誘導(dǎo)仙茅產(chǎn)生愈傷組織及不定芽的研究

羅春梅，劉愛民

（楚雄技師學(xué)院，云南楚雄675000）

仙茅是重要的具有彝族地方特色的藥用植物，是國(guó)家“十五”科技攻關(guān)課題《藥材規(guī)范化種植技術(shù)指導(dǎo)中心建設(shè)》中的藥材。仙茅為石蒜科多年生草本植物仙茅的根莖，藥用歷史悠久，歷代文獻(xiàn)均有記載。目前尚未形成規(guī)模種植，主要依靠野生資源，因無(wú)序采挖，大量資源瀕臨枯竭，藥材供不應(yīng)求，價(jià)格高 （市場(chǎng)收購(gòu)價(jià)每千克20～25元），市場(chǎng)需求量大。開展仙茅組織培養(yǎng)技術(shù)研究，既可以保護(hù)仙茅的野生資源量，又可為仙茅的大規(guī)模種植提供大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，實(shí)現(xiàn)仙茅資源的合理開發(fā)利用，使其為天然藥物產(chǎn)業(yè)發(fā)揮最大的經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 供試材料

為經(jīng)過(guò)1-2年人工種植的仙茅，來(lái)自楚雄州農(nóng)業(yè)學(xué)校的藥園。培養(yǎng)基為瓊脂0.9%，蔗糖3%。滅菌前pH值5.8～6.8，滅菌溫度121℃，培養(yǎng)溫度（20±2）℃，每天光照時(shí)間14 h。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織

仙茅葉基部為外植體，經(jīng)清洗消毒后，分別接種于BA/NAA不同激素配比的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)外植體形成愈傷組織。設(shè)BA濃度分別為0.5 mg/L、1.5 mg/L、2.5 mg/L、3.5 mg/L，NAA濃度分別為1.0 mg/L、2.0 mg/L，共8個(gè)處理。

培養(yǎng)基均以MS為基本培養(yǎng)基，加活性炭2 mg/L，每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接種4塊，每個(gè)處理20塊外植體，培養(yǎng)30 d時(shí)觀察。

1.2.2 不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織分化不定芽

將仙茅的愈傷組織切割成同等大小，分別接種在BA/NAA、KT/IBA4種不同配比的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)愈傷組織分化成不定芽。設(shè)BA濃度分別為3.0 mg/L、5.0 mg/L，NAA濃度分別為0.5 mg/L、1.5 mg/L，共2個(gè)組合，KT濃度分別為3.0 mg/L、5.0 mg/L，IBA濃度分別為0.5 mg/L、1.5 mg/L，共2個(gè)組合。

培養(yǎng)基均以MS為基本培養(yǎng)基，加活性炭2 mg/L，每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接種4塊，每個(gè)處理20塊外植體，培養(yǎng)30 d時(shí)觀察。

2 .結(jié)果與分析

2.1 BA/NAA不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織形成的影響

由表1知，仙茅的葉基部在BA濃度為1.5～3.5 mg/L，均能誘導(dǎo)出愈傷組織，隨著BA和NAA濃度的增加，愈傷組織誘導(dǎo)率也隨之升高，出愈時(shí)間顯著提前。當(dāng)細(xì)胞分裂素BA濃度達(dá)3.5 mg/L時(shí)，生長(zhǎng)素濃度增大對(duì)愈傷組織形成有積極作用，以MS+ BA3.5 mg/L+ NAA 2.0 mg/L+活性炭2 mg/L培養(yǎng)基誘導(dǎo)率達(dá)80%，出愈量最大。

表1 不同激素配比誘導(dǎo)愈傷組織形成比較（活性炭2 mg/L+MS培養(yǎng)基）

表2 不同激素配比誘導(dǎo)不定芽比較（活性炭2mg/L+MS培養(yǎng)基）

2.2 BA/NAA、KT/IBA不同激素配比形成不定芽的影響

由表2知，BA/NAA、KT/IBA4種激素配比均能使仙茅的愈傷組織分化出不定芽，分化率100%，其中以MS+ BA5 mg/L+ NAA 1.5 mg/L+活性炭2 mg/L的培養(yǎng)基誘導(dǎo)出芽時(shí)間最早，苗色濃綠，長(zhǎng)勢(shì)最快。

3 結(jié) 論

試驗(yàn)得出，誘導(dǎo)仙茅愈傷組織最佳培養(yǎng)基為MS+ BA3.5 mg/L+ NAA 2.0 mg/L+活性炭2mg/L;不定芽分化最佳培養(yǎng)基為MS+ BA5 mg/L+ NAA 1.5 mg/L +活性炭2 mg/L。

在植物組織培養(yǎng)中，細(xì)胞分裂素KT、BA具有促進(jìn)芽生長(zhǎng)的作用，生長(zhǎng)素NAA、IBA具有促進(jìn)根生長(zhǎng)的作用，細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比值高低對(duì)外植體的發(fā)展方向起著決定性作用。

在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，使用BA與KT誘導(dǎo)仙茅葉基部愈傷組織分化不定芽，仙茅對(duì)2種細(xì)胞分裂素的敏感程度差異不明顯，均能100%分化形成不定芽，只是BA更有利于促進(jìn)葉綠素的合成，苗色更濃綠。