海南17個辣椒品種對疫病抗性的鑒定

周洋 藍(lán)國兵 佘小漫 周冬梅 金寶紅 何自福

摘要：辣椒疫病是辣椒生產(chǎn)上主要病害之一，種植抗病品種是防治該病害最經(jīng)濟(jì)有效和綠色的措施。采用孢子懸浮液苗期灌根接種法，對海南生產(chǎn)上推廣應(yīng)用的17個辣椒品種進(jìn)行鑒定與評價。結(jié)果表明，不同辣椒品種對疫病的抗病性差異較大，金艷、泰麗、長艷3個品種表現(xiàn)免疫，紅妃、熱辣4號2個品種表現(xiàn)為高抗，金驕紅玉、湘辣十七號、金驕M6、權(quán)御天下4個品種表現(xiàn)為抗病，金驕3.0表現(xiàn)為中抗，而熱甜3號、熱甜5號、湘研珍麗、熱辣3號、湘研6A、金驕神龍和熱辣2號7個品種表現(xiàn)為高感?？梢?，朝天椒類對疫病的抗性優(yōu)于其他辣椒，線椒次之，而牛角椒和甜椒抗性較差。

關(guān)鍵詞：海南;辣椒;疫病;抗病性;孢子懸浮液苗期灌根法;病情指數(shù)

中圖分類號： S436.418? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）14-0138-04

辣椒（Capsicum annuum L.）是茄科辣椒屬的1年生或多年生作物，起源于中南美洲熱帶地區(qū)，明末清初時傳入我國[1]。近年來，我國辣椒種植面積在 150萬～200萬 hm2/年，占全國蔬菜總面積的 8%～10%，居于各種蔬菜首位[2]。辣椒因富含豐富的維生素并有芬芳的辛辣味而廣受消費(fèi)者歡迎，世界有近3/4的消費(fèi)者經(jīng)常食用辣椒或辣椒制品[3-5]。辣椒是海南省冬種主要作物之一，自1987年起海南就開始栽培辣椒，種植面積達(dá)3 000 hm2/年，且逐年增加，2017年海南省辣椒播種面積達(dá) 45 489 hm2，占蔬菜種植面積的17.29%，居于各種蔬菜種植面積之首[6]。

辣椒疫病是由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici L.）侵染引起的土傳病害，是辣椒生產(chǎn)上一種毀滅性病害[7-8]。1918年，首次在美國新墨西哥州發(fā)現(xiàn)辣椒疫病，其后陸續(xù)在歐洲、亞洲及拉丁美洲等國家和地區(qū)發(fā)生[9]。辣椒疫病也是海南省辣椒生產(chǎn)上主要病害之一，一般田塊發(fā)病率20%～30%，嚴(yán)重時可達(dá)70%以上，嚴(yán)重影響了海南省辣椒的生產(chǎn)發(fā)展[10]。目前，生產(chǎn)上對辣椒疫病的防治主要依靠農(nóng)藥，但長期大量施用農(nóng)藥，一方面極易導(dǎo)致疫霉菌對使用過的藥劑產(chǎn)生抗藥性，防效不斷下降;另一方面會造成辣椒果實農(nóng)藥殘留和污染環(huán)境。辣椒品種對疫病抗性存在明顯差異，種植抗病品種不僅可以控制疫病的發(fā)生與流行，而且可以避免藥劑防治帶來的負(fù)面影響。因此，種植抗病品種是防治辣椒疫病最經(jīng)濟(jì)、有效的措施[11-12]。

關(guān)于辣椒對疫病的抗性鑒定方法有如下報道。馬輝剛等報道，采用離體葉片接種法和孢子灌根接種法進(jìn)行辣椒疫病的抗性鑒定，其中離體葉片接種法因不能進(jìn)行量化而難以分級，只適合用于初步鑒定[13]。孢子灌根接種法模擬田間疫病發(fā)生過程中能較準(zhǔn)確地反映出品種的抗性[13-14]。本研究采用孢子灌根接種法對海南主栽的17個辣椒品種抗性進(jìn)行鑒定，以期為辣椒品種推廣種植及抗病育種提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 待鑒定辣椒品種

供試的17個辣椒品種均來自海南市場，具體見表1，這些品種在海南生產(chǎn)均有推廣應(yīng)用。

1.2 鑒定用菌株

辣椒疫病菌株為15BLLY1和15TSLY1，由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。

1.3 供試材料育苗

各品種種子先用10%磷酸三鈉溶液浸泡 20 min，清水沖洗 3 次;30 ℃恒溫催芽 3 d;然后播種于事先裝有經(jīng)消毒過的基質(zhì)（草炭 ∶蛭石=3 ∶1）的4×8育苗穴盤中，每穴播2粒，培養(yǎng)至6～7葉時用于接種。接種前間苗，每穴1株。

1.4 接種方法

1.4.1 孢子囊誘導(dǎo) 產(chǎn)孢囊培養(yǎng)基為20%貝奇野菜培養(yǎng)液，貝奇野菜汁200 mL，去離子水800 mL，配制后121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min，備用。

將辣椒疫霉菌株接種于20%的貝奇野菜培養(yǎng)液中，將菌絲塊盡可能分散開，在25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)3～5 d;當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)皿后，將其取出，用無菌水將菌絲清洗干凈，重新放入培養(yǎng)皿，加入無菌水，使其剛沒過菌絲，放入25 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);2 d后，鏡檢可見菌絲表面產(chǎn)生大量孢子囊。

1.4.2 游動孢子懸浮液的制備 將產(chǎn)生大量孢子囊的培養(yǎng)皿種加入適量的無菌水，使其淹沒菌絲，放入4 ℃冰箱中30 min，然后取出，用玻璃棒在菌絲表面輕輕來回刮動，使游動孢子充分釋放到水中。2個菌株的孢子懸浮液等體積、等濃度混合，將孢子懸浮液轉(zhuǎn)移至三角瓶中，用血球計數(shù)板測定孢子懸浮液濃度，稀釋至103 CFU/mL后立即用于接種[15]。

1.4.3 人工接種 采用游動孢子囊灌根法接種 6～7 葉期辣椒苗。接種前1 d苗盤淋足水，保證土壤處于接近飽和狀態(tài)。接種前，用玻璃棒在距辣椒苗根部2～3 cm處基質(zhì)上扎1個約5 cm深的孔，將接種液注入孔中，接種量為4 mL/株;每個品種重復(fù)3次，每個重復(fù)30株苗，以不接菌的作為空白對照。接種處理的辣椒苗放置于玻璃溫室中培養(yǎng)，室內(nèi)溫度25 ℃左右。

1.5 病情調(diào)查

當(dāng)接種處理出現(xiàn)病株時開始調(diào)查，每2 d調(diào)查1次，進(jìn)行逐株調(diào)查，記錄病株數(shù)和病級，計算各處理病株率和病情指數(shù)[16]。待各處理充分發(fā)病且病情較穩(wěn)定時，統(tǒng)計最終各處理病株率和病情指數(shù)。

辣椒疫病個體病株病情分級標(biāo)準(zhǔn)[17]：

0級，無病癥;

1級，幼苗根莖部輕微變黑，葉片不萎蔫或可恢復(fù)性萎蔫;

2級，幼苗根莖部變黑達(dá)1～2 cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫，下部葉片偶有脫落;

3級，幼苗根莖部變黑超過2 cm，葉片明顯萎蔫或落葉明顯;

4級，幼苗根莖部變黑縊縮，除生長點(diǎn)外全部落葉或植株萎蔫;

5級，植株枯死;

病情指數(shù)=∑（各級病株數(shù)×相對級數(shù)）/（調(diào)查總株數(shù)×最高病情級別的代表數(shù)值）× 100。

辣椒品種對疫病抗性水平評價標(biāo)準(zhǔn)：

免疫（I），病情指數(shù)為0;

高抗（HR），0<病情指數(shù)≤10;

抗?。≧），10<病情指數(shù)≤30;

中抗（MR），30<病情指數(shù)≤50;

感?。⊿），50<病情指數(shù)≤70;

高感（HS），70<病情指數(shù)

2 結(jié)果與分析

接種后第2天開始調(diào)查，每2 d調(diào)查1次。接種后第6天，出現(xiàn)發(fā)病植株，接種后第20 d，各處理辣椒苗病情趨于穩(wěn)定，以此時的調(diào)查結(jié)果進(jìn)行品種抗性評價，用DPS 7.05版對調(diào)查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析（表2）。調(diào)查結(jié)果表明，供試的17個辣椒品種發(fā)病率和病情指數(shù)存在明顯差異，其中長艷、泰麗和金艷3個品種的病情指數(shù)最低，均為0;熱甜3號、熱甜5號和湘研珍麗3個品種的病情指數(shù)最高，均為100。方差分析結(jié)果顯示，表現(xiàn)為高感的7個辣椒品種，除熱甜3號、熱甜5號和香研珍麗外，其余4個品種之間差異顯著;熱辣2號與金驕3.0存在顯著性差異;表現(xiàn)抗病的4個品種權(quán)御天下、金驕M6及湘辣十七號之間差異顯著，湘辣十七號與金驕紅玉差異不顯著;表現(xiàn)高抗的熱辣4號與紅妃之間差異不顯著;表現(xiàn)免疫的品種病情指數(shù)均為0，無顯著性差異。

在供試的17個辣椒品種中，金艷、泰麗、長艷3個品種表現(xiàn)免疫，占供試材料的17.65%;紅妃、熱辣4號2個品種表現(xiàn)為高抗，占11.76%;金驕紅玉、湘辣十七號、金驕M6、權(quán)御天下4個品種表現(xiàn)為抗病，占 23.53%;金驕3.0表現(xiàn)為中抗，占5.88%;熱甜3號、熱甜5號、湘研珍麗、熱辣3號、湘研6A、金驕神龍、熱辣2號等7個品種表現(xiàn)為高感，占41.18%。

不同類型的辣椒對疫病抗性存在一定差異。7個朝天椒品種中，金艷、泰麗、長艷3個品種表現(xiàn)為免疫，紅妃表現(xiàn)為高抗，金驕M6和權(quán)御天下表現(xiàn)為抗病，金驕3.0表現(xiàn)為中抗;3個線椒品種中，熱辣4號表現(xiàn)為高抗，湘辣十七號表現(xiàn)為抗病，而金驕神龍表現(xiàn)為高感;3個牛角椒品種熱辣3號、湘研6A、湘研珍麗均表現(xiàn)高感?？梢姡旖穼σ卟〉目剐云毡檩^好，線椒次之，而牛角椒和甜椒抗性較差。至于黃燈籠、美人椒，因為在本研究中僅1個品種，所以其抗性表現(xiàn)難以定論。

3 結(jié)論與討論

采用孢子懸浮液灌根法鑒定來自海南生產(chǎn)上的17個辣椒品種對疫病的抗性，金艷、泰麗、長艷3個品種表現(xiàn)免疫，紅妃、熱辣4號2個品種表現(xiàn)為高抗，金驕紅玉、湘辣十七號、金驕M6、權(quán)御天下4個品種表現(xiàn)為抗病，金驕3.0表現(xiàn)為中抗，而熱甜3號、熱甜5號、湘研珍麗、熱辣3號、湘研6A、金驕神龍和熱辣2號7個品種表現(xiàn)為高感，朝天椒類對疫病的抗性優(yōu)于其他辣椒，線椒次之，而牛角椒和甜椒抗性較差。

關(guān)于辣椒對疫病的抗病性鑒定，目前尚未有統(tǒng)一的方法，許多因素如接種方法、接種濃度、植株生育期及疫霉菌的致病力等對鑒定結(jié)果都有不同程度的影響[18-19]。孢子懸浮液灌根接種方法操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定，應(yīng)用較普遍[20]。本研究選用來源于不同地區(qū)的2株致病力中等的辣椒疫霉菌菌株，于辣椒6～7葉苗期進(jìn)行灌根接種，對海南的辣椒品種進(jìn)行評價，取得較好的結(jié)果。

戚仁德等研究發(fā)現(xiàn)，辣椒品種對疫病的抗性與疫霉菌株的致病力相關(guān)，不同來源的辣椒疫霉菌株對辣椒品種的致病力不同，同樣一個辣椒品種對不同辣椒疫霉菌株的抵抗力不同[21]。這說明用1個致病菌株鑒定出來的辣椒品種抗性，其抗性結(jié)果是有局限的。因此，本研究選用來源于不同地區(qū)的2株致病力中等的辣椒疫霉菌菌株進(jìn)行等量混合接種，以彌補(bǔ)單一菌株的致病力不同導(dǎo)致的鑒定結(jié)果偏差。一個品種在田間的抗性表現(xiàn)，與品種自身的抗病基因、病原菌種群的致病力變異、溫濕度、降雨、種植時期以及栽培管理等因素密切相關(guān)。因此，建議辣椒育種部門在廣泛收集辣椒種質(zhì)資源的同時，積極與植物病理學(xué)家合作，在品種抗性水平和抗性機(jī)制上進(jìn)行深入研究，培育出具有不同抗性基因的辣椒品種，以供生產(chǎn)上需要。農(nóng)戶在種植抗病品種的同時，應(yīng)加強(qiáng)栽培管理，合理施肥，創(chuàng)造一個有利于辣椒生長，不利于病原菌生長繁殖的環(huán)境條件，從而減少病原菌數(shù)量，達(dá)到控制病害的目的[22]。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳 耿，彭榮鋒，伍泰旭. 我國辣椒品種市場需求變化趨勢及育種對策[J]. 農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2019，39（3）：50-51.

[2]王立浩，張正海，曹亞從，等. “十二五”我國辣椒遺傳育種研究進(jìn)展及其展望[J]. 中國蔬菜，2016（1）：1-7.

[3]Attilio N，F(xiàn)uria E，Sindona G，et al. Multivariate class modeling techniques applied to multielement analysis for the verification of the geographical origin of chili pepper[J]. Food Chemistry，2016，206：217-222.

[4]Pino J，González M，Ceballos L，et al. Characterization of total capsaicinoids，colour and volatile compounds of Habanero chilli pepper （Capsicum chinense Jack.） cultivars grown in Yucatan[J]. Food Chemistry，2007，104（4）：1682-1686.

[5]戴雄澤，劉志敏. 辣椒素類物質(zhì)研究進(jìn)展[J]. 辣椒雜志，2005（4）：13-16.

[6]海南省統(tǒng)計局，國家統(tǒng)計局海南調(diào)查總隊.海南統(tǒng)計年鑒2018（漢英對照）[M]. 北京：中國統(tǒng)計出版社，2018：277.

[7]Sy O，Bosland P W，Steiner R. Inheritance of phytophthora stem blight resistance as compared to phytophthora root rot and phytophthora foliar blight resistance in Capsicum annuum L.[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science，2005，130（1）：75-78.

[8]Thabuis A，Palloix A，Pflieger S，et al. Comparative mapping of Phytophthora resistance loci in pepper germplasm：evidence for conserved resistance loci across solanaceae and for a large genetic diversity[J]. Theoretical and Applied Genetics，2003，106（8）：1473-1485. [HJ1.8mm]

[9]王婷婷. 辣椒疫病生防制劑的研制[D]. ?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2016.

[10]何 娜，曾會才. 辣椒疫病防治的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（8）：64-65，67.

[11]蓬桂華，邢 丹，牟玉梅，等. 貴州地方辣椒抗疫病性鑒定[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（20）：64-65，73.

[12]沈會芳，蒲小明，周佳暖，等. 辣椒品種對疫病的抗性鑒定[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（1）：46-47.

[13]馬輝剛，何烈干，陳學(xué)軍，等. 2種方法鑒定辣椒疫病抗性研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013，35（3）：536-542.

[14]郝 衛(wèi)，張 慧，王 瑩. 辣椒對疫霉抗性的快速鑒定[J]. 植物保護(hù)，2018，44（2）：145-148，176.

[15]吳麗萍，咸文榮，郭青云.19個進(jìn)口辣椒品種對疫霉菌的抗性鑒定[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016（19）：5066-5068.

[16]Hausbeck M K，Lamour K H. Phytophthora capsici on vegetable crops：research progress and management challenges[J]. Plant Disease，2004，88（12）：1292-1303.

[17]全國蔬菜標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會. 辣椒抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程 第1部分：辣椒抗疫病鑒定技術(shù)規(guī)程：NY/T 2060.1—2011[S]. 北京：中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，2011.

[18]Kim F S，Hwang B K. Virulence to Korea pepper cultivars of Phytophthora capsici form different geographic areas[J]. Plant Disease，1992，76（5）：486-489.

[19]Hartman G L，Wang T C. Phytophthora blight of pepper：screening for disease resistance[J]. Tropical Pest Management，1992，38（3）：319-322.

[20]易圖永，張寶璽，謝丙炎，等. 辣椒疫病3種接種方法的比較[J]. 中國蔬菜，2003（2）：16-18.

[21]戚仁德，丁建成，顧江濤，等. 辣椒疫霉致病力分化的初步研究[J]. 植物保護(hù)學(xué)報，2002，29（2）：189-190.

[22]譚清群，袁 潔，楊學(xué)輝，等. 貴州省辣椒新品種對疫病和青枯病的抗性鑒定研究[J]. 種子，2014，33（11）：82-85.

收稿日期：2019-08-21[HJ1.5mm]

基金項目：國家重點(diǎn)研發(fā)計劃（編號：2018YFD0201200）;廣東省果菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊項目（編號：2019KJ110）。

作者簡介：周 洋（1984—），男，山東聊城人，碩士，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)作物病蟲害防控等技術(shù)推廣。Tel：（0898）25510439;E-mail：279489688@qq.com。

通信作者：何自福，博士，研究員，主要從事植物病理學(xué)研究，Tel：（020）87597476，E-mail：hezf@gdppri.com;金寶紅，高級農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣，Tel：（0898）25510439，E-mail：dfjbhong@sina.com。