新會陳皮黃酮類化合物的提取及其殺菌抗腫瘤活性研究

鐘桂云，鄭曉瑞

（江門職業(yè)技術(shù)學(xué)院 材料技術(shù)系，廣東 江門 529090）

陳皮是橘的干燥成熟果皮，兼具藥用和食用價值，最早記載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》。大量醫(yī)學(xué)研究表明，陳皮在殺菌、抗氧化、抑制腫瘤等方面均有很好的作用［1-4］。陳皮按產(chǎn)地不同分為 “陳皮”和“廣陳皮”。廣陳皮以產(chǎn)于廣東省江門市新會會城梅江塞口圍的新會陳皮最為出名。近幾十年來，大量文獻(xiàn)報道了有關(guān)新會陳皮的有效成分及生理活性的研究。研究表明，新會陳皮具有抗氧化、抗癌、殺菌等多種生理功效［5，6］，而主要功效成分為陳皮多糖、黃酮類成分、揮發(fā)油［7-10］。研究表明，陳皮藥效作用是其多種成分協(xié)同作用的結(jié)果。

本文在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上對新會陳皮中主要活性成分黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行研究比較，確定了影響提取效率的主要因素和提取的最佳實(shí)驗(yàn)條件。研究表明黃酮類化合物的提取效率主要受提取的溶劑的種類、原料和溶劑比例、提取溫度、提取次數(shù)及提取時間等因素的影響。本文對新會陳皮黃酮類提取物進(jìn)行了生物活性測試，殺菌和體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明新會陳皮黃酮類提取物具有良好的殺菌效果和抗腫瘤活性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和藥品

YP202電子天平 （上海精密科學(xué)儀器有限公司）；RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)式真空泵 （鞏義市英峪予華）。

新會陳皮購買于江門市國大藥房，粉碎后備用。

1.2 新會陳皮黃酮的提取實(shí)驗(yàn)［11，12］

用天平準(zhǔn)確稱取3.0000 g新會陳皮干粉樣品于圓底燒瓶中，用乙醇和水作提取劑，按一定的料液比進(jìn)行提取，在不同溫度下加熱提取一定時間后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中除去溶劑，得到黃酮提取液。

1.3 生物活性實(shí)驗(yàn)

1.3.1 殺菌活性實(shí)驗(yàn)［13］

采用菌體生長速率測定法，將一定量藥劑溶解在適量丙酮內(nèi)，用含有200 mg／L乳化劑水溶液稀釋至所需濃度，然后各吸取1 mL藥液注入培養(yǎng)皿內(nèi)，再分別加入9 mL培養(yǎng)基，搖勻后制成50 mg／L的含藥平板，以添加1 mL滅菌水的平板做空白對照。用直徑4 mm的打孔器沿菌絲外緣切取菌盤，移至含藥平板上，設(shè)3個重復(fù)。將培養(yǎng)皿放在 （24±1）℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48 h后調(diào)查量取菌盤擴(kuò)展直徑，計(jì)算平均值，按照下式計(jì)算相對抑菌率。結(jié)果見表1。

1.3.2 腫瘤細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)［14］

培養(yǎng)正常生長的腫瘤細(xì)胞，用10 mL含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的新生牛血清的RPM I1640培養(yǎng)液配成單細(xì)胞懸液，以5×104cell／mL細(xì)胞懸液接種到96孔板中 （每孔200μL），于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，加入被試藥物 （終質(zhì)量濃度為5 μg／mL），繼續(xù)培養(yǎng)5 d，然后棄培養(yǎng)液 （必要時離心），每孔加入0.04%MTT（3-［4，5-dimethyltjiazol-2-yl］ -2，5-diphenyltetrazolium bromide；Thiazoyl blue）100μL，同樣條件下培養(yǎng)4 h。棄培養(yǎng)液 （必要時離心），加入DMSO 150μL／孔，混合均勻后于測定波長570 nm，參比波長655 nm分別記錄處理液和對照液吸收度，按下式計(jì)算藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：

腫瘤細(xì)胞生長抑制率＝（對照A-給藥A）／對照A×100%

判斷標(biāo)準(zhǔn)：初篩質(zhì)量濃度5μg／ml下，抑制率高于50%者為有效。結(jié)果見表2。

表1 黃酮類提取物的殺菌活性結(jié)果Table 1Bactericidal activity levels of flavonoids

表2 黃酮類提取物體外抗腫瘤活性結(jié)果Table 2 Theantitumor activity of flavonoids in vitro

2 結(jié)果與討論

2.1 提取實(shí)驗(yàn)

新會陳皮中的黃酮類物質(zhì)提取的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)條件對新會陳皮黃酮提取效率的影響很大。實(shí)驗(yàn)表明，主要的影響因素有乙醇和水的比例、原料和溶劑的比例、提取溫度、提取次數(shù)及提取時間，其中乙醇和水的比例對提取率的影響很大，乙醇濃度高能促進(jìn)黃酮的提取。經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定提取黃酮的最佳工藝條件為：乙醇和水的比例為4∶1（體積比）、料液比1∶30、提取溫度75℃、提取時間2.5h，在此條件下提取率為0.75%。

2.2 殺菌活性

我們測定了黃酮類提取物對7種病菌的殺菌活性，由普篩結(jié)果可以看出：化合物對蘆筍莖枯、水稻紋枯病、水稻曲病具有很強(qiáng)的抑制作用，殺死率均為100%，對其它4種病菌具有中等強(qiáng)度的抑制作用。

2.3 抗腫瘤活性

黃酮類提取物對人肺癌細(xì)胞株A-549、結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8和肝癌細(xì)胞株Bel-7402的抑制率見表2。由表2看出，黃酮類提取物對3種腫瘤細(xì)胞的抑制作用很強(qiáng)，對A-549細(xì)胞和Bel-7402具有很強(qiáng)的抑制作用，抑制率超過了90%，對HCT-8具有中等強(qiáng)度的抑制作用。

3 結(jié)論

本文通過對新會陳皮黃酮類提取物生物活性的研究，證實(shí)新會陳皮黃酮類提取物具有良好的殺菌和抗腫瘤活性。近年新會柑的種植面積大幅增加，本文的研究在利用地方經(jīng)濟(jì)特色的基礎(chǔ)上，充分挖掘新會陳皮的藥用價值，為新會陳皮在現(xiàn)代醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及人類健康方面提供更加廣闊的應(yīng)用前景。