氣相色譜法測(cè)定沃柑中毒死蜱丙溴磷和三唑磷殘留的前處理方法研究

陸燕 黎施展 石杰東 義國(guó)通 農(nóng)時(shí)鋒 湯薇

摘要：分別采用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定法》和QuEChERS方法對(duì)沃柑樣品進(jìn)行前處理，采用氣相色譜法測(cè)定樣品中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留量。通過(guò)分析2種前處理方法的試驗(yàn)效果，建立更適合沃柑的農(nóng)殘檢測(cè)快速有效的方法。試驗(yàn)結(jié)果表明：QuEChERS方法測(cè)定毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的檢出限為0.002mg·kg-1，回收率在72.9%～91.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.4%～11.1%，完全符合檢測(cè)要求，且QuEChERS前處理方法所用的樣品處理時(shí)間、試劑用量和廢液量均較少，所以該方法可適用于氣相色譜法檢測(cè)沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留。

關(guān)鍵詞：QuEChERS;毒死蜱;丙溴磷;三唑磷;氣相色譜;農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào)：S-3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20200815007

收稿日期：2020-07-08

作者簡(jiǎn)介：陸燕（1982-），女，本科，農(nóng)藝師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè);通訊作者黎施展（1981-），女，本科，高級(jí)工程師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)。

沃柑是以色列研發(fā)的柑橘新品種，因具有樹(shù)勢(shì)強(qiáng)健、熟期晚、采收期長(zhǎng)、果實(shí)外觀漂亮且低酸高糖、脆嫩多汁等特點(diǎn)，同時(shí)能夠彌補(bǔ)我國(guó)晚熟柑橘類比例少的空間，近年來(lái)深受果農(nóng)的青睞。從2012年開(kāi)始，廣西自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳實(shí)施優(yōu)果工程和特色果業(yè)提升工程，將沃柑引入試種，到2019年，廣西的沃柑種植面積已達(dá)13.33萬(wàn)hm2。隨著種植面積的不斷擴(kuò)大，對(duì)沃柑病蟲(chóng)害的防治尤為重要。沃柑常見(jiàn)的病蟲(chóng)害有黃龍病、潰瘍病、紅蜘蛛、蚜蟲(chóng)、介殼蟲(chóng)等，蟲(chóng)害的發(fā)生往往成為病害傳播的媒介，因此在沃柑種植過(guò)程中，會(huì)多次噴施殺蟲(chóng)劑預(yù)防病蟲(chóng)害的發(fā)生。在監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)，沃柑檢出率最高的是毒死蜱、丙溴磷和三唑磷這3種廣譜性殺蟲(chóng)劑。

目前，我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留的檢測(cè)多采用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定法》[1]進(jìn)行前處理和使用氣相色譜儀進(jìn)行定性和定量地檢測(cè)，本文簡(jiǎn)稱A法。該方法存在耗時(shí)較長(zhǎng)，消耗的有機(jī)試劑和排放的廢液多，對(duì)檢測(cè)人員身體產(chǎn)生的危害較大等缺點(diǎn)[2]。2003年美國(guó)農(nóng)業(yè)部針對(duì)蔬菜水果的農(nóng)殘檢測(cè)開(kāi)發(fā)了QuEChERS方法—快速樣品前處理技術(shù)，本文簡(jiǎn)稱B法。該方法具有操作簡(jiǎn)單、快速有效、穩(wěn)定安全的特點(diǎn)，適用于種植業(yè)類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)[3-9]。QuEChERS方法自問(wèn)世以來(lái)，引起了廣泛關(guān)注，科研工作者對(duì)該方法進(jìn)行不斷改進(jìn)，使其成為農(nóng)藥殘留檢測(cè)的首選前處理方法[10] 。本文旨在研究QuEChERS前處理方法應(yīng)用于氣相色譜儀來(lái)測(cè)定沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷殘留的可靠性，以期開(kāi)發(fā)出快速有效的沃柑農(nóng)殘檢測(cè)方法。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1樣品制備

將3kg沃柑按四分法縮分后，全果放入攪拌機(jī)搗碎成勻漿狀態(tài)備用。

1.1.2主要儀器設(shè)備

7890B氣相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），L530離心機(jī)（湖南湘儀公司），（H1650-W）離心機(jī)（湖南湘儀公司），T25高速分散機(jī)（德國(guó)IKA公司），VORTEX-GENIE2漩渦混勻器（美國(guó)SI公司），TE421-L天平（賽多利斯科學(xué)儀器公司）、EH20D電熱板（北京萊伯泰科公司）、飛利浦?jǐn)嚢铏C(jī)。

1.1.3試劑

毒死蜱、丙溴磷、三唑磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg·L-1），購(gòu)于天津阿爾塔科技有限公司;QuEChERS萃取試劑包和凈化管（PSA 50mg、PC 50mg、C18 50mg、MgSO4 150mg）均為美國(guó)Agilent公司生產(chǎn);氯化鈉（分析純）、乙腈、丙酮為美國(guó)TEDIA公司色譜純?cè)噭?/p>

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

100mg·L-1的毒死蜱、丙溴磷、三唑磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，用丙酮配制成10mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，測(cè)定時(shí)，再用基質(zhì)液配制成0.02mg·L-1、0.04mg·L-1、0.08mg·L-1、0.32mg·L-1、0.64mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.2試驗(yàn)設(shè)置

分別設(shè)置一個(gè)空白樣和0.04mg·kg-1、0.08mg·kg-1、0.4mg·kg-13個(gè)添加濃度水平，每個(gè)水平重復(fù)6次。

1.2.3樣品前處理

A法前處理：準(zhǔn)確稱取25.00g沃柑勻漿樣品于錐形瓶中，加入50.0mL乙腈，勻漿機(jī)高速勻漿2min后濾紙過(guò)濾，濾液收集到裝有6g氯化鈉的100mL具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈震蕩1min后，靜置30min，吸取上清液10.00mL放入150mL燒杯中，80℃電熱板加熱，蒸發(fā)近干，加入2.0mL丙酮，后轉(zhuǎn)移至15mL刻度離心管丙酮定容5.0mL，在漩渦混合器上混勻，0.22μm濾膜過(guò)濾后裝瓶待測(cè)。

B法前處理：準(zhǔn)確稱取15.00g沃柑勻漿樣品于50mL塑料離心管中，加入15.0mL乙腈、QuEChERS萃取試劑包和均質(zhì)子，振蕩1min后5000r·min-1離心5min。取1.5mL上清液至凈化管，振蕩混勻后10000r·min-1離心5min，0.22μm濾膜過(guò)濾后裝瓶待測(cè)。

1.2.4儀器條件

色譜柱：DB-17（30m×530μm×1.5μm）;進(jìn)樣口溫度：220℃;初始溫度150℃，保持2min，以8℃·min-1的速率升至250℃，保持12min;載氣：氮?dú)猓ā?9.999%），流速：10mL·min-1;燃?xì)猓簹錃猓ā?9.999%），流速：75mL·min-1;助燃?xì)猓嚎諝?，流速?00mL·min-1;檢測(cè)器溫度：250℃;尾吹氣流量：60 mL·min-1;進(jìn)樣量1.0μL。

1.2.5計(jì)算

準(zhǔn)確稱取樣品，分別用A法和B法前處理后上機(jī)測(cè)定，計(jì)算出檢出限（LOD）、農(nóng)藥殘留回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

根據(jù)GB/T 5009.1-2003食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分總則中對(duì)于色譜法檢出限的定義，色譜儀最低響應(yīng)值為S=3N （N為儀器噪音水平），則檢出限按公式進(jìn)行計(jì)算：

檢出限=S/b

式中，S為儀器噪音的3倍，即儀器能分辨的最小物質(zhì)信號(hào);b為標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中的斜率。

農(nóng)藥殘留回收率的計(jì)算：

式中，P為回收率（%）;C為測(cè)定的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg·kg-1）;A為樣品中所含該農(nóng)藥殘留的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg·kg-1）;B為添加的標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg·kg-1）。

精密度（RSD）的計(jì)算方法：

式中，SD為n次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)偏差（mg·kg-1）;Xi為第i次測(cè)量的測(cè)量值（mg·kg-1）;x-為n次測(cè)量的算術(shù)平均值（mg·kg-1）;n為測(cè)量次數(shù)。

2結(jié)果與分析

2.1前處理消耗情況

按照1.2.2試驗(yàn)設(shè)置，每個(gè)前處理方法共處理19個(gè)樣品。對(duì)2種前處理方法所消耗的時(shí)間、試劑和產(chǎn)生的廢液量進(jìn)行比較，見(jiàn)表1。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，B法即QuEChERS前處理方法的樣品處理用時(shí)較少、試劑用量和廢液量均大大少于A法，在消耗優(yōu)于A法。

2.2線性范圍和檢出限

將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用基質(zhì)液稀釋，配制成0.02mg·L-1、0.04mg·L-1、0.08mg·L-1、0.32mg·L-1、0.64mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別繪制質(zhì)量濃度（X軸）與峰面積（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)色譜儀最低響應(yīng)值為S=3N （N為儀器噪音水平）和標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中斜率的比值，計(jì)算檢出限（LOD）。結(jié)果表明，A、B2種前處理方法在0.04～0.40mg·L-1濃度范圍內(nèi)毒死蜱、丙溴磷和三唑磷線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999，檢出限均為0.002mg·kg-1，均能夠滿足測(cè)定水果中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的要求[11]，見(jiàn)表2。

2.3回收率和精密度

稱取沃柑勻漿樣品，分別添加3個(gè)不同濃度水平（0.04mg·kg-1、0.08mg·kg-1、0.4mg·kg-1）的3種農(nóng)藥（毒死蜱、丙溴磷、三唑磷）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按A和B方法進(jìn)行前處理，每個(gè)水平做6次重復(fù)試驗(yàn)，計(jì)算各添加水平的回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，在3個(gè)添加水平下，A法測(cè)定3種農(nóng)藥的平均回收率在100%～127.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為3.0%～11.8%;B法測(cè)定3種農(nóng)藥的平均回收率在72.9%～91.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.4%～11.1%，2種前處理方法測(cè)定的準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到多農(nóng)殘檢測(cè)方法的要求。

3結(jié)論

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)沃柑樣品分別進(jìn)行《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定法》和QuEChERS法前處理，分析樣品中毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的殘留回收率、方法檢出限、精密度，驗(yàn)證QuEChERS前處理方法對(duì)氣相色譜法測(cè)定農(nóng)藥殘留的可靠性。試驗(yàn)結(jié)果表明，采用QuEChERS方法處理的沃柑樣品，經(jīng)氣相色譜儀測(cè)定，毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的檢出限為0.002mg·kg-1，回收率在72.9%～91.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.4%～11.1%，完全符合農(nóng)殘檢測(cè)的要求。通過(guò)本研究，建立了QuEChERS前處理方法結(jié)合氣相色譜儀測(cè)定的方法，可用于沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的殘留檢測(cè)。該方法快速有效，大大提高了檢測(cè)效率，在沃柑大量上市時(shí)，能縮短檢測(cè)時(shí)間，及時(shí)供應(yīng)市場(chǎng)。

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（責(zé)任編輯周康）