羅春梅,劉愛民
(楚雄技師學(xué)院,云南楚雄675000)
仙茅是重要的具有彝族地方特色的藥用植物,是國(guó)家“十五”科技攻關(guān)課題《藥材規(guī)范化種植技術(shù)指導(dǎo)中心建設(shè)》中的藥材。仙茅為石蒜科多年生草本植物仙茅的根莖,藥用歷史悠久,歷代文獻(xiàn)均有記載。目前尚未形成規(guī)模種植,主要依靠野生資源,因無(wú)序采挖,大量資源瀕臨枯竭,藥材供不應(yīng)求,價(jià)格高 (市場(chǎng)收購(gòu)價(jià)每千克20~25元),市場(chǎng)需求量大。開展仙茅組織培養(yǎng)技術(shù)研究,既可以保護(hù)仙茅的野生資源量,又可為仙茅的大規(guī)模種植提供大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗,實(shí)現(xiàn)仙茅資源的合理開發(fā)利用,使其為天然藥物產(chǎn)業(yè)發(fā)揮最大的經(jīng)濟(jì)效益。
為經(jīng)過(guò)1-2年人工種植的仙茅,來(lái)自楚雄州農(nóng)業(yè)學(xué)校的藥園。培養(yǎng)基為瓊脂0.9%,蔗糖3%。滅菌前pH值5.8~6.8,滅菌溫度121℃,培養(yǎng)溫度(20±2)℃,每天光照時(shí)間14 h。
1.2.1 不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織
仙茅葉基部為外植體,經(jīng)清洗消毒后,分別接種于BA/NAA不同激素配比的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)外植體形成愈傷組織。設(shè)BA濃度分別為0.5 mg/L、1.5 mg/L、2.5 mg/L、3.5 mg/L,NAA濃度分別為1.0 mg/L、2.0 mg/L,共8個(gè)處理。
培養(yǎng)基均以MS為基本培養(yǎng)基,加活性炭2 mg/L,每個(gè)處理接種5瓶,每瓶接種4塊,每個(gè)處理20塊外植體,培養(yǎng)30 d時(shí)觀察。
1.2.2 不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織分化不定芽
將仙茅的愈傷組織切割成同等大小,分別接種在BA/NAA、KT/IBA4種不同配比的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)愈傷組織分化成不定芽。設(shè)BA濃度分別為3.0 mg/L、5.0 mg/L,NAA濃度分別為0.5 mg/L、1.5 mg/L,共2個(gè)組合,KT濃度分別為3.0 mg/L、5.0 mg/L,IBA濃度分別為0.5 mg/L、1.5 mg/L,共2個(gè)組合。
培養(yǎng)基均以MS為基本培養(yǎng)基,加活性炭2 mg/L,每個(gè)處理接種5瓶,每瓶接種4塊,每個(gè)處理20塊外植體,培養(yǎng)30 d時(shí)觀察。
由表1知,仙茅的葉基部在BA濃度為1.5~3.5 mg/L,均能誘導(dǎo)出愈傷組織,隨著BA和NAA濃度的增加,愈傷組織誘導(dǎo)率也隨之升高,出愈時(shí)間顯著提前。當(dāng)細(xì)胞分裂素BA濃度達(dá)3.5 mg/L時(shí),生長(zhǎng)素濃度增大對(duì)愈傷組織形成有積極作用,以MS+ BA3.5 mg/L+ NAA 2.0 mg/L+活性炭2 mg/L培養(yǎng)基誘導(dǎo)率達(dá)80%,出愈量最大。
表1 不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織形成比較(活性炭2 mg/L+MS培養(yǎng)基)
表2 不同激素配比誘導(dǎo)不定芽比較(活性炭2mg/L+MS培養(yǎng)基)
由表2知,BA/NAA、KT/IBA4種激素配比均能使仙茅的愈傷組織分化出不定芽,分化率100%,其中以MS+ BA5 mg/L+ NAA 1.5 mg/L+活性炭2 mg/L的培養(yǎng)基誘導(dǎo)出芽時(shí)間最早,苗色濃綠,長(zhǎng)勢(shì)最快。
試驗(yàn)得出,誘導(dǎo)仙茅愈傷組織最佳培養(yǎng)基為MS+ BA3.5 mg/L+ NAA 2.0 mg/L+活性炭2mg/L;不定芽分化最佳培養(yǎng)基為MS+ BA5 mg/L+ NAA 1.5 mg/L +活性炭2 mg/L。
在植物組織培養(yǎng)中,細(xì)胞分裂素KT、BA具有促進(jìn)芽生長(zhǎng)的作用,生長(zhǎng)素NAA、IBA具有促進(jìn)根生長(zhǎng)的作用,細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比值高低對(duì)外植體的發(fā)展方向起著決定性作用。
在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),使用BA與KT誘導(dǎo)仙茅葉基部愈傷組織分化不定芽,仙茅對(duì)2種細(xì)胞分裂素的敏感程度差異不明顯,均能100%分化形成不定芽,只是BA更有利于促進(jìn)葉綠素的合成,苗色更濃綠。