HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定水中聯(lián)苯肼酯和乙螨唑殘留量

□ 魏杰 謝源 楊浪 黃玉貴（通信作者） 貴州健安德科技有限公司

□ 廖朝選（通信作者） 貴州省分析測(cè)試研究院

聯(lián)苯肼酯（bifenazate）和乙螨唑（etoxazole）分別屬于聯(lián)苯肼類及2,4-二苯基噁唑衍生物類選擇性殺螨[1-2]，對(duì)螨類均有優(yōu)異的活性，常被混配或搭配輪換應(yīng)用于柑橘全爪螨等害螨的防治[3-4]。由于兩種農(nóng)藥在田間的大量應(yīng)用，經(jīng)雨水沖刷、土壤淋溶等進(jìn)入水體，可能造成殘留風(fēng)險(xiǎn)。因此，建立同時(shí)測(cè)定兩種農(nóng)藥的檢測(cè)方法十分必要。當(dāng)前，對(duì)于兩種農(nóng)藥的檢測(cè)分析，已有高效液相色譜法的相關(guān)研究報(bào)道[2，5]，但由于其在水中的殘留量較低，導(dǎo)致該方法無法滿足快速或痕量檢測(cè)的要求。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法是農(nóng)藥痕量分析的主要方法，張?jiān)碌?、王蒙岑等[1，6]分別使用相關(guān)方法對(duì)木瓜中聯(lián)苯肼酯和柑橘與土壤中乙螨唑的殘留量進(jìn)行分析。針對(duì)聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的同時(shí)分析，潘靜等[7]建立了40%聯(lián)苯肼酯?乙螨唑懸浮劑的高效液相色譜分析方法。但是，并未見到采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)分析兩種農(nóng)藥在水中殘留的相關(guān)報(bào)道。農(nóng)藥進(jìn)入水體可能產(chǎn)生水生態(tài)暴露風(fēng)險(xiǎn)，該風(fēng)險(xiǎn)程度與殘留量有關(guān)。因此，本試驗(yàn)以甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）為流動(dòng)相所建立的快速、簡單、準(zhǔn)確的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法可用于兩種農(nóng)藥在水中的殘留分析。

表1 MRM離子采集參數(shù)

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試材

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：Agilent 1290-6470A，美國安捷倫科技有限公司；色譜柱：Eclipse Plus-C18 50×2.1mm，1.8μm；電子天平：XSE105DU，梅特勒-托利多儀器（中國）有限公司，0.0001g；離心機(jī)：LD5-10低速離心機(jī)。

聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω=97.5%，Dr.Ehrenstorfer；乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω=99%，Dr.Ehrenstorfer；甲醇：色譜純，默克股份有限公司；甲酸：HPLC級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；去離子水：經(jīng)美國Milli-Q純水機(jī)制備，電阻率為18.2MΩ/cm。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱取0.0103g聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品和0.0102g乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)品置于稱量瓶中，用甲醇少量多次溶解后，將其分別定量轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，定容至刻度線，搖勻后得到100.4mg/L（聯(lián)苯肼酯）和101.0mg/L（乙螨唑）的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。然后，分別量取3.0mL聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和1.0mL乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋為聯(lián)苯肼酯和乙螨唑分別為3.0、1.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。之后，吸取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇依次制備聯(lián)苯肼酯濃度為3.0、6.0、15.0、30.0、75.0、150.0μg/L，乙螨唑濃度為 1.0、2.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，待測(cè)。

1.2.2 加標(biāo)樣液制備

以曝氣生態(tài)水為基質(zhì)，分別向其中添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備得到聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）濃度為3.0（1.0）、15.0（5.0）μg/L的加標(biāo)樣液。取加標(biāo)樣液10mL，以4000r/min離心5min后經(jīng)0.25μm濾膜過濾，待測(cè)。

1.2.3 儀器操作條件

1.2.3.1 HPLC操作條件

進(jìn)樣體積：2μL； 流 速：0.3mL/min； 柱 溫：25℃；保留時(shí)間：聯(lián)苯肼酯0.56min、乙螨唑1.01min。

1.2.3.2 MSD操作條件

離子源：AJSESI源，正離子模式；離子源參數(shù)：干燥氣，N2；干燥氣溫度，250℃；干燥氣流速，5L/min；鞘氣：N2；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流速：11L/min；霧化器壓力（Nebulizer）：45psi；噴嘴電壓：500V；毛細(xì)管電壓（Capillary）：3500V。監(jiān)測(cè)模式：MRM，MRM離子采集參數(shù)如表1所示。

1.3 樣品測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定，且相鄰2次標(biāo)樣溶液的峰面積相對(duì)變化＜1.5%后對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法選擇性

將空白基質(zhì)樣品、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（聯(lián)苯肼酯3.0μg/L、乙螨唑1.0μg/L）分別進(jìn)行測(cè)定分析，在儀器最高靈敏度下空白樣品無可見干擾；聯(lián)苯肼酯和乙螨唑可實(shí)現(xiàn)同時(shí)監(jiān)測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間分別為0.56、1.01min，通過提取特征離子后，無互相干擾現(xiàn)象。兩種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見圖1。

2.2 線性相關(guān)性與檢出限、定量限

將制備的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液在設(shè)定的分析方法下進(jìn)行測(cè)定，以聯(lián)苯肼酯或乙螨唑的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），響應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性擬合，得到聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖2）。結(jié)果表明，兩種農(nóng)藥在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，即聯(lián)苯肼酯3.0～150.0μg/L、乙螨唑1.0～150.0μg/L具有良好的線性關(guān)系?；貧w方程為聯(lián)苯肼酯y=-37.9573+57.7016x，r2=0.9999；乙螨唑y=397.562x+204.957，r2=0.9997。通過信/噪比（S/N）=3，確定聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的檢出限為7.9×10-5、1.2×10-5mg/L； 通 過 信 /噪 比（S/N）=10，確定聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的定量限為2.6×10-4、3.9×10-5mg/L。聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

圖1 聯(lián)苯肼酯（a）和乙螨唑（b）的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.3 方法的回收率

取水樣加標(biāo)樣品分別按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，確定方法的準(zhǔn)確度，結(jié)果見表2。當(dāng)聯(lián)苯肼酯的添加濃度為3.0μg或15.0μg時(shí)，回收率在98.67%～103.33%，平均回收率為101.56%，變異系數(shù)為1.78%；當(dāng)乙螨唑的添加濃度為1.0μg或5.0μg時(shí)，回收率在97.50%～104.40%，平均回收率為100.28%，變異系數(shù)為2.65%。由此可知，該方法準(zhǔn)確度良好。

3 結(jié)論

本文使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜建立了同時(shí)測(cè)定聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的分析方法。在甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）作為流動(dòng)相下，聯(lián)苯肼酯、乙螨唑分別在 3.0～150.0μg/L和 1.0～50.0μg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，說明該方法的準(zhǔn)確度良好，操作簡單、快速，可同時(shí)分析水中聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的殘留量。

表2 回收率測(cè)定

圖2 聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的標(biāo)準(zhǔn)曲線