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    菠蘿蜜低聚肽對(duì)γ射線輻照小鼠氧化損傷的保護(hù)作用

    2020-09-10 07:22:44郝云濤劉睿珠娜劉欣然胡佳妮康家偉毛瑞雪張亭李勇
    關(guān)鍵詞:超氧化物歧化酶丙二醛射線

    郝云濤 劉睿 珠娜 劉欣然 胡佳妮 康家偉 毛瑞雪 張亭 李勇

    摘?要:目的:探究菠蘿蜜低聚肽(JOPs)對(duì)γ射線輻照導(dǎo)致小鼠氧化損傷的保護(hù)作用。方法:選取96只SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠,按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、乳清蛋白組(0.40 g/kg·BW)及3個(gè)JOPs干預(yù)組(0.20、0.40、0.80 g/kg·BW),每組隨機(jī)分為2個(gè)亞組,8只/亞組。行灌胃干預(yù)第14 d除空白組外,小鼠接受60Co γ射線全身輻照,劑量3.5 Gy,劑量率1 Gy/min。兩亞組分別在輻射后第3 d和第14 d檢測(cè)小鼠血清和肝臟超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平。結(jié)果:輻照后第3 d及第14 d,相比空白組,模型組血清、肝臟SOD及GSH-Px活性均顯著降低,MDA水平均顯著增高,JOPs各劑量組小鼠血清及肝臟MDA水平均顯著低于模型組與乳清蛋白組;輻照后第3 d,相比模型組,JOPs各劑量組小鼠血清及肝臟SOD、GSH-Px活性均顯著增高,且高劑量組小鼠血清SOD活性及血清、肝臟GSH-Px活性與中、高劑量組肝臟SOD活性均顯著高于乳清蛋白組;輻照后第14 d,相比模型組,JOPs各劑量組小鼠血清及肝臟SOD、GSH-Px活性均顯著增高,且JOPs各劑量組小鼠血清SOD活性與高劑量組肝臟SOD、GSH-Px活性均顯著高于乳清蛋白組。結(jié)論: JOPs對(duì)γ射線輻照所致氧化損傷具有保護(hù)作用。

    關(guān)鍵詞:菠蘿蜜低聚肽;γ射線;氧化損傷;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽過(guò)氧化物酶;丙二醛

    自由基學(xué)說(shuō)是電離輻射所致氧化損傷的理論基礎(chǔ),當(dāng)機(jī)體受到射線輻照,機(jī)體中的水發(fā)生電離分解產(chǎn)生多種自由基,攻擊機(jī)體細(xì)胞組織從而造成損傷[1-3]。然而,目前輻射防護(hù)劑多為化學(xué)合成物質(zhì),臨床效果有限且毒副作用大,尋找安全有效、毒副作用小的天然抗輻射劑是亟待解決的問(wèn)題[4]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,人參低聚肽、核桃低聚肽等均可通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體清除自由基能力,降低電離輻射引起的氧化損傷[5-6]。1 000余年前,菠蘿蜜被引入我國(guó),現(xiàn)廣泛種植于我國(guó)南方多省,年產(chǎn)量及總產(chǎn)值可觀[7-9]。菠蘿蜜是藥食兩用食物,其保健作用早在《本草綱目》有過(guò)記載[10-14]。菠蘿蜜果肉及種子中蛋白質(zhì)含量豐富,遠(yuǎn)超其他常見水果[15-17]。菠蘿蜜低聚肽(JOPs)是利用生物酶解技術(shù)從菠蘿蜜果肉和種子中制取得到的小分子生物活性肽,主要成分是小分子活性寡肽。目前尚無(wú)關(guān)于JOPs通過(guò)抗氧化功能發(fā)揮其輻射防護(hù)作用的研究報(bào)道,本研究采用γ射線輻照BALB/c小鼠,通過(guò)檢測(cè)輻照后小鼠血清和肝臟SOD活性、GSH-Px活性及MDA水平,探究JOPs對(duì)電離輻射所致氧化損傷的保護(hù)作用。

    1?材料與方法

    1.1?樣品

    JOPs,淡黃色固體粉末,主要成分為分子量<1 000 Da的寡肽,購(gòu)自海南盛美諾生物技術(shù)有限公司。

    1.2?主要試劑與儀器

    HFY-1A沽源控制臺(tái)、HFY-601固定式多路X、γ劑量率儀、60Co γ射線輻射源,北京大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院;小鼠SOD、GSH-Px和MDA檢測(cè)試劑盒,北京麥格泰克科技有限公司。

    1.3?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    96只健康SPF級(jí)BALB/c雌性小鼠,6~8周齡,體重18~22 g,由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):SYXK(京)2016-0041。分籠飼養(yǎng),4只/籠,自由飲食、飲水,飼喂SPF級(jí)小鼠生長(zhǎng)飼料。動(dòng)物房屏障環(huán)境飼養(yǎng)小鼠,溫度24~26℃,相對(duì)濕度50%~60%,室內(nèi)照明光暗周期節(jié)律12h/12h,照明時(shí)間7∶00~19∶00。

    1.4?實(shí)驗(yàn)方法

    1.4.1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理?適應(yīng)1周后,按體重將96只BALB/c小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、乳清蛋白組(0.40 g/kg·BW)及JOPs低、中、高劑量干預(yù)組(0.2、0.4、0.8 g/kg·BW),16只/組,再將每組隨機(jī)分為2個(gè)亞組,8只/亞組。兩亞組小鼠均接受3.5Gy輻照劑量,制造輻射損傷動(dòng)物模型。

    1.4.2?血清抗氧化指標(biāo)檢測(cè)?灌胃干預(yù)第14 d,除空白組外,其他各組小鼠均一次性接受3.5 Gy的60Co γ 射線全身輻照,吸收劑量率為1 Gy/min,輻照后繼續(xù)灌胃干預(yù),分別在輻射后第3 d和第14 d摘眼球取血,將血液3 000 r/min離心10 min,移取血清并按照試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)血清SOD、GSH-Px活性和MDA水平。

    1.4.3?肝臟抗氧化指標(biāo)檢測(cè)?灌胃干預(yù)第14 d,除空白組外,其他各組小鼠均一次性接受3.5 Gy的 60Co γ 射線全身輻照,吸收劑量率為1 Gy/min。輻照后繼續(xù)灌胃干預(yù),分別在輻射后第3 d和第14 d摘眼球取血后,頸椎脫臼法處死小鼠,剝離肝臟,去除表面脂肪組織和膽囊,在相同部位稱取適量肝組織,剪碎后加入冷生理鹽水,勻漿機(jī)制成10%肝組織勻漿,然后3 000r/min,離心10 min,按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定肝組織SOD、GSH-Px活性及MDA水平。

    1.5?統(tǒng)計(jì)分析

    數(shù)據(jù)以±s表示,用SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析。行One-Way ANOVA,方差齊者,組間統(tǒng)計(jì)采用LSD法;如方差不齊,組間統(tǒng)計(jì)采用Dunnetts T3法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2?結(jié)果與分析

    2.1?JOPs對(duì)輻照后第3 d小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響

    如表1所示,輻照后第3 d,相比空白組,模型組與乳清蛋白組小鼠血清SOD、GSH-Px活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);JOPs各劑量干預(yù)組小鼠血清SOD、GSH-Px活性均高于模型組(P<0.05),其中JOPs高劑量組小鼠血清SOD、GSH-Px活性均顯著高于乳清蛋白組(P<0.05);模型組、乳清蛋白組及JOPs中劑量組小鼠血清MDA水平明顯低于空白組(P<0.05),此外,JOPs各劑量干預(yù)組小鼠血清MDA水平均比模型組及乳清蛋白組低(P<0.05)。

    2.2?JOPs對(duì)輻照后第14 d小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響

    如表2所示,輻照后第14 d,模型組小鼠血清SOD、GSH-Px活性與乳清蛋白組血清SOD活性明顯低于空白組(P<0.05),而血清MDA水平明顯高于空白組;JOPs各劑量干預(yù)組小鼠血清SOD活性均比模型組及乳清蛋白組高(P<0.05);JOPs各劑量組小鼠血清GSH-Px活性也均明顯高于模型組(P<0.05),且JOPs高劑量干預(yù)組小鼠血清GSH-Px活性明顯高于乳清蛋白組(P<0.05);JOPs各劑量干預(yù)組小鼠血清MDA水平均低于模型組及乳清蛋白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.3?JOPs對(duì)輻照后第3 d 小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

    如表3所示,輻照后第3 d,模型組與乳清蛋白組小鼠肝臟SOD、GSH-Px活性明顯低于空白組(P<0.05);相比模型組,JOPs各劑量干預(yù)組小鼠肝臟SOD、GSH-Px活性均明顯增高(P<0.05),并且JOPs中、高劑量組小鼠肝臟SOD活性及JOPs高劑量組小鼠肝臟GSH-Px活性均較乳清蛋白組顯著增高(P<0.05);對(duì)比空白組,模型組及乳清蛋白組小鼠肝臟MDA水平明顯降低(P<0.05),此外,JOPs各劑量干預(yù)組小鼠肝臟MDA水平均低于模型組與乳清蛋白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.4?JOPs對(duì)輻照后第14d小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

    如表4所示,輻照后第14 d,相比空白組,模型組小鼠肝臟SOD、GSH-Px活性與乳清蛋白組小鼠肝臟SOD活性明顯降低(P<0.05),而模型組與乳清蛋白組肝臟MDA水平明顯比空白組高(P<0.05);相比模型組及乳清蛋白組,JOPs各劑量干預(yù)組小鼠肝臟SOD活性均明顯增高(P<0.05);JOPs各劑量干預(yù)組小鼠肝臟GSH-Px活性均明顯比模型組高(P<0.05),且JOPs高劑量組小鼠肝臟GSH-Px活性高于乳清蛋白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);相比模型組與乳清蛋白組,JOPs各劑量干預(yù)組小鼠肝臟MDA水平均明顯降低(P<0.05)。

    3?討論

    氧化損傷主要由于機(jī)體內(nèi)外因素導(dǎo)致的活性氧(ROS)水平急劇增加,超出了相應(yīng)的抗氧化防御體系的能力范圍引起[18]。ROS是一類高度活躍的分子,在一定劑量范圍內(nèi),正常機(jī)體代謝不斷產(chǎn)生的ROS具有重要生理功能的信號(hào)調(diào)節(jié)作用,但如果機(jī)體在各種內(nèi)外因素誘導(dǎo)下,產(chǎn)生過(guò)量的ROS,超出抗氧化體系承受的范圍,則會(huì)產(chǎn)生氧化損傷,致使各種臨床疾病的發(fā)生和發(fā)展[19-21]。電離輻射是臨床檢查、腫瘤的放射治療以及各種介入治療的重要手段,也是環(huán)境中誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生,進(jìn)而引起氧化損傷的多種常見有害理化因素之一[4,22]。研究表明,電離射線與組織相互作用產(chǎn)生的大量ROS對(duì)機(jī)體生物大分子的損害,是造成機(jī)體輻照損傷的主要原因[23]。電離輻射能夠通過(guò)其高能粒子誘導(dǎo)產(chǎn)生大量ROS,引起多種組織器官氧化損傷,有效防治這種氧化損傷對(duì)于防護(hù)各種情況的輻射損傷,減輕輻射引起的臨床不良反應(yīng),維護(hù)健康具有重要意義[24-29]。已有研究表明,通過(guò)減輕機(jī)體氧化應(yīng)激水平,提高抗氧化能力,可減輕輻射損傷[30-31]。

    機(jī)體具有應(yīng)對(duì)氧化損傷的抗氧化防御體系,主要由多種抗氧化酶和一些非酶類的抗氧化劑組成,正常生理狀態(tài)下這些抗氧化劑可協(xié)同作用,將ROS水平控制在適宜范圍內(nèi)[32]。SOD是抗氧化系統(tǒng)的第一道防線,在需氧生物中普遍存在[33]。GSH-Px可清除脂質(zhì)氫過(guò)氧化物,并在CAT含量很少或H2O2產(chǎn)量很低的組織中,可代替CAT清除在SOD催化下由O-2·轉(zhuǎn)化生成的H2O[34-35]2。作為膜脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物,MDA具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,可造成細(xì)胞代謝異常和功能破壞,因此,機(jī)體MDA的水平可反映γ射線輻照所致的氧化損傷程度[36]。

    本研究結(jié)果顯示,γ射線輻照可導(dǎo)致模型組小鼠血清及肝臟SOD、GSH-Px活性降低,MDA水平增高,與Dilek Kutanis等[37]的研究一致。輻照后第3 d及第14 d相對(duì)于模型組,JOPs各劑量干預(yù)組小鼠的SOD、GSH-Px活性及MDA水平均得到明顯改善(P<0.05)。輻照后第3 d,JOPs高劑量組小鼠血清SOD活性及血清、肝臟GSH-Px活性與中、高劑量組肝臟SOD活性均顯著高于乳清蛋白組(P<0.05);輻照后第14 d,JOPs各劑量組小鼠血清SOD活性與高劑量組肝臟SOD、GSH-Px活性均顯著高于乳清蛋白組(P<0.05)。JOPs作用優(yōu)于乳清蛋白,表明JOPs對(duì)輻照所致氧化損傷的保護(hù)功效并非單純由于機(jī)體蛋白質(zhì)攝入量增加所引起。因此可推斷,JOPs可通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體血清及肝臟SOD、GSH-Px活性,提高自由基清除速率,從而降低機(jī)體脂質(zhì)氧化水平,減輕細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及功能受損,進(jìn)而減輕機(jī)體因γ射線輻照所致的氧化損傷,發(fā)揮電離輻射防護(hù)功能。但是,JOPs的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步的研究。

    4?結(jié)論

    本研究首次證實(shí)JOPs對(duì)機(jī)體γ射線輻照所致氧化損傷具有一定保護(hù)作用,為其作為具有輻射防護(hù)作用的新型保健食品的開發(fā)及應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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