兒童急性淋巴細胞白血病中細胞周期相關(guān)因子cdt1 蛋白及mRNA 的表達情況探討

黃驥斌

（成都迪安醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司 四川 成都 610046）

cdt1 是細胞周期中DNA 復(fù)制的復(fù)制前復(fù)合物成分，對DNA的復(fù)制起到調(diào)控作用，細胞周期調(diào)節(jié)異常會影響到基因結(jié)構(gòu)和基因的異常表達，且會引起細胞惡性病變，與惡性腫瘤的發(fā)生具有密切關(guān)系，目前認為其在惡性腫瘤淋巴細胞中呈高表達狀態(tài)[1]。本次以2018 年5 月—2019 年5 月收治的兒童ALL 與健康兒童為樣本，檢測cdt1 的表達水平與兒童ALL 發(fā)生發(fā)展的關(guān)系進行探討，闡述如下。

1. 資料與方法

1.1 一般資料

將2018 年5 月—2019 年5 月首次診斷的兒童急性淋巴細胞白血病病例30 例納入研究組，將同期健康體檢兒童30 例納入對照組。研究組男女分別占比18:12, 年齡3 ～14 歲，均齡（7.25±1.58）歲，對照組男女分別占比20:10, 年齡2.5 ～13 歲，均齡（7.36±1.64）歲，兩組基線資料統(tǒng)計學(xué)對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可比。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）研究組均為初診未治的急性淋巴細胞白血病患兒；（2）通過經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批；（3）所有受檢者家長及監(jiān)護人均知曉并同意簽署協(xié)議。

1.2 方法

對象：研究組患兒治療前后及對照組，所有均抽取空腹靜脈血5ml，置于抗凝試管中，搖勻后作為檢測標(biāo)本，與PBS 液1:1稀釋，在液面上加入淋巴細胞分離液，進行離心處理（轉(zhuǎn)速為1500r/min），15min 后收集界面上的細胞，然后置入3ml、PBS 液，混合均勻后再次離心處理（轉(zhuǎn)速為1000r/min），10min 后最終所留沉淀物則為淋巴細胞[2]。

1.3 觀察指標(biāo)

采取免疫組織化學(xué)染色法對兩組的cdt1 蛋白水平進行檢測，采取ET-PCR 檢測法對cdt1 mRNA 表達水平進行檢測[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2. 結(jié)果

2.1 cdt1 蛋白水平評價

相比對照組，研究組的cdt1 蛋白表達水平較高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組cdt1 蛋白水平對比（±s）

表1 兩組cdt1 蛋白水平對比（±s）

組別 n 100 個細胞中的陽性細胞數(shù)研究組 30 15.34±4.59對照組 30 7.02.±2.47 t-8.742 P-0.000

2.2 cdt1 mRNA 表達水平評價

經(jīng)檢測顯示對照組中無cdt1 mRNA 表達，研究組cdt1 mRNA表達水平（0.51±0.36），處于高表達狀態(tài)，組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組cdt1 蛋白水平對比（±s）

表2 兩組cdt1 蛋白水平對比（±s）

組別 n 平均光密度比值研究組 30 0.51±0.36對照組 30 0 t-7.759 P-0.000

3. 討論

腫瘤是因正常組織過度增值引起，細胞周期異常調(diào)控與其發(fā)生具有一定的關(guān)系，而cdt1 中涵蓋了546 個氨基酸，對細胞周期S 期復(fù)制起到調(diào)控作用，是細胞核染色質(zhì)完整的重要保障，同時直接關(guān)系到基因結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。相關(guān)研究指出，cdt1 的表達與癌癥的發(fā)生及發(fā)展相關(guān)，呈顯著升高趨勢[4]。

本次通過抽取ALL 患兒靜脈血分離淋巴細胞，檢測細胞周期相關(guān)因子cdt1 蛋白及mRNA 的表達水平，ALL 患兒癌細胞中發(fā)生了cdt1 蛋白及mRNA 過度表達的現(xiàn)象，相比正常群體，兩者的表達水平存在明顯的差異。結(jié)果表明：相比對照組，研究組的cdt1蛋白表達水平較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；同時經(jīng)檢測顯示對照組中無cdt1 mRNA 表達，研究組cdt1 mRNA 表達水平（0.51±0.36），處于高表達狀態(tài)，組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示細胞的異常增長與cdt1 表達水平存在相關(guān)性，因cdt1 的高表達會對血細胞造成促進其異常增生，且發(fā)生惡性病變，進而產(chǎn)生白血病細胞，誘導(dǎo)疾病發(fā)生及發(fā)展。同時可看出cdt1 及mRNA 的表達不一致，可能與蛋白代謝及細胞周期相關(guān)[5]。

兒童急性淋巴細胞白血病與cdt1 表達水平具有相關(guān)性，對臨床診療工作的開展提供有效的參考，因此加強對cdt1 發(fā)生機制的研究具有顯著的臨床價值。