從新型冠狀病毒疫情看生物安全三級實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)急能力及內(nèi)涵建設(shè)

蔡霞，韓文東，孫志平，錢韻，陳力，謝幼華，瞿滌,

1. 復(fù)旦大學(xué)生物安全三級實(shí)驗(yàn)室, 上海 200032; 2. 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院教育部、衛(wèi)健委、醫(yī)科院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 上海 200032

2019年12月以來多個國家陸續(xù)出現(xiàn)了新型冠狀病毒感染的肺炎疫情，我國將此類病例納入《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病，按甲類傳染病管理[1]。2020年1月30日世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)宣布這次新型冠狀病毒疫情為國際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件[2]。2020年2月11日，國際病毒分類委員會宣布將此新病毒命名為“嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)”；WHO宣布這一新疾病的名稱為“2019冠狀病毒病” (corona virus disease 2019，COVID-19)[3]。2020年3月12日WHO再次宣布COVID-19為全球大流行病(pandemic)[4]。在疫情防控中，實(shí)驗(yàn)室在患者的病原診斷以及有關(guān)藥物和疫苗的研發(fā)中發(fā)揮著不可忽視的作用。為了保證實(shí)驗(yàn)室的生物安全，國家衛(wèi)生健康委員會(簡稱衛(wèi)健委)發(fā)布了《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南(第二版)》(簡稱《指南》)[5]，將新型冠狀病毒暫時按照病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進(jìn)行管理?！吨改稀访鞔_指出：病毒培養(yǎng)、動物感染實(shí)驗(yàn)等操作應(yīng)當(dāng)在生物安全三級(biosafety level 3,BSL-3)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行；未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作以及臨床樣本的滅活等操作應(yīng)當(dāng)在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，同時采用BSL-3實(shí)驗(yàn)室的個人防護(hù)[5]。面對此次突發(fā)的SARS-CoV-2感染疫情，及時、安全地啟動并穩(wěn)定運(yùn)行BSL-3實(shí)驗(yàn)室，為科研攻關(guān)提供安全、可靠的技術(shù)平臺，是對實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急能力的考驗(yàn)。在此, 將復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室緊急啟動并保障新冠病毒研究安全進(jìn)行的體會總結(jié)如下。

1 復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室緊急啟動和日常運(yùn)行

復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室于2020年1月24日(除夕)接到上海市衛(wèi)健委及復(fù)旦大學(xué)下達(dá)的任務(wù)后緊急啟動。在短暫的3 d內(nèi)準(zhǔn)備好申報新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)(包括風(fēng)險評估及相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作程序等)的資料。資料經(jīng)復(fù)旦大學(xué)生物安全專家委員會審核并經(jīng)校生物安全委員會主任(校長)批準(zhǔn)，由上海市衛(wèi)健委上報國家衛(wèi)健委。 實(shí)驗(yàn)室于1月28日和 30日先后獲得中國合格評定國家認(rèn)可委員會 (China National Accreditation Service for Conformity Assessment, CNAS)和國家衛(wèi)健委批準(zhǔn)進(jìn)行新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)；同時對新型冠狀病毒研究攻關(guān)成員進(jìn)行強(qiáng)化培訓(xùn)，為及時從來自上海的患者樣本中分離病毒提供了實(shí)驗(yàn)平臺。在此次實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急啟動中，復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室充分體現(xiàn)了“戰(zhàn)時一分鐘，戰(zhàn)前十年功”的精神。

1.1 復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)背景及日常運(yùn)行

復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室是上海市及復(fù)旦大學(xué)的高致病性微生物研究平臺，其作用定位于科研和教育。2002年在聞玉梅院士的建議下，復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室作為復(fù)旦大學(xué)“211”重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目立項(xiàng)。2008年9月復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室通過CNAS生物安全實(shí)驗(yàn)室評審，并獲得衛(wèi)生部(現(xiàn)國家衛(wèi)健委)批準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)活動資格，可進(jìn)行包括結(jié)核分枝桿菌、人類免疫缺陷病毒、甲型流感病毒(H1N1)、中東呼吸綜合征冠狀病毒、高致病性禽流感病毒、布魯菌屬等病原的操作及動物感染實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室的3個核心區(qū)經(jīng)常同時開放，3～4個項(xiàng)目組進(jìn)入，故而生物安全管理面臨很大的挑戰(zhàn)。依據(jù)我國的法律、法規(guī)及上海市相關(guān)規(guī)定，結(jié)合自身特點(diǎn)，復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室建立了BSL-3實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系，加強(qiáng)了BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)涵建設(shè)。通過十多年的安全運(yùn)行，特別是在進(jìn)行呼吸道傳播病原〔如高致病性禽流感病毒(H7N9)、結(jié)核分枝桿菌〕實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的管理中，積累了豐富的實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)(每年開機(jī)時間見圖1)，為迅速開展SARS-CoV-2實(shí)驗(yàn)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1.2 BSL-3實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急狀態(tài)下必須依法管理

本次疫情中，復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室在短暫的數(shù)天內(nèi)能獲得資質(zhì)并開展SARS-CoV-2攻關(guān)實(shí)驗(yàn)，也是基于我們對法律、法規(guī)以及申請流程的熟悉。我國對BSL-3實(shí)驗(yàn)室及其實(shí)驗(yàn)活動施行嚴(yán)格的管理制度，合法、合規(guī)地開展實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行的基礎(chǔ)。即使在緊急狀態(tài)下開展的實(shí)驗(yàn)也必須符合國家及地方的法律、法規(guī)。我國對BSL-3實(shí)驗(yàn)室的管理有“規(guī)定多，要求嚴(yán)，變化快”的特點(diǎn)，只有“平時”熟悉各種法律、法規(guī)，才能在“戰(zhàn)時”(緊急狀態(tài))不踩法律紅線，確保各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)在法律規(guī)定范圍內(nèi)進(jìn)行。目前，《中華人民共和國傳染病防治法》是我國進(jìn)行生物安全實(shí)驗(yàn)室管理的主法。根據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》，國務(wù)院出臺了《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》(國務(wù)院424號令)等相關(guān)行政法規(guī)，各部委也相繼出臺了多部規(guī)章以規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)活動。同時，各地根據(jù)自身的特點(diǎn)制定了地方性法規(guī)。此外，CNAS等機(jī)構(gòu)還制定了各種國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室平時注重與國家及上海市有關(guān)主管部門的溝通和聯(lián)系，加強(qiáng)與中國疾病預(yù)防控制中心的業(yè)務(wù)合作，及時咨詢并獲得新的信息。同時定期組織實(shí)驗(yàn)室人員學(xué)習(xí)相關(guān)法律、法規(guī)，熟悉國家及地方關(guān)于實(shí)驗(yàn)室管理的各項(xiàng)規(guī)定和準(zhǔn)則，及時關(guān)注新發(fā)布的各項(xiàng)規(guī)范并內(nèi)化為實(shí)驗(yàn)室日常管理制度或程序，確保在應(yīng)急狀態(tài)下能合法、合規(guī)地開展活動。

注：根據(jù)國標(biāo)GB19489-2008要求，2011年對BSL-3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行轉(zhuǎn)換整改，因此當(dāng)年開機(jī)時間較短。

2 BSL-3實(shí)驗(yàn)室在疫情中的快速應(yīng)答與內(nèi)涵建設(shè)

在接到任務(wù)后，復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室于2020年1月24日緊急啟動申報開展新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)的資格流程；1月25日檢查實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備運(yùn)行的安全性；同時對攻關(guān)組成員進(jìn)行新型冠狀病毒風(fēng)險評估，以及生物安全、個人防護(hù)裝備佩戴和穿脫、污染廢物處置等方面的強(qiáng)化培訓(xùn)。1月30日實(shí)驗(yàn)室獲得了開展新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)的資格，攻關(guān)組于2月7日從來自上?；颊叩臉颖局蟹蛛x到COVID-19病毒株[6]。BSL-3實(shí)驗(yàn)室在疫情中的快速應(yīng)答體現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室平時軟實(shí)力(即內(nèi)涵)的建設(shè)，包括實(shí)驗(yàn)室日常管理、人員培訓(xùn)管理以及實(shí)驗(yàn)技術(shù)儲備等。復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自身特點(diǎn)，對實(shí)驗(yàn)室的所有活動制訂了切實(shí)可行的、系統(tǒng)的體系文件，涉及組織機(jī)構(gòu)和人員管理、文件與檔案管理、微生物危害評估、樣品和菌(毒)種管理、病原微生物安全操作等內(nèi)容。同時，根據(jù)平時的實(shí)驗(yàn)活動，實(shí)驗(yàn)室還制訂了相應(yīng)的制度和操作程序，并根據(jù)具體情況的改變及時修訂文件，以保證實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)活動有條不紊地進(jìn)行，并在應(yīng)急時順利開展各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

2.1 BSL-3實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立單位建立完善的管理體系

復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立單位是復(fù)旦大學(xué)，并由復(fù)旦大學(xué)下?lián)芙?jīng)費(fèi)支持。為保證實(shí)驗(yàn)室的正常運(yùn)行并在緊急時刻能及時啟動，復(fù)旦大學(xué)建立了一套包括校長、書記及各相關(guān)職能部門在內(nèi)的管理體系。針對此次疫情，復(fù)旦大學(xué)立即成立了新型冠狀病毒攻關(guān)領(lǐng)導(dǎo)小組，校長授權(quán)領(lǐng)導(dǎo)小組組長進(jìn)行管理。在領(lǐng)導(dǎo)小組下成立了新型冠狀病毒項(xiàng)目管理組、攻關(guān)組、平臺組(BSL-3實(shí)驗(yàn)室)以及專家組，并制訂了新型冠狀病毒項(xiàng)目管理流程(圖2)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)申請流程(圖3)，項(xiàng)目管理的原則是“生物安全一票否決制”。

圖3 復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室開展新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)的申請流程

圖2 復(fù)旦大學(xué)新型冠狀病毒項(xiàng)目管理流程

復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室的管理實(shí)行校長領(lǐng)導(dǎo)下的生物安全管理委員會負(fù)責(zé)制，并由多個職能部門配合。實(shí)驗(yàn)室同時接受來自CNAS、國家衛(wèi)健委等上級主管部門和上海市相關(guān)部門的監(jiān)督和管理、業(yè)務(wù)指導(dǎo)和技術(shù)支持。復(fù)旦大學(xué)建立了以聞玉梅院士為主任的生物安全專家委員會，負(fù)責(zé)為所涉及高致病性病原微生物的研究工作提供技術(shù)咨詢及審核，以保障實(shí)驗(yàn)室能安全進(jìn)行相關(guān)研究。此次疫情中，生物安全專家委員會為新型冠狀病毒研究工作的方案、操作程序進(jìn)行生物安全審查并提供技術(shù)咨詢，保障了實(shí)驗(yàn)安全、平穩(wěn)、高效地進(jìn)行。

2.2 BSL-3實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險評估和管理

風(fēng)險評估是實(shí)驗(yàn)室生物安全管理的核心[7]。

SARS-CoV-2為新現(xiàn)病原體，在疫情發(fā)展初期，其傳播途徑、存活能力等特性并不確定，開展實(shí)驗(yàn)存在較大的潛在風(fēng)險，因此對SARS-CoV-2實(shí)驗(yàn)的風(fēng)險評估和管理對于實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險管控至關(guān)重要。由于本室長期開展經(jīng)呼吸道傳播的高致病性禽流感病毒H7N9等實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，在進(jìn)行H7N9相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中積累了經(jīng)驗(yàn)，從而為此次SARS-CoV-2實(shí)驗(yàn)風(fēng)險點(diǎn)的識別及風(fēng)險控制措施的制訂奠定了良好的基礎(chǔ)。

《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》(WS 233-2017)指出：“實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立并維持風(fēng)險評估和風(fēng)險控制制度，應(yīng)明確實(shí)驗(yàn)室持續(xù)進(jìn)行風(fēng)險識別、風(fēng)險評估和風(fēng)險控制的具體要求”[8]。復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室根據(jù)從事的高致病性病原微生物特點(diǎn)及操作過程中可能產(chǎn)生的生物危害，建立了一套實(shí)驗(yàn)室生物危害風(fēng)險評估的管理體系，從而為此次順利開展SARS-CoV-2的研究工作夯實(shí)了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)風(fēng)險評估由實(shí)驗(yàn)室主任和生物安全負(fù)責(zé)人組織，實(shí)驗(yàn)室生物安全委員會委員、相關(guān)專家及工作人員參加。風(fēng)險評估的內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)可能涉及的所有環(huán)節(jié)，如：實(shí)驗(yàn)涉及的致病性生物因子的特性、操作過程、安全管理的風(fēng)險、操作人員的風(fēng)險、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和設(shè)備等。由于病原微生物信息不斷更新以及生物安全實(shí)驗(yàn)室的變更等因素，風(fēng)險評估是一種動態(tài)發(fā)展的工作，需及時更新。風(fēng)險評估進(jìn)行更新時，由復(fù)旦大學(xué)生物安全委員會指派實(shí)驗(yàn)室生物安全負(fù)責(zé)人組織。生物安全負(fù)責(zé)人收集相關(guān)致病性病原微生物危害程度的最新資料，同時組織專家對疑難問題進(jìn)行討論。

2.3 SARS-CoV-2的風(fēng)險評估及管理

COVID-19疫情發(fā)生后，本實(shí)驗(yàn)室在啟動緊急申報任務(wù)的同時，立即組織人員(包括攻關(guān)組成員)對SARS-CoV-2相關(guān)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行風(fēng)險評估。SARS-CoV-2主要通過飛沫或與感染者密切接觸傳播，在相對封閉的環(huán)境中長時間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在經(jīng)氣溶膠傳播的可能[1, 9]。根據(jù)SARS-CoV-2的這一傳播特性，實(shí)驗(yàn)人員在進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)時加強(qiáng)了呼吸道及黏膜的個人防護(hù)，按要求佩戴N95口罩以及正壓通氣面罩或護(hù)目鏡。并且根據(jù)具體情況，在實(shí)驗(yàn)中對關(guān)鍵環(huán)節(jié)的風(fēng)險進(jìn)行再評估。在此次SARS-CoV-2相關(guān)實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)該病毒的感染劑量較低，因此實(shí)驗(yàn)人員在擴(kuò)增病毒時應(yīng)加強(qiáng)個人防護(hù)并提高防護(hù)意識。根據(jù)這一情況，實(shí)驗(yàn)室重新修訂了針對SARS-CoV-2的個人防護(hù)標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程序(Standard Operating Procedure，SOP)，并對實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行了再培訓(xùn)，以控制風(fēng)險。

與H7N9病毒不同，SARS-CoV-2對下呼吸道損害嚴(yán)重，其細(xì)胞表面受體為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(angiotensin-converting enzyme 2, ACE2)。ACE2在人肺泡上皮細(xì)胞和小腸上皮細(xì)胞中表達(dá)最為豐富，并在器官的動脈和靜脈內(nèi)皮細(xì)胞及動脈平滑肌細(xì)胞中表達(dá)[10]，表明該病毒不僅較易引起人體感染，同時可能感染多個細(xì)胞系(部分表達(dá)ACE2的細(xì)胞見表1)。因此，在進(jìn)行SARS-CoV-2相關(guān)實(shí)驗(yàn)時，強(qiáng)調(diào)不僅需要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)人員的個人防護(hù)，同時還要特別關(guān)注所使用的細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)過程中使用的細(xì)胞系必須為無特定病原體(specific pathogen free，SPF)級，禁止使用可能含有其他病原體的細(xì)胞系，以防止不同病毒發(fā)生重組。

表1 部分表達(dá)ACE2的細(xì)胞

2.4 應(yīng)急狀態(tài)下BSL-3實(shí)驗(yàn)室的管理

BSL-3實(shí)驗(yàn)室在疫情應(yīng)急狀態(tài)下的有效管理是基于實(shí)驗(yàn)室的日常管理。只有日常管理到位，才能在應(yīng)急時安全、高效、有序地開展實(shí)驗(yàn)。在涉及SARS-CoV-2的研究中，攻關(guān)組和平臺組雙方指定生物安全負(fù)責(zé)人，及時溝通實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的狀況，并解決問題，在保證實(shí)驗(yàn)室和人員安全的情況下推動實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室也對各種緊急情況制訂應(yīng)急預(yù)案、組織模擬演練并及時總結(jié)和優(yōu)化。同時，建立關(guān)鍵崗位人員替代制度，在指定人員無法及時到位的情況下，替代人員需及時補(bǔ)位。此次COVID-19疫情發(fā)生時，正值春節(jié)期間，在部分實(shí)驗(yàn)室工作人員無法及時到位的情況下，替代人員迅速補(bǔ)位，保證了SARS-CoV-2相關(guān)實(shí)驗(yàn)的順利開展。

2.5 應(yīng)急狀態(tài)下BSL-3實(shí)驗(yàn)室人員的培訓(xùn)及管理

人是實(shí)驗(yàn)室生物安全管理的第一要素。根據(jù)國家規(guī)定，BSL-3實(shí)驗(yàn)室的工作人員需經(jīng)過CNAS及衛(wèi)生主管部門現(xiàn)場評審專家組及相關(guān)主管部門的考核并備案方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作[13]。

2.5.1 SARS-CoV-2實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)為了降低實(shí)驗(yàn)室感染的潛在風(fēng)險[14]，需及時、定期開展實(shí)驗(yàn)人員生物安全培訓(xùn)，以保證項(xiàng)目的順利進(jìn)行。復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室是復(fù)旦大學(xué)的高致病性病原微生物研究平臺，有不同項(xiàng)目組的人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作，因此實(shí)驗(yàn)室平時需要對不同背景的項(xiàng)目組人員進(jìn)行有針對性的相關(guān)專業(yè)知識及技術(shù)培訓(xùn)，及時更新培訓(xùn)內(nèi)容，針對薄弱環(huán)節(jié)開展多種形式的反復(fù)培訓(xùn)與演練，項(xiàng)目組人員只有通過實(shí)驗(yàn)室的培訓(xùn)及考核后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于獲得上崗證的項(xiàng)目組，實(shí)驗(yàn)室指定BSL-3生物安全負(fù)責(zé)人對項(xiàng)目組進(jìn)行定期或不定期的監(jiān)督，以便及時發(fā)現(xiàn)問題，指導(dǎo)其對所存在問題進(jìn)行風(fēng)險分析并整改，禁止不符合要求的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室開展實(shí)驗(yàn)。COVID-19疫情發(fā)生后，國家衛(wèi)健委、CNAS等針對新現(xiàn)病原及時發(fā)布各項(xiàng)規(guī)定、指南等文件，中國疾病預(yù)防控制中心的專業(yè)部門也發(fā)布各種關(guān)于新現(xiàn)病原的病原學(xué)、防控措施等信息。BSL-3實(shí)驗(yàn)室及時收集此類信息并制訂相應(yīng)的操作方案，開展風(fēng)險評估，組織項(xiàng)目組實(shí)驗(yàn)操作人員進(jìn)行相關(guān)知識的培訓(xùn)，包括對于新現(xiàn)病原的各種防護(hù)及實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作培訓(xùn)；同時對項(xiàng)目組人員進(jìn)行理論及操作考核，考核通過后方可進(jìn)行涉及SARS-CoV-2的實(shí)驗(yàn)。在相關(guān)實(shí)驗(yàn)過程中，BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作人員對實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行監(jiān)督，及時發(fā)現(xiàn)和糾正問題。當(dāng)發(fā)現(xiàn)存在比較大的風(fēng)險隱患時，召開項(xiàng)目組人員與BSL-3實(shí)驗(yàn)室人員聯(lián)席會議，提出實(shí)際可行的、有針對性的解決方案。

2.5.2 新型冠狀病毒攻關(guān)組的管理本次COVID-19疫情中，參與SARS-CoV-2相關(guān)實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目組成員由復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)教育部/衛(wèi)健委/醫(yī)科院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和病原生物學(xué)系不同課題組的骨干人員臨時組成。在項(xiàng)目組中不同課題組成員間開展協(xié)調(diào)工作是對本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急管理能力的考驗(yàn)，順利通過考驗(yàn)離不開實(shí)驗(yàn)室平時在項(xiàng)目組管理中的經(jīng)驗(yàn)積累。不同于疾病預(yù)防控制中心系統(tǒng)的BSL-3實(shí)驗(yàn)室，復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室平時的實(shí)驗(yàn)以科研與教學(xué)為主，對來自不同單位的項(xiàng)目組開放，有不同的研究人員進(jìn)入。每年有 6～7個項(xiàng)目組進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室開展實(shí)驗(yàn)(包括人類免疫缺陷病毒的細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)以及結(jié)核分枝桿菌、高致病性禽流感病毒H7N9、布魯菌的細(xì)胞及動物感染實(shí)驗(yàn))。由于項(xiàng)目組人員的背景不同，因此需要對項(xiàng)目組進(jìn)行管理。本次SARS-CoV-2的實(shí)驗(yàn)主要以復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)教育部/衛(wèi)健委/醫(yī)科院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室為主的SARS-CoV-2攻關(guān)組負(fù)責(zé)，我們平時積累的項(xiàng)目組管理流程和經(jīng)驗(yàn)發(fā)揮了作用，保證了實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

2.5.3 BSL-3后勤保障人員的培訓(xùn)及管理復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室日常運(yùn)行需要后勤保障人員對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行維護(hù)。后勤保障人員(包括維護(hù)公司的人員)未經(jīng)允許不能進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)。經(jīng)過許可進(jìn)入指定的實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)的后勤保障人員必須熟悉實(shí)驗(yàn)室的安全操作規(guī)程及最新的生物安全防護(hù)知識，了解進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)的潛在危險，經(jīng)過培訓(xùn)取得上崗證后在BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作人員的陪同下方可進(jìn)入核心區(qū)。在COVID-19疫情暴發(fā)時，由于后勤保障人員平時對實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)非常了解，可以盡快進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)試，為開展SARS-CoV-2的相關(guān)實(shí)驗(yàn)爭取了寶貴的時間。

2.6 BSL-3實(shí)驗(yàn)室針對SARS-CoV-2的實(shí)驗(yàn)技術(shù)儲備

實(shí)驗(yàn)技術(shù)的積累是BSL-3實(shí)驗(yàn)室順利、高效開展實(shí)驗(yàn)的技術(shù)保障。在高等級生物安全實(shí)驗(yàn)室的日常運(yùn)轉(zhuǎn)中，工作人員需具備完備的專業(yè)知識和良好的操作技能，特別是科研人員須擁有精湛的微生物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，方可降低發(fā)生生物安全事故的可能性[15]。只有了解相關(guān)病原的操作，才能識別關(guān)鍵風(fēng)險環(huán)節(jié)，制定可行的風(fēng)險控制措施。因此，BSL-3實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)了解和熟悉在本實(shí)驗(yàn)室開展的相關(guān)病原微生物實(shí)驗(yàn)操作及流程。復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室人員在負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行管理的同時，經(jīng)常向項(xiàng)目組人員學(xué)習(xí)并進(jìn)行交流。復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室與基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)教育部/衛(wèi)健委/醫(yī)科院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和病原生物學(xué)系已建立密切的合作關(guān)系，即BSL-3實(shí)驗(yàn)室為重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供高致病性病原微生物研究平臺，重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室為BSL-3實(shí)驗(yàn)室提供技術(shù)支持。在此次COVID-19疫情中，雙方的優(yōu)勢得以充分發(fā)揮，使得項(xiàng)目組能夠快速從患者樣本中分離到SARS-CoV-2毒株，并形成了規(guī)范操作程序等文件。BSL-3實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊(duì)與攻關(guān)團(tuán)隊(duì)在實(shí)踐中互相學(xué)習(xí)，共同提高。

2.7 BSL-3實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和設(shè)備的保障

2.7.1 BSL-3實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備運(yùn)行的管理本實(shí)驗(yàn)室在緊急情況下能夠平穩(wěn)啟動并安全地開展實(shí)驗(yàn)，軟實(shí)力是保障，而硬件是基礎(chǔ)。本次疫情發(fā)生時，正值實(shí)驗(yàn)室停機(jī)檢修階段(包括對實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)的嚴(yán)密性檢測，實(shí)驗(yàn)室防護(hù)區(qū)的換氣次數(shù)檢測，壓力、溫度、濕度傳感器校準(zhǔn)，送風(fēng)高效過濾器更換等)，能夠在短時間內(nèi)完成檢修并緊急啟動，離不開平時長時間運(yùn)行中的經(jīng)驗(yàn)積累(實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、設(shè)備的安全運(yùn)行對于實(shí)驗(yàn)室的安全運(yùn)行非常重要，具體經(jīng)驗(yàn)將另文介紹。)

2.7.2 實(shí)驗(yàn)室設(shè)施系統(tǒng)維護(hù)與應(yīng)急響應(yīng)復(fù)旦大學(xué)BSL-3實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)的運(yùn)行與管理分為3個層級，包括日常運(yùn)行管理、維護(hù)保養(yǎng)(周、月、季和年)管理以及年度檢測。設(shè)施系統(tǒng)的維護(hù)、維修委托維保公司進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施負(fù)責(zé)人進(jìn)行監(jiān)督、檢查。維護(hù)方案由實(shí)驗(yàn)室與維保公司共同制訂。系統(tǒng)出現(xiàn)問題時，維保公司人員必須在2 h內(nèi)到達(dá)現(xiàn)場進(jìn)行維修。同時，實(shí)驗(yàn)室生物安全設(shè)施系統(tǒng)須按規(guī)定通過第三方檢測機(jī)構(gòu)的年度檢測[16]。實(shí)驗(yàn)室日常的及時維護(hù)和檢測可保障實(shí)驗(yàn)室在疫情發(fā)生時緊急啟動并平穩(wěn)運(yùn)行。此次緊急啟動中，維保公司在正月初一即派員到位啟動實(shí)驗(yàn)室并進(jìn)行調(diào)試，保證了實(shí)驗(yàn)室的正常、安全運(yùn)轉(zhuǎn)。

2.7.3 BSL-3實(shí)驗(yàn)室關(guān)鍵設(shè)備的維護(hù)實(shí)驗(yàn)室開展高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)離不開諸如恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、生物安全型離心機(jī)、生物安全柜等儀器設(shè)備的穩(wěn)定運(yùn)行，且核心工作間配置的儀器設(shè)備與普通實(shí)驗(yàn)室在生物安全要求方面有所區(qū)別。根據(jù)日常實(shí)驗(yàn)開展的情況，應(yīng)及時添置符合實(shí)驗(yàn)需要且滿足生物安全要求的儀器設(shè)備，以防疫情緊急狀態(tài)下采購儀器設(shè)備受阻，影響實(shí)驗(yàn)的順利開展。此外，核心區(qū)工作間處于負(fù)壓通風(fēng)狀態(tài)，并受換氣次數(shù)(每小時不少于12次[17])的影響，儀器設(shè)備容易出現(xiàn)故障。因此，平時需對儀器設(shè)備及時進(jìn)行維護(hù)、校準(zhǔn)和調(diào)整，以確保在應(yīng)急響應(yīng)時處于正常工作狀態(tài)。

2.7.4 BSL-3實(shí)驗(yàn)室防護(hù)用品的儲備BSL-3實(shí)驗(yàn)室的各類防護(hù)用品是實(shí)驗(yàn)室順利開展實(shí)驗(yàn)的必備耗材，且多為一次性使用。因此實(shí)驗(yàn)室必須儲備一定數(shù)量的個人防護(hù)用品，如防護(hù)性口罩、一次性防護(hù)服、靴套等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)平時實(shí)驗(yàn)開展的情況，對防護(hù)用品的消耗情況計(jì)算、統(tǒng)計(jì)并及時補(bǔ)充。本實(shí)驗(yàn)室一般儲備可用3～6個月的防護(hù)用品，以備疫情突發(fā)時急需。此次疫情中，在各方防護(hù)用品告急的情況下，本實(shí)驗(yàn)室因提前儲備了防護(hù)用品及實(shí)驗(yàn)耗材，滿足了SARS-CoV-2攻關(guān)組在開展實(shí)驗(yàn)時的需求。

3 結(jié)語

應(yīng)急能力體現(xiàn)了BSL-3實(shí)驗(yàn)室平時的內(nèi)涵建設(shè)。在實(shí)驗(yàn)室日常運(yùn)行中，通過不斷發(fā)現(xiàn)、糾正或整改問題，逐步優(yōu)化管理體系以達(dá)到高效解決實(shí)際問題的水平；經(jīng)BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作人員團(tuán)隊(duì)和項(xiàng)目組成員之間的磨合，不斷積累經(jīng)驗(yàn)和提升能力，在緊急時刻才能迅速響應(yīng)并保證實(shí)驗(yàn)室的安全運(yùn)行。BSL-3實(shí)驗(yàn)室的硬件是實(shí)驗(yàn)室安全、有效運(yùn)行的基礎(chǔ)，而內(nèi)涵建設(shè)是保障，雙管齊下方能保證實(shí)驗(yàn)室安全、高效地運(yùn)轉(zhuǎn)。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)涵建設(shè)是軟實(shí)力，涉及管理系統(tǒng)、風(fēng)險評估、人員管理等多個方面。在實(shí)驗(yàn)室平時活動中，營造生物安全文化，提高生物安全意識，為應(yīng)急能力建設(shè)奠定基礎(chǔ)。BSL-3實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行過程中，會發(fā)生不同的問題，只有及時發(fā)現(xiàn)并找出解決的方案或方法并加以總結(jié)及優(yōu)化管理體系，才能在應(yīng)急響應(yīng)時減少事故的發(fā)生，為疫情控制、科研攻關(guān)提供技術(shù)支撐和生物安全平臺保障。