，但紅細胞計數還是顯微鏡計數法結果更可靠。對于血性體液標本，儀器法檢測結果與顯微鏡計數法檢測結果無明顯差別，但是儀器法計數更快，重復性更好，可以在一定程度上減少檢測人員之間操作帶來的誤差。對于一些炎癥性標本，尤其是有核細胞計數很高的體液標本，儀器法計數會更加準確。而且隨著儀器不斷更新，有核細胞的分類也更加準確，檢驗人員可以通過儀器的分類功能看到有核細胞的分類圖，從而報告給臨床。但是并不是所有的分類結果都可以直接發(fā)出報告，儀器散點圖提示可能有腫瘤細胞時應采用顯微鏡手工鏡檢的方式對細胞的分類進行復核，因為儀器只會區(qū)分出正常的中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞，對于間皮細胞、溶解細胞及腫瘤細胞是分不清楚的。此外，胸腔積液、腹水和腦脊液標本中可能含有結晶、上皮細胞，甚至蛋白黏液絲和異常細胞等，這些都會干擾血球儀的計數[7]，并且容易引起半堵孔或完全堵孔，影響儀器的分析性能。因此，檢驗人員應對這部分標本進行過濾處理，并且在檢測完后及時清洗儀器。

Sysmex XN-9000全自動血液分析儀作為一種新型體液檢測儀器，在胸腔積液、腹水和腦脊液細胞計數方面比全自動尿液分析儀更加準確，而且它比尿液分析儀多了分類功能，其結果可信度高，又具有簡便、快速的優(yōu)點，可以作為胸腔積液、腹水和腦脊液等體液標本細胞計數的篩查手段，可減輕檢驗人員的工作壓力，但對于異常的結果和分類圖形等，還需采用儀器結合人工鏡檢的方法對標本進行全面評價和結果修正。這與其他研究者報道的在其他型號全血全自動分析儀器檢測體液標本的結論基本一致[8-9]。因此筆者建議儀器法與顯微鏡計數法聯合應用，提高檢測結果的準確性，為臨床提供客觀、可靠和快速的實驗診斷依據。