普洱茶揮發(fā)性成分分析方法對比研究

吳娜 董毅 田先嬌 楊新周

關(guān)鍵詞：普洱茶;揮發(fā)性成分;分析方法;對比

普洱茶具有“越陳越香”的特點(diǎn)，發(fā)酵的時(shí)間越長，產(chǎn)生的醇就越多，品質(zhì)越來越佳[1]。另外，茶葉中含有多種對人體健康有益的活性成分，可以預(yù)防多種疾病的功效，深受國內(nèi)外消費(fèi)者的關(guān)注與青睞[2]。此外，普洱茶的加工和生產(chǎn)方法不同，即口感也稍有變化，其香氣特征也不同[3-4]。因此，普洱茶揮發(fā)性成分分析方法研究具有重要意義。對于普洱茶的相關(guān)研究較多，包括主要化學(xué)成分分離、農(nóng)藥殘留量和重金屬含量測定等，其揮發(fā)性成分研究多是其風(fēng)味評價(jià)[5]。將指紋圖譜技術(shù)引用于普洱茶的研究相對較多[6-9]，但是這些指紋圖譜的分析，重在主成分分析及其各成分的百分含量分析。

文中利用指紋圖譜技術(shù)評價(jià)比較揮發(fā)性成分的提取、分離系統(tǒng)、檢測器等，達(dá)到快速鑒別的作用，打破多用感官審評方法鑒定普洱茶品質(zhì)的格局[10-11]，填補(bǔ)感官審評對因人而異、無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的空白，用科學(xué)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析評價(jià)，以期達(dá)到質(zhì)量控制和摻偽鑒別。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜質(zhì)譜儀（GC/MS-QP2010，日本島津）;

索氏提取器;

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELA OSB-2100）;

數(shù)顯電子天平（梅特勒--托利多儀器（上海）有限公司）;

丙酮（AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）。

1.2 材料

大益七子餅茶7542普洱生茶（106批次，2011年）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的處理

稱取2g普洱茶樣品，研細(xì)，以丙酮為提取劑進(jìn)行索氏法回流提取17次，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至2mL，用有機(jī)相濾膜過濾至進(jìn)樣瓶中，得待測液。

1.3.2 儀器條件

進(jìn)樣口和檢測器溫度：250℃，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量：0.3μL，載氣：氮?dú)?，純度?9.999%，柱流量：1.5mL/min，123-1031-JW·DB-1（30.0m×0.32mm×0.1μm）色譜柱分離，不分流進(jìn)樣，初始溫度80℃，保持1min，以10℃/min升至280℃并保持5min。質(zhì)譜儀條件：Scan掃描，EI源，離子源溫度200℃，離子掃描范圍35～1000。

1.3.3 樣品檢測

將待測液按1.3.2檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測條件的優(yōu)化

2.1.1分流與不分流模式的選擇

將提取液在相同升溫程序、相同檢測溫度和相同柱流量下，采用分流模式（分流比為20：1）和不分流模式進(jìn)樣分析，不分流模式下進(jìn)樣分析，檢測沒有達(dá)到飽和狀態(tài)，且化合物相對較多;在分流模式（即分流比為20：1）檢測的化合物相對較少。因此，選擇不分流模式對樣品進(jìn)行檢測分析。

2.1.2分離系統(tǒng)起始溫度的選擇

通過實(shí)驗(yàn)得出，程序升溫的初始溫度為80℃和50℃時(shí)色譜峰結(jié)果一致，但進(jìn)樣口溫度為80℃不影響結(jié)果分析且縮短了檢測時(shí)間。因此，進(jìn)樣口溫度為80℃較好。

2.2 索氏提取法回流次數(shù)對普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜的影響

考察回流次數(shù)（1、2、3、5、8、12、17、25次）對揮發(fā)性成分指紋圖譜的影響，通過實(shí)驗(yàn)得出，回流17次所提取的物質(zhì)種類是最多的，所以選擇回流17次來提取普洱茶的揮發(fā)性成分。

2.3 不同色譜柱對普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜的影響

考察了不同色譜柱，123-5031·DB-5（30.0m×0.32mm×

0.1μm）毛細(xì)管色譜柱、123-1031-JW·DB-1（30.0m×

0.32mm×0.1μm）毛細(xì)管色譜柱、RXi17（RESTEK）（30.0m×

0.25mm×0.25μm）毛細(xì)管色譜、ZB-multi Residue-2（30.0m×

0.25mm×0.2μm）毛細(xì)管色譜柱對普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜的影響，結(jié)果表明123-1031-JW·DB-1色譜柱分離效果最好。

2.4 不同檢測器對普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜的影響

以丙酮為提取溶劑，采用優(yōu)化的索氏提取法提取普洱茶中的揮發(fā)性成分，比較探討了不同檢測器（FID和質(zhì)譜檢測器）對普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜的影響。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)A版和SPSS Statistics 17.0版軟件對不同色譜柱分離的指紋圖譜進(jìn)行相似度評價(jià)分析和主成分分析。結(jié)果表明，質(zhì)譜檢測器的相似度（達(dá)0.935）和累積貢獻(xiàn)率高（53%），主成分綜合得分一致（均為0.196），說明在主成分分析方面具有相似性，且靈敏度高，質(zhì)譜檢測器相對較好。

3 結(jié)論

在優(yōu)化檢測條件的基礎(chǔ)上，通過采用不同色譜柱和不同檢測器對提取液的揮發(fā)性成分進(jìn)行分離測定，對得到的指紋圖譜進(jìn)行比較優(yōu)化建立普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜的最佳條件為：索氏提取法回流17次;不分流模式對樣品進(jìn)行檢測分析;升溫程序?yàn)槌跏紲囟?0℃，保持1min，以10℃/min升至280℃并保持5min;123-1031-JW·DB-1色譜柱分離;質(zhì)譜檢測器檢測;建立了普洱茶揮發(fā)性成分指紋圖譜分析方法。

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作者簡介：

吳娜（1985- ），女，彝族，講師，碩士，從事中藥材與食品中農(nóng)藥殘留檢測分析及中藥材指紋圖譜分析。

通信作者：

楊新周（1986- ），男，碩士，副教授，研究方向?yàn)槊褡逅幬锛胺蛛x分析化學(xué)研究。

基金項(xiàng)目：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃青年項(xiàng)目（2018FD099）;國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（21366011）。