固相萃取

楊芩

【摘 ?要】本文將探索一種能夠同時(shí)測(cè)定糕點(diǎn)中13種添加劑的高效液相色譜法，并對(duì)其進(jìn)行試驗(yàn)分析，最終通過(guò)試驗(yàn)表明該種方法定量準(zhǔn)確，精準(zhǔn)度較高，重現(xiàn)性較高，適用于各種糕點(diǎn)中添加的同時(shí)檢測(cè)，值得進(jìn)行普及使用。

【關(guān)鍵詞】液相色譜法;糕點(diǎn);添加劑;檢驗(yàn)檢測(cè)

為確保糕點(diǎn)的口感以及延長(zhǎng)保質(zhì)期，很多商家都會(huì)在制造糕點(diǎn)時(shí)加入一些添加劑。但結(jié)合現(xiàn)有研究成果來(lái)看，部分添加劑在超量食用后會(huì)出現(xiàn)毒性作用，為確保人們的人身安全，需要對(duì)糕點(diǎn)中添加劑加入含量進(jìn)行檢測(cè)確定。為此，本文將對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化，達(dá)成同時(shí)測(cè)定糕點(diǎn)中7種人工合成色素，5種防腐劑，1種甜味劑的效果。

1. 研究目的

糕點(diǎn)作為人們喜愛(ài)的一種食品，其在制作過(guò)程中主要由面粉、雞蛋、糖、乳制品、油脂等食材為主要原材料，再輔以各種輔料、餡料、調(diào)味品，最終通過(guò)糕點(diǎn)制作工藝制作而成。在實(shí)際制作過(guò)程中，為能夠有效確保糕點(diǎn)的食用口感和保質(zhì)期，商家往往會(huì)在糕點(diǎn)中加入一些食品添加劑。然而結(jié)合實(shí)際情況來(lái)看，部分食品添加劑在一同使用過(guò)程中將可能會(huì)產(chǎn)生毒性作用，例如糖精鈉、檸檬黃在同苯甲酸鈉一同使用過(guò)程中，將會(huì)聯(lián)合作用與L-929細(xì)胞，進(jìn)而表現(xiàn)出毒性作用。因此，在《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)食品制作中添加劑的加入量有著明確限量規(guī)定。

現(xiàn)如今，國(guó)內(nèi)外常用的食品添加劑檢測(cè)方法有高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、離子色譜法、氣相色譜法等。然而結(jié)合實(shí)際應(yīng)用情況來(lái)看，不同的食品添加劑檢測(cè)方法有著不同的限制，例如液相色譜-質(zhì)譜法所采用的檢測(cè)儀器較為昂貴，且樣品的基質(zhì)將會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果有著較大影響;離子色譜法對(duì)樣品的檢測(cè)前處理要求比較高，且對(duì)諸如檸檬黃、誘惑紅等常用人工合成色素的前處理較為困難，防腐劑、甜味劑等常用食品添加劑的前處理方法略有不同等，極大加大離子色譜法的檢測(cè)難度，降低檢測(cè)精準(zhǔn)性和有效性。

基于以上情況來(lái)看，探索尋找一種能夠同時(shí)有效識(shí)別糕點(diǎn)中多種食品添加劑的方法將有著極為重要的現(xiàn)實(shí)意義。據(jù)此，本文將在現(xiàn)有糕點(diǎn)食品添加劑檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化完善，探尋一種可能同時(shí)測(cè)定糕點(diǎn)中食品添加劑的方法，并通過(guò)7種人工合成色素，5種防腐劑，1種甜味劑對(duì)該方法進(jìn)行試驗(yàn)分析，確定本文所提出的檢測(cè)方法的實(shí)際成效。

2. 材料與方法

2.1樣品及材料

樣品來(lái)源：楚雄州內(nèi)的5家糕點(diǎn)店以及3家超市，共計(jì)采購(gòu)8個(gè)批次。

試驗(yàn)試劑：甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙酸銨（優(yōu)級(jí)純）、亞鐵氯化鉀（分析純）、乙酸鋅（分析純）、固相萃取小柱、0.45μm濾膜。

試驗(yàn)儀器：高效液相色譜儀、低溫離心機(jī)、氮吹儀、純水機(jī)。

2.2 試驗(yàn)方法

（1）溶液制備：對(duì)照品：精密稱(chēng)取7種人工合成色素（新紅、胭脂紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅），并將其分別置入到50ml的容量瓶中，加入純水溶解稀釋至標(biāo)準(zhǔn)刻度，得到濃度分別為0.68mg/mL、0.22mg/mL、0.23mg/mL、0.44mg/mL、0.20mg/mL、0.63mg/mL、0.19mg/mL的對(duì)照品溶液;精密稱(chēng)取4種防腐劑（脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、那他霉素），通過(guò)甲醇溶液稀釋到標(biāo)準(zhǔn)刻度，制備得到濃度分別為0.55mg/mL、0.36mg/mL、0.23mg/mL、0.20mg/mL的對(duì)照品溶液;精密稱(chēng)取富馬酸二甲酯，并通過(guò)甲醇溶液稀釋到標(biāo)準(zhǔn)刻度，制備獲取濃度為1.03mg/mL對(duì)照品溶液;精密稱(chēng)取糖精鈉，通過(guò)甲醇溶液稀釋到標(biāo)準(zhǔn)刻度，制備得到0.24mg/mL對(duì)照品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)品：精密稱(chēng)取日落黃、新紅各0.4mL;精密稱(chēng)取亮藍(lán)、誘惑紅、靛藍(lán)、糖精鈉、胭脂紅、那他霉素、山梨酸各1.0mL;精密稱(chēng)取赤蘚紅0.7mL、脫氧乙酸0.5mL、苯甲酸0.03mL、富馬酸二甲酯0.25mL。隨后取容量為25mL的容量瓶，將所有食品添加劑置入到同一容量瓶中搖勻，并加水稀釋至標(biāo)準(zhǔn)刻度線。

標(biāo)準(zhǔn)線配置：分別取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL，并將該些標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別置入到容量為5mL的容量瓶中，加水稀釋至標(biāo)準(zhǔn)刻度線，搖勻后將5瓶標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別命名為標(biāo)準(zhǔn)線1-5，而標(biāo)準(zhǔn)線6則是直接取用標(biāo)準(zhǔn)品溶液5mL進(jìn)行使用。

（2）樣品制備：在所采購(gòu)的糕點(diǎn)樣品中各稱(chēng)取約2.5g置入到50mL離心管中，分別加入25mL純水、5mL濃度為106g/L亞鐵氯化鉀溶液以及5mL濃度為219g/L的乙酸鋅溶液，渦旋后加水至標(biāo)準(zhǔn)刻度，經(jīng)過(guò)10min冷凍離心后取出，取5mL上清液過(guò)固相萃取小柱，除去流出液，依次用6mL濃度為2%的甲酸和6mL的純水進(jìn)行清洗，再通過(guò)濃度為5%的氨化甲醇洗脫，收集后置于15mL離心管中，通過(guò)水溫為40℃的溫水進(jìn)行水浴，氮吹至臨近干燥后取出在室溫環(huán)境下靜置，然后通過(guò)純水進(jìn)行溶解，使用0.45μm濾膜過(guò)濾后待用。

（3） 色譜分析條件：安捷倫HC-C18液相色譜柱（型號(hào)：4.6×250mm，5um），以甲醇作為流動(dòng)相A，以0.02mol/L乙酸銨溶液為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫方式，具體情況如表1所示，使用二極管陣列檢測(cè)器，光譜范圍190-700nm;光譜步進(jìn)值2.0nm，采取光譜采集模式。以保留時(shí)間及光譜圖定性，在230nm和625nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，峰面積外標(biāo)法定量。

3. 結(jié)果與討論

3.1 樣品前處理優(yōu)化

（1） 蛋白沉淀劑的選擇：在對(duì)食品添加劑進(jìn)行前處理時(shí)，不同類(lèi)型的食品添加劑的前處理方法也不僅相同。結(jié)合糕點(diǎn)的實(shí)際基質(zhì)情況，在試驗(yàn)過(guò)程中最終選用水系蛋白沉淀劑作為食品添加劑的前處理溶液，即分別選用亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液作為本試驗(yàn)的蛋白沉淀劑用于對(duì)食品添加劑的前處理。之所以?xún)深?lèi)溶液能夠?qū)Ω恻c(diǎn)中食品添加劑進(jìn)行前處理，主要是因?yàn)閮深?lèi)溶液均屬于中性鹽，而中性鹽可以有效影響蛋白質(zhì)的溶解度，產(chǎn)生鹽析反應(yīng)。在反應(yīng)過(guò)程中，亞鐵氰化鉀和乙酸鋅反應(yīng)后將會(huì)產(chǎn)生氰亞鐵酸鋅，反應(yīng)物在沉淀過(guò)程中將會(huì)裹挾、吸附干擾物質(zhì)，再加中性鹽的除蛋白能力以及高濃度鹽離子的水化能力，最終可以達(dá)成將蛋白質(zhì)分支的水化層奪取的效果。不過(guò)鑒于不同蛋白質(zhì)分子顆粒的實(shí)際大小也會(huì)存在一定的區(qū)別，使得前處理過(guò)程中所需要的鹽濃度也存在一定的差異性，在經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)分析后，最終將濃度為106g/L亞鐵氰化鉀溶液和濃度為219g/L的乙酸鋅溶液作為本試驗(yàn)的蛋白沉淀劑。

由表2可知，在三類(lèi)固相萃取小柱中，WAX的回收率最高，對(duì)本試驗(yàn)中的13種食品添加的富集效果較高，其次為HLB和MCX。因此，在本試驗(yàn)過(guò)程中，將會(huì)采用WAX固相萃取小柱對(duì)食品添加劑進(jìn)行富集，進(jìn)而確保試驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)性和有效性。

3.2 試驗(yàn)結(jié)果

將8個(gè)批次的糕點(diǎn)樣品按照上述過(guò)程進(jìn)行處理后測(cè)定，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)在8個(gè)批次的蛋糕樣品中，有5個(gè)批次的糕點(diǎn)樣品檢測(cè)出山梨酸;2個(gè)批次檢測(cè)出苯甲酸;1個(gè)批次同時(shí)檢測(cè)出山梨酸、靛藍(lán)、脫氫乙酸、胭脂紅、新紅，具體情況如圖1所示。在檢測(cè)出山梨酸的批次中雖然在經(jīng)過(guò)光譜測(cè)定后確定為陽(yáng)性，但其含量標(biāo)準(zhǔn)卻在我國(guó)所規(guī)定的食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)（含量≤1.0g/kg）;而檢測(cè)出苯甲酸的批次中在經(jīng)過(guò)光譜確認(rèn)后發(fā)現(xiàn)為隱性，同樣符合我國(guó)所規(guī)定的食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)（不得檢出）;至于同時(shí)檢測(cè)出多種添加劑的批次，其實(shí)際光譜確認(rèn)圖如圖2所示，其中只有山梨酸的含量在國(guó)家所規(guī)定的食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，對(duì)該批次蛋糕樣品采用常用方式進(jìn)行測(cè)定后發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果與本次試驗(yàn)所獲取的結(jié)果有著較強(qiáng)的一致性，證明本試驗(yàn)有著較高試驗(yàn)精度，值得進(jìn)行推廣使用。

4. 結(jié)論

本文將探索一種能夠同時(shí)測(cè)定糕點(diǎn)中13種添加劑的高效液相色譜法。本試驗(yàn)方法采用固相萃取小柱對(duì)樣品中可能會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成影響的蛋白質(zhì)、糖類(lèi)等機(jī)制進(jìn)行富集、消除，使用安捷倫HC-C18液相色譜柱，以甲醇作為流動(dòng)相A，以0.02mol/L乙酸銨溶液為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫方式，通過(guò)PDA檢測(cè)器進(jìn)行定性定量檢測(cè)，采用對(duì)照品光譜圖對(duì)樣品中的假陽(yáng)性樣品進(jìn)行確定，判斷樣品試驗(yàn)結(jié)果是否有檢出。最終通過(guò)試驗(yàn)表明該種方法定量準(zhǔn)確，精準(zhǔn)度較高，重現(xiàn)性較高，適用于各種糕點(diǎn)中添加劑的同時(shí)檢測(cè)，值得進(jìn)行普及使用。

參考文獻(xiàn)

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