Angpt2/Angpt1比值與腦梗死病人神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后的關(guān)系探討

廖健妮，羅 薇，嚴(yán)文靜

腦梗死又稱為缺血性腦卒中，是由于局部腦組織缺血出現(xiàn)缺氧、組織壞死等，且急性腦梗死發(fā)病率及致殘率逐年升高，嚴(yán)重影響病人生活及工作[1]。既往研究表明，腦梗死病人腦缺血引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致自由基生成量增加進(jìn)而引起腦損害[2]，故應(yīng)及早治療腦梗死并降低致殘率以改善病人預(yù)后。有研究表明，血管生成素1(angiopoietin-1，Angpt1)屬于血管生成素家族，主要作用是維持血管穩(wěn)定性[3]。血管生成素2(angiopoietin-2，Angpt2)是Angpt1的酪氨酸激酶受體2(Tie2)受體拮抗劑，有研究表明Angpt2參與感染性休克、心臟血管疾病及急性心肌梗死等多種病理生理過(guò)程并發(fā)揮促炎作用[4]。相關(guān)研究表明，心血管疾病病人新血管生成過(guò)程中Angpt1與Angpt2均發(fā)揮重要作用，Angpt1/Angpt2比值可反映病人體內(nèi)血管穩(wěn)定性[5]。關(guān)于Angpt1/Angpt2比值與腦梗死病人的相關(guān)性研究較少，因此本研究探討Angpt1/Angpt2比值與腦梗死病人神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后的關(guān)系，為提高臨床療效及改善預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年7月—2018年7月我院收治的108例急性腦梗死病人為腦梗死組，所有病人均符合急性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且均經(jīng)頭顱CT或磁共振成像確診。根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS)評(píng)估腦梗死組神經(jīng)功能缺損程度，NIHSS評(píng)分1～15分為輕度組(33例)，NIHSS評(píng)分16～30分為中度組(40例)，NIHSS評(píng)分31～45分為重度組(35例)[7]。同時(shí)以我院門診健康體檢者78名為對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者或家屬均知情且簽署同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：急性腦梗死病人均為首次發(fā)??；所有病人均于發(fā)病48 h內(nèi)入院；病人未接受抗血小板、抗凝、溶栓等治療；對(duì)照組體檢報(bào)告顯示正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：外傷導(dǎo)致的腦梗死病人；心、肝、腎等功能嚴(yán)重?fù)p傷；伴有凝血功能障礙；存在顱內(nèi)腦出血或存在占位性疾?。痪窦膊〔∪?。

1.2 研究方法

1.2.1 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)血清Angpt1、Angpt2表達(dá)水平 所有研究對(duì)象均于入組后抽取空腹靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用SV Total RNA Isolation System Kit試劑盒(美國(guó)Promega公司)提取總RNA，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)提取RNA的濃度及純度。根據(jù)RR036A Takara PrimeScriptTMRT Master Mix (Perfect Real Time)試劑盒(北京麥瑞博生物科技有限公司)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。通過(guò)Primer軟件設(shè)計(jì)Angpt1、Angpt2引物，Angpt1正向引物序列為5′-TGCACTAA AGAAGGTGTTTTGCT-3′，反向引物序列為5′-CCGGTGTTGTATTACTGTCCAA-3′；Angpt2正向引物序列為5′-CCTCGACTACGACGACTCAGT-3′，反向引物序列為5′-TCTGCACCAC ATTCTGTTGGA-3′；β-actin正向引物序列為5′-TGCCATCCTAAAAGCCAC-3′，反向引物序列為5′-TCAACTGGTCTCAAGTCAGTG-3′，引物均由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成。按照SYBR Green PCR試劑盒(德國(guó)QIAGEN公司)進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，體系20 μL：SYBR Premix Ex Taq TM混合液10 μL，cDNA模板(稀釋20倍) 2 μL，正反向游引物各1 μL，ddH2O 6 μL。反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共42個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt相對(duì)定量法計(jì)算Angpt1、Angpt2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量并計(jì)算Angpt2/Angpt1比值。其中7500型ABI實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司；SMA2000超微量紫外分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司。

1.2.2 腦梗死病人預(yù)后評(píng)估 所有急性腦梗死病人出院3個(gè)月后均采用改良Rankin量表(Modified Rankin Scale，mRS)評(píng)定預(yù)后情況，mRS評(píng)分為≤2分為預(yù)后良好，>2分為預(yù)后不良[8]。本研究中急性腦梗死病人中預(yù)后良好86例(預(yù)后不良組)和預(yù)后不良22例(預(yù)后良好組)。

1.2.3 觀察指標(biāo) 所有研究對(duì)象均于入組后抽取空腹靜脈血5 mL，應(yīng)用日立7170A型全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)檢測(cè)三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)，并記錄急性腦梗死病人NIHSS評(píng)分。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床資料比較(見(jiàn)表1)

表1 兩組臨床資料比較

2.2 不同組別Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評(píng)分比較 與對(duì)照組比較，腦梗死組及不同神經(jīng)功能缺損程度病人血清Angpt2表達(dá)水平、Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評(píng)分均升高(P<0.05)，且重度組與中度組高于輕度組(P<0.05)，重度組高于中度組(P<0.05)。與對(duì)照組比較，腦梗死組病人及不同神經(jīng)功能缺損程度病人血清Angpt1水平降低(P<0.05)，且重度組與中度組低于輕度組(P<0.05)，重度組低于中度組(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 不同組別Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評(píng)分比較(±s)

2.3 腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評(píng)分的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示：Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.463，P=0.000)，詳見(jiàn)圖1。

圖1 腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值與NIHSS 評(píng)分相關(guān)性分析的散點(diǎn)圖

2.4 影響腦梗死病人預(yù)后的單因素分析 根據(jù)mRS評(píng)分將腦梗死病人預(yù)后分為預(yù)后良好組(86例)與預(yù)后不良組(22例)，其中預(yù)后良好組mRS評(píng)分為(1.26±0.41)分，預(yù)后不良組為(4.85±1.55)分，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-19.227，P=0.000)。將影響腦梗死病人預(yù)后的因素進(jìn)行單因素分析，結(jié)果顯示：預(yù)后不良組年齡、收縮壓、NIHSS評(píng)分、Angpt2/Angpt1比值均高于預(yù)后良好組(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 影響腦梗死病人預(yù)后的單因素分析

2.5 影響腦梗死病人預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 Logistic多元回歸分析結(jié)果顯示：年齡、NIHSS評(píng)分、Angpt2/Angpt1比值均為影響腦梗死病人預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。詳見(jiàn)表4。

表4 影響腦梗死病人預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

腦梗死病人腦細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)等炎性因子并引發(fā)有害的神經(jīng)毒性反應(yīng)。有研究顯示，機(jī)體炎癥反應(yīng)和腦梗死發(fā)生及發(fā)展過(guò)程與神經(jīng)功能缺損程度密切相關(guān)[9]。炎性因子釋放進(jìn)一步加重病體內(nèi)炎癥反應(yīng)，增加血管通透性，導(dǎo)致神經(jīng)功能惡化[10]。早期采取干預(yù)措施可有效改善腦梗死病人預(yù)后，因此，尋找簡(jiǎn)便有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)對(duì)提高療效及改善病人預(yù)后具有重要意義。

血管生成素作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞且具有特異性，其中Angpt1可維持并保護(hù)血管內(nèi)皮穩(wěn)定，而Angpt2破壞血管穩(wěn)定并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，與Angpt1之間存在拮抗作用[11]。Angpt1通過(guò)分泌糖蛋白促使內(nèi)皮細(xì)胞酪氨酸磷酸化在血管發(fā)育及生成過(guò)程中發(fā)揮重要作用；Angpt2屬于分泌型細(xì)胞因子并特異性作用于Tie-2，可抑制Angpt1對(duì)血管的保護(hù)作用，并促使血管結(jié)構(gòu)松解進(jìn)而促進(jìn)血管形成，增加內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)敏感性，促進(jìn)血管新生[12-13]。有研究表明，VEGF可上調(diào)Angpt2表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)血管增生[14-15]。相關(guān)研究表明，Angpt2具有促血管生成與致炎雙重作用，并可作為判斷疾病進(jìn)展及預(yù)后的新型標(biāo)志物[16]。有研究顯示，黃體血管結(jié)構(gòu)變化與Angpt2/Angpt1比值有關(guān)，早期與發(fā)展期黃體血管新生Angpt2/Angpt1比值升高，中、晚期血管內(nèi)皮細(xì)胞退化Angpt2/Angpt1比值降低[17]。

本研究按照神經(jīng)功能缺損程度將腦梗死病人分為輕度組、中度組與重度組，結(jié)果顯示腦梗死組病人及不同神經(jīng)功能缺損程度病人血清Angpt2表達(dá)水平、Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評(píng)分均高于對(duì)照組，且重度組高于輕度組、中度組；血清Angpt1水平降低，重度組低于輕度組、中度組，說(shuō)明Angpt1、Angpt2參與腦梗死發(fā)生過(guò)程，Angpt2/Angpt1比值隨著腦梗死病人神經(jīng)功能缺損程度加重明顯升高。進(jìn)一步分析腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評(píng)分關(guān)系，結(jié)果顯示Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評(píng)分呈正相關(guān)，提示Angpt2/Angpt1比值可反映腦梗死病人神經(jīng)功能缺損程度。

腦梗死病人血壓升高損害血管內(nèi)皮功能并加重血管炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致病人預(yù)后差[18]。高NIHSS評(píng)分是腦梗死病人預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，病人神經(jīng)功能缺損程度升高可增加預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)[19]。本研究根據(jù)mRS評(píng)分將腦梗死病人分為預(yù)后良好組與預(yù)后不良組，分析影響腦梗死病人預(yù)后的相關(guān)因素，結(jié)果顯示預(yù)后不良組mRS評(píng)分高于預(yù)后良好組；隨著腦梗死病人年齡增加、收縮壓、NIHSS評(píng)分及Angpt2/Angpt1比值升高病人預(yù)后越差。本研究采用Logistic多因素回歸分析腦梗死病人預(yù)后的影響因素，結(jié)果顯示年齡、NIHSS評(píng)分、Angpt2/Angpt1比值均為影響腦梗死病人預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示年齡、NIHSS評(píng)分、Angpt2/Angpt1比值與腦梗死病人預(yù)后有關(guān)，可用于判斷病人預(yù)后。

綜上所述，腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值升高，且與神經(jīng)功能缺損程度有關(guān)，Angpt2/Angpt1比值越高病人預(yù)后越差，監(jiān)測(cè)Angpt2/Angpt1比值變化有助于判斷腦梗死病人病情進(jìn)展及預(yù)后。本研究存在不足：關(guān)于Angpt2與Angpt1及Angpt2/Angpt1比值在腦梗死疾病進(jìn)展及神經(jīng)功能缺損中的具體調(diào)控作用機(jī)制有待深入研究。