黔產(chǎn)紅土茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

周和 楊蘭 譚翔勻

【摘 要】 目的：建立黔產(chǎn)紅土茯苓藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：對(duì)不同產(chǎn)地黔產(chǎn)紅土茯苓藥材進(jìn)行性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜鑒別;參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則方法對(duì)黔產(chǎn)紅土茯苓藥材水分、總灰分、浸出物進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離好，專屬性強(qiáng)，無干擾;初步規(guī)定黔產(chǎn)紅土茯苓藥材水分不得過15.0%，總灰分不得過5.0%，水溶性浸出物含量不得少于8.0%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠，能夠?yàn)榍a(chǎn)紅土茯苓藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的參考。

【關(guān)鍵詞】 紅土茯苓;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);薄層色譜

【中圖分類號(hào)】R282.5 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）7-0031-03

Abstract：Objective To establish the preliminary quality standard for Smilax china L.in Guizhou province.Methods Trait identification， microscopic identification and thin-layer chromatography（TLC） were used for qualitative identification of samples.According to the approaches listed in Chinese Pharmacopoeia published in 2015， some testing items including the moisture content， total ash and extract were established.Results TLC spots were clear， well-separated without interference and had a strong specificity.The moisture and total ash of samples were no more than 15.0%， 5.0%， respectively; The water-soluble extractives were no less than 8.0%.Conclusion The quality standard is simple， reliable and can provide some experimental data for the quality evaluation of？ Smilax china L.in Guizhou province.

Keywords：Smilax china L.; Quality standard; TLC

紅土茯苓為百合科植物菝葜Smilax china L.的干燥根莖。夏、秋二季采挖，除去須根，洗凈，個(gè)小、均勻的，曬干;個(gè)大、均勻的，趁鮮切成薄片，干燥。根據(jù)《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、《貴州中草藥資源研究》和《貴州植物志》記載[1-3]，確定名稱為“紅土茯苓”。目前，紅土茯苓在貴州省作為少數(shù)民族藥材品種，民間中醫(yī)、民族地區(qū)使用廣泛。具有祛風(fēng)利濕、解毒消腫、通利關(guān)節(jié)的作用，主要用于風(fēng)濕痹痛、筋骨疼痛、淋濁、帶下、泄瀉、痢疾、瘡毒、疥癬、燒燙傷。文獻(xiàn)報(bào)道該植物中含有菝葜素（smilaxin），齊墩果酸（oleanolic acid），山柰素（kaempferide），薯蕷皂甙（dioscin），纖細(xì)薯蕷皂甙（gracillin）等[4-5]。由于原有紅土茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不完善，已不能滿足中醫(yī)中藥現(xiàn)代化發(fā)展的要求，因此該藥材被列為《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》提升品種進(jìn)行研究?；诖?，本研究組對(duì)紅土茯苓藥材的性狀、顯微、薄層進(jìn)行鑒定[6-9]，對(duì)水分、總灰分、水溶性浸出物進(jìn)行含量測(cè)定，并確定了檢查限度[10]。建立的紅土茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供一定的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 光學(xué)生物顯微鏡（德國(guó)徠卡儀器公司，型號(hào)：DM2500）;圖像分析系統(tǒng)（德國(guó)徠卡儀器公司，型號(hào)：DFC500），高速萬能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司，型號(hào)：FW80），梅特勒電子天平（梅特勒-托利多有限公司，型號(hào)：MS204-TS）。以及常規(guī)顯微制片的刀片、載玻片、蓋玻片、鑷子、水合氯醛、間苯三酚、濃鹽酸、稀甘油等。

1.2 藥物與試劑 紅土茯苓原植物及樣品均由遵義市食品藥品檢驗(yàn)所提供，分別采集于貴州各地，詳見表1。經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥實(shí)驗(yàn)室的孫慶文教授鑒定為百合科植物菝葜Smilax china L.的干燥根莖，憑證標(biāo)本存放于遵義市食品藥品檢驗(yàn)所。薯蕷皂苷元（購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111539-200001），環(huán)己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、無水乙醇、甲醇均為分析純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)分別為：20160715、20170509、20170302、20180312、20180617），硅膠G板（青島海洋化工廠有限公司，批號(hào)20170818）。

2 方法與結(jié)果

2.1 原植物鑒別 紅土茯苓為攀援灌木植物;耐旱、喜光，稍耐陰，耐瘠薄，生長(zhǎng)力極強(qiáng)。生于海拔2000 m以下的林下灌木叢中、路旁、河谷或山坡上。根狀莖粗厚，堅(jiān)硬，為不規(guī)則的塊狀，粗2～3 cm。莖長(zhǎng)1～3 m，少數(shù)可達(dá)5 m，疏生刺。葉薄革質(zhì)或堅(jiān)紙質(zhì)，干燥后通常紅褐色或近古銅色，圓形、卵形或其他形狀，長(zhǎng)3～10 cm，寬1.5～10 cm，下面通常淡綠色，較少蒼白色;葉柄長(zhǎng)5～15 mm，約占全長(zhǎng)的1/2～2/3，一側(cè)具寬0.5～1 mm的鞘，幾乎都有卷須，少有例外，脫落點(diǎn)位于靠近卷須處。傘形花序生于葉尚幼嫩的小枝上，具十幾朵或更多的花，常呈球形;總花梗長(zhǎng)1～2 cm;花序托稍膨大，近球形，較少稍延長(zhǎng)，具小苞片;花綠黃色，外花被片長(zhǎng)3.5～4.5 mm，寬1.5～2 mm，內(nèi)花被片稍狹;雄花中花藥比花絲稍寬，常彎曲;雌花與雄花大小相似，有6枚退化雄蕊。漿果直徑6～15 mm，熟時(shí)紅色，有粉霜。該種果實(shí)有兩種類型，一為直徑12～15 mm，干后果皮較易破裂，一為直徑7～8 mm，干后果皮不易破裂。花期2～5月，果期9～11月。

2.2 藥材性狀鑒別 藥材呈不規(guī)則彎曲扁圓柱形，有結(jié)節(jié)狀隆起，長(zhǎng)2～8 cm，直徑1～3 cm。表面黃棕色或紫棕色，凹凸不平，具有圓錐狀突起的莖基痕，并殘留堅(jiān)硬的刺狀須根殘基或細(xì)根，有的外表皮可見不規(guī)則裂紋。質(zhì)堅(jiān)硬，難折斷，切面呈棕黃色或紅棕色，纖維性。切片厚4～6 mm，直徑3～6 cm，外表面黃棕色或紫棕色，可見殘留刺狀須根殘基或細(xì)根。切面棕黃色或紅棕色，纖維性，可見點(diǎn)狀維管束。質(zhì)硬，折斷時(shí)有粉末飛揚(yáng)。氣微，味微苦、澀。

2.3 顯微鑒別 粉末呈紅棕色，淀粉粒多為單粒，類圓形，直徑5～30 μm，臍點(diǎn)不明顯，少數(shù)可見裂縫狀或人字狀，復(fù)粉粒較少，由2～4分粒組成。石細(xì)胞成群或單個(gè)散落，淡黃色或紅棕色，呈類圓形、長(zhǎng)橢圓形、類方形或不規(guī)則形狀，具明顯分枝狀孔溝，胞腔中含紅棕色物。孔紋或梯紋導(dǎo)管，偶見螺紋。如圖1所示。

2.4 薄層鑒別 根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研紅土茯苓所含成分，現(xiàn)以薯蕷皂苷元作為對(duì)照品對(duì)其進(jìn)行薄層鑒別。分別取各不同產(chǎn)地的紅土茯苓藥材粉末約5.0 g，依次加乙醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加鹽酸5 mL，加熱回流2 h，放冷，用40% 氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，蒸至無醇味，殘?jiān)訜崴?0 mL使溶解，用二氯甲烷振搖提取2次（40 mL、30 mL），合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取薯蕷皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則 0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（2∶ 1）為展開劑 ，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖2所示。

2.5 檢查

2.5.1 水分測(cè)定 按水分測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015年版通則0832第二法測(cè)定，10批紅土茯苓藥材水分測(cè)定結(jié)果在10.08 %～12.54 %之間，平均值11.30 %，測(cè)定結(jié)果詳見表2，暫定水分不得過15.0 %。

2.5.2 總灰測(cè)定分 按灰分測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015年版（通則2302）測(cè)定，10批紅土茯苓藥材測(cè)定結(jié)果在1.63 %～2.82 %之間，平均值2.13%，測(cè)定結(jié)果詳見表2，暫定總灰分不得過5.0 %。

2.6 水溶性浸出物含量測(cè)定 按浸出物測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015版（通則2201）冷浸法，依次測(cè)定了10批樣品，樣品測(cè)定結(jié)果在9.06 %～10.34 %之間，平均值9.54 %，測(cè)定結(jié)果見表2。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，暫定水溶性浸出物標(biāo)準(zhǔn)不得少于8.0 %。

3 討論

紅土茯苓為貴州省常用民族藥材，本研究對(duì)不同產(chǎn)地的黔產(chǎn)紅土茯苓藥材性狀特征、顯微特征進(jìn)行了歸納總結(jié)。探索了TLC條件，分別以環(huán)己烷-乙酸乙酯（4∶ 1）、環(huán)己烷-乙酸乙酯（3∶ 1）、環(huán)己烷-乙酸乙酯（2∶ 1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。其中環(huán)己烷-乙酸乙酯（2∶ 1）為展開劑的薄層色譜圖斑點(diǎn)清晰明顯、無干擾、專屬性強(qiáng)，并按照國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則實(shí)施細(xì)則》的相關(guān)要求進(jìn)行方法學(xué)耐用性考察，重現(xiàn)性好。分別用乙醇、稀乙醇、水作溶劑，采用冷浸法和熱浸法依次測(cè)定紅土茯苓浸出物含量。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，以水為溶劑，冷法效果最佳，初步確定浸出物限量。按《中國(guó)藥典》2015年版通則方法對(duì)水分、總灰分進(jìn)行測(cè)定，初步確定各限量標(biāo)準(zhǔn)。綜上所述，本研究采集的樣本分布廣，具有一定的代表性，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳實(shí)，準(zhǔn)確，能夠?yàn)榍a(chǎn)紅土茯苓藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的參考。筆者將繼續(xù)對(duì)該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行深入研究，后期可收錄在新版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，以規(guī)范黔產(chǎn)紅土茯苓藥材的生產(chǎn)。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-01-02 編輯：程鵬飛）