胃癌患者外周血中膽固醇與淋巴細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義及兩者的相關(guān)性

吳宏偉 王子安

[摘要] 目的 測(cè)定胃癌患者外周血中的總膽固醇（TC）與總淋巴細(xì)胞數(shù)（LYM），探討膽固醇、淋巴細(xì)胞總數(shù)的測(cè)定在臨床中的意義及兩者之間是否有相關(guān)性。方法? 方便選取2017年 1 月—2019年1 月該院收治的胃癌患者100例作為胃癌組，同期該院體檢中心健康體檢者50名作為對(duì)照組，檢測(cè)兩組研究對(duì)象外周血中總膽固醇及總淋巴細(xì)胞并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)將胃癌組中膽固醇、淋巴細(xì)胞分別與臨床病理特征進(jìn)行分析并探討兩者之間的相關(guān)性。結(jié)果? 胃癌組外周血中膽固醇水平高于對(duì)照組（t=-2.447，P=0.016），淋巴細(xì)胞水平低于對(duì)照組（t=3.886，P=0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;胃癌組中膽固醇、淋巴細(xì)胞與性別、浸潤(rùn)程度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但隨著分化程度及TNM分期情況有明顯上升及下降趨勢(shì)（分化程度：膽固醇： t=0.560，P=0.573;低分化（4.34±1.03）mmol/L;中分化（4.38±0.96）mmol/L;高分化（4.02±0.89）mmol/L;（TNM分期：淋巴細(xì)胞：t=0.606，P=0.613;I期（1.78±0.54）×109/L;II期（1.72±0.53）×109/L;III期（1.70±0.61）×109/L;IV期（1.57±0.55）×109/L;胃癌組中膽固醇和淋巴細(xì)胞有顯著正相關(guān)性（r=0.218，P=0.029）。結(jié)論 膽固醇及淋巴細(xì)胞的異常在胃癌患者中可反應(yīng)患者的病情情況及營(yíng)養(yǎng)、免疫狀態(tài)，通過(guò)干預(yù)膽固醇的含量可影響機(jī)體的免疫狀態(tài)進(jìn)而改變其抗腫瘤免疫能力，并為腫瘤的免疫治療提供新的思路及臨床依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 胃癌;膽固醇;淋巴細(xì)胞;腫瘤免疫

[中圖分類號(hào)] R73? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2020）06（a）-0175-04

Clinical Significance of Peripheral Blood Cholesterol and Lymphocyte Detection in Patients with Gastric Cancer and Their Correlation

WU Hong-wei， WANG Zi-an

Department of Oncology， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Bengbu， Anhui Province， 233004 China

[Abstract] Objective To determine the total cholesterol （TC） and total lymphocytes （LYM） in the peripheral blood of patients with gastric cancer， and to explore the clinical significance of the determination of cholesterol and total lymphocytes and whether there is a correlation between the two. Methods A total of 100 patients with gastric cancer treated from January 2017 to January 2019 were conveniently selected as the gastric cancer group， and 50 healthy patients from the physical examination center of the hospital were used as the control group. Total cholesterol and total lymphocytes in the peripheral blood of the two subjects were measured and analyzed. At the same time， the cholesterol and lymphocytes in the gastric cancer group were analyzed with clinicopathological characteristics and the correlation between the two was explored. Results The levels of cholesterol in the peripheral blood of gastric cancer group were higher than those in the control group （t=-2.447， P=0.016）， and the levels of lymphocytes were lower than those in the control group （t=3.886， P=0.000）. The differences were statistically significant（P<0.05）. Cholesterol， lymphocytes and gender， degree of infiltration， degree of differentiation， lymph node metastasis， distant metastasis， and TNM staging were not statistically significant and had no significant correlation （P>0.05）， but with the degree of differentiation and TNM staging significant upward and downward trends （differentiation degree： cholesterol： t=0.560，P=0.573;poorly differentiated （4.34±1.03）mmol/L; moderately differentiated （4.38 ± 0.96）mmol/L; highly differentiated （4.02±0.89）mmol/L; （TNM stage： lymphocytes： t=0.606， P=0.613; Stage I （1.78 ± 0.54）×109/L; Stage II （1.72 ± 0.53）×109/L; Stage III （1.70±0.61）×109/L; Stage IV （1.57 ± 0.55）×109/L; There was a significant positive correlation between cholesterol and lymphocytes in the gastric cancer group （r=0.218， P=0.029）. Conclusion Cholesterol and lymphocyte abnormalities can reflect the patient's condition and nutrition and immune status in patients with gastric cancer. Intervention of cholesterol content can affect the body's immune status and thus change its anti-tumor immune ability， and provide new opportunities and clinical basis for tumor immunotherapy. [Key words] Gastric cancer; Cholesterol; Lymphocyte; Tumor immunity

膽固醇與多種腫瘤存在相關(guān)性，但與胃癌的關(guān)聯(lián)性至今并未達(dá)到一致，近年，基于T淋巴細(xì)胞的腫瘤免疫治療取得新進(jìn)展，研究發(fā)現(xiàn)膽固醇水平可影響CD8+T細(xì)胞的免疫功能[1]，而外周血中膽固醇與淋巴細(xì)胞的相關(guān)性未得到驗(yàn)證;淋巴細(xì)胞作為能反應(yīng)機(jī)體免疫能力的細(xì)胞，與臨床病理特征間關(guān)系的研究相對(duì)較少，該研究方便選取2017年 1 月—2019年1 月入住該院的100例胃癌患者病例，研究外周血中總膽固醇、總淋巴細(xì)胞水平，探討它們之間的相關(guān)性及與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，為腫瘤免疫治療提供臨床依據(jù)，報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選取入住該院的胃癌患者100例作為胃癌組，所有患者均經(jīng)胃鏡和活檢或手術(shù)與病理確診，未行抗腫瘤治療。其中男72例，女28例;年齡25～81歲;分化程度：低分化63例，中分化15例，高分化12例;TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期37例，Ⅳ期38例。另將同期健康體檢者50名作為對(duì)照組，其中男24名，女26名;年齡 25～72歲。兩組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組患者均排除體重超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)體重15%和原發(fā)性血脂代謝異常疾病、自身免疫性疾病、心肺肝腎嚴(yán)重功能障礙、高血壓病、甲狀腺疾病、糖尿病、中重度貧血者。所選病例均經(jīng)過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且獲得患者及其家屬的知情同意。

1.2? 方法

分析兩組的血漿膽固醇、淋巴細(xì)胞，測(cè)定方法為：收集受試者空腹12 h后靜脈血2 mL，加入0.2 mL肝素抗凝，離心分離血清，用酶法測(cè)定TC水平，所用試劑為日立7600-120E全自動(dòng)生化儀配套的試劑。使用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定兩組血漿中總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，美國(guó)BECKMAN-COULTER公司 EPICS-XL型流式細(xì)胞儀，試劑原裝進(jìn)口，采用CD3-FITC/CD16+56-PE、CD4-FITC/CD8-PE鼠抗人雙色熒光抗體，OptilyseC溶血?jiǎng)?。?100 μL抗凝外用靜脈血與20 μL熒光抗體充分混勻 ，室溫避光放置20 min后，加入500 μL溶血?jiǎng)瑩u勻后避光放置15 min，離心2 000 r/min離心10 min，去上清，加1 mL的PBS緩沖液，混勻后上機(jī)檢測(cè)。

1.3? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用t檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 胃癌組與健康對(duì)照組膽固醇、淋巴細(xì)胞含量的比較

胃癌組膽固醇水平高于對(duì)照組，胃癌組淋巴細(xì)胞水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2? 胃癌患者外周血膽固醇、淋巴細(xì)胞水平與臨床病理特征的關(guān)系

胃癌患者外周血膽固醇、淋巴細(xì)胞水平與其性別、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05），但有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者膽固醇水平高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者;中、低分化程度膽固醇水平高于高分化程度者;且隨著TNM分期越晚，外周血膽固醇水平有上升趨勢(shì)。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者淋巴細(xì)胞水平低于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者;且隨著TNM分期越晚，外周血淋巴細(xì)胞水平有下降趨勢(shì)。見(jiàn)表2。

2.3? 胃癌患者外周血膽固醇、淋巴細(xì)胞水平與臨床病理特征的相關(guān)性

胃癌患者外周血中總膽固醇、總淋巴細(xì)胞水平與其臨床病理特征均無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。見(jiàn)表3。

2.4? 胃癌患者外周血總膽固醇與總淋巴細(xì)胞水平的相關(guān)性

胃癌患者外周血總膽固醇與總淋巴細(xì)胞水平之間有相關(guān)性（r=0.218，P<0.05）。見(jiàn)表3。

3? 討論

腫瘤患者普遍存在血脂紊亂現(xiàn)象，胃癌患者更傾向于高脂血癥，既往研究表明：膽固醇在胃癌及前期病變既胃高級(jí)別瘤變中呈高水平（P=0.013）[2-3]，TC與TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。該研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血中總膽固醇含量（4.28±0.98）mmol/L高于正常（3.82±0.65）mmol/L;有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者含量（4.46±0.97）mmol/L高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者（4.17±0.97）mmol/L;分化程度低者含量較高[低分化（4.34±1.03）mmol/L;高分化（4.02±0.89）mmol/L];且隨著TNM分期越晚，外周血TC水平有上升趨勢(shì)I（4.18±0.88）mmol/L;Ⅱ（4.22±0.78）mmol/L;Ⅲ（4.16±1.07）;Ⅳ（4.45±0.98），與既往結(jié)果一致。胃癌患者外周血中TC的升高可能與脂蛋白酯酶 （LPL）及腫瘤壞死因子（TNF-α）有關(guān)：LPL是調(diào)節(jié)脂肪合成的重要酶之一，TNF-α由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，進(jìn)展期胃癌患者中TNF-α通過(guò)抑制LPL參與癌性惡液質(zhì)的發(fā)生發(fā)展，從而降低 LPL活性及脂肪酸轉(zhuǎn)變能力，使外周血中TC不易向組織轉(zhuǎn)化，既血漿TC水平升高[4]。TC水平升高通過(guò)誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子、趨化因子等高表達(dá)、增加氧化應(yīng)激產(chǎn)物、引發(fā) DNA突變、增加癌基因的表達(dá)，促使癌癥的發(fā)生和發(fā)展;同時(shí)增加腫瘤血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)、促進(jìn)腫瘤血管生成、增加血管通透性，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，提高腫瘤的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[5]。這些均表明高膽固醇與胃癌的發(fā)生、發(fā)展息息相關(guān)。但是本研究中，胃癌患者外周血總膽固醇與各臨床病理特征無(wú)明顯關(guān)聯(lián)（分化程度r=-0.105，浸潤(rùn)程度r=0.154，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移r=0.021，TNM分期r=0.114;P>0.05），考慮可能為納入實(shí)驗(yàn)組人數(shù)相關(guān)較少、較多晚期患者所致，因既往有研究表明TC與胃癌各臨床病理特征之間無(wú)相關(guān)性（分化程度r=-0.004，浸潤(rùn)程度r=0.003，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移r=-0.005，TNM分期r=-0.056;P>0.05）[6]，所以不排除實(shí)際差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）的可能。

抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞包括T、B、NK淋巴細(xì)胞，外周血T淋巴細(xì)胞亞群相互協(xié)調(diào)，維持機(jī)體正常的免疫功能，當(dāng)其數(shù)量、比例異常時(shí)，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)免疫功能紊亂并引發(fā)一系列病理改變;B細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞活化發(fā)揮細(xì)胞免疫作用，在腫瘤免疫中發(fā)揮正向作用;NK細(xì)胞通過(guò)增加MHCⅠ類分子表達(dá)參與適應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答，是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分，三者相輔相成發(fā)揮免疫監(jiān)視作用。學(xué)術(shù)上認(rèn)為，胃癌患者血清T細(xì)胞亞群中，CD3+T、CD4+T細(xì)胞表達(dá)較正常人和癌前病變者少，CD4+T/CD8+T細(xì)胞比值降低，且淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平由其TNM分期決定[7];B細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常人雖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其絕對(duì)數(shù)值低于正常人（P>0.05），早期（Ⅰ、Ⅱ期）含量高于晚期（Ⅲ、Ⅳ期）（P<0.01）[8];NK細(xì)胞亞群（CD16、CD57、CD69）數(shù)量減少，且多為抑制性表型[9]，這些異常均說(shuō)明機(jī)體出現(xiàn)負(fù)性調(diào)節(jié)的免疫抑制，識(shí)別和殺傷突變細(xì)胞的能力下降，從而有利于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，這是胃癌發(fā)病的免疫學(xué)基礎(chǔ)。以上，既往研究大都集中在淋巴細(xì)胞亞群的探究中，表明胃癌患者外周血中各淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常人降低，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.367），Ⅲ、Ⅳ期淋巴細(xì)胞水平較Ⅰ、Ⅱ期及正常人明顯較少，差異具有顯著性（P<0.01）[10]，該實(shí)驗(yàn)證實(shí)胃癌患者總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（1.67±0.57）×109/L較正常人（1.90±0.48）×109/L低，同時(shí)也證實(shí)其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性（r=-0.122，P=0.226）但隨著TNM分期遞增有明顯下降趨勢(shì)[I （1.78±0.54）;Ⅱ（1.72±0.53）×109/L;Ⅲ（1.70±0.61）×109/L;Ⅳ（1.57±0.55）×109/L]，說(shuō)明不管基于總淋巴細(xì)胞還是各亞群，數(shù)量都較正常人低，隨著腫瘤的發(fā)展，機(jī)體免疫能力呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，由于各免疫細(xì)胞的類型、密度、位置、表達(dá)模式及免疫應(yīng)答狀態(tài)不同導(dǎo)致腫瘤的免疫控制失去協(xié)調(diào)性，所以總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與臨床病理特征間無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。

HMG-CoA還原酶是膽固醇生物合成中的限速酶，抑制其活性減少TC的合成可抑制淋巴細(xì)胞擴(kuò)增[11]，抑制膽固醇酯化酶ACAT1活性，增加細(xì)胞膜游離膽固醇水平可增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的抗腫瘤免疫反應(yīng)[1]，上述研究證實(shí)TC的代謝調(diào)節(jié)會(huì)影響淋巴細(xì)胞增殖、信號(hào)傳導(dǎo)及免疫功能，該實(shí)驗(yàn)首次研究?jī)烧叩南嚓P(guān)性，證實(shí)具有顯著正相關(guān)性（r=0.218;P=0.029），可為腫瘤代謝免疫治療提供新的研究方向及臨床依據(jù)。既往研究發(fā)現(xiàn)高膽固醇組的記憶B細(xì)胞STAT3活性較正常膽固醇組顯著升高[12]，結(jié)合最新研究：EB病毒相關(guān)性胃癌與包括JAK2擴(kuò)增在內(nèi)的免疫應(yīng)答基因異常調(diào)節(jié)有關(guān)[13]，有理由推測(cè)胃癌中TC可通過(guò)JAK2/STAT3信號(hào)通路發(fā)揮調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞免疫功能的作用，并可由相關(guān)拮抗劑調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化胃上皮細(xì)胞進(jìn)而改變其表觀遺傳，因此，下一步可就其信號(hào)通路進(jìn)行基因方面的研究，有望發(fā)現(xiàn)更高效的靶向治療藥物。

綜上所述，胃癌患者外周血中膽固醇、淋巴細(xì)胞水平與胃癌息息相關(guān)，監(jiān)測(cè)其變化可判斷疾病進(jìn)展情況及預(yù)后，同時(shí)本研究表明膽固醇與淋巴細(xì)胞正相關(guān)，從臨床層面證實(shí)了膽固醇代謝的調(diào)節(jié)可影響免疫細(xì)胞的適應(yīng)性免疫應(yīng)答活性，并為腫瘤的免疫治療提供新的思路。

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（收稿日期：2020-03-04）