決明子炮炙前后對(duì)菊楂決明飲有效成分及瀉下作用的影響

李筱玲，鄧寒霜，霍鴻飛，張亦琳

（1. 商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，陜西 商洛 726000；2. 陜西秦嶺特色生物資源產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，陜西 商洛 726000）

菊楂決明飲為民間驗(yàn)方，具有平肝疏風(fēng)、活血化瘀、潤(rùn)腸通便、降血壓等功效，由菊花、生山楂片、決明子三味中藥組成，其制備方法為取菊花10 g，生山楂片、決明子各15 g，用水煎煮2次后，合并煎煮液即得?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，菊楂決明飲對(duì)于高血壓和高血脂患者具有較好的療效，對(duì)陰虛陽(yáng)亢、大便秘結(jié)等癥更有效，有預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化（AS）和心腦血管病作用[1]。菊楂決明飲可藥食兩用，民間多作為茶飲，是用來(lái)治療心腦血管疾病常用的中醫(yī)食療方，長(zhǎng)期服用可降血壓、降血脂、減肥，特別適用于中老年人。處方中的決明子為豆科植物決明或小決明的干燥成熟種子，主要有效成分是蒽醌類和萘并吡喃酮類[2]。橙黃決明素是決明子中重要的蒽醌類成分，能明顯降低高血脂癥大鼠體內(nèi)的膽固醇、甘油三脂和低密度脂蛋白膽固醇的含量[3]，主要副作用為腸蠕動(dòng)增加、大便松軟、排便次數(shù)增加等[4]。本文擬通過(guò)探究生決明和不同炮制工藝炒決明對(duì)菊楂決明飲中有效成分溶出及其瀉下作用的影響情況，為臨床依據(jù)患者實(shí)際選用不同決明子炮制品制備菊楂決明飲提供幫助。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TB-215D電子天平[丹佛儀器（北京）]；TDL-40C離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京科技永興儀器公司）；KH5200E超聲波清洗儀（昆山市科學(xué)儀器公司）；LC-20A高效液相色譜儀[日本島津（中國(guó)）]。

1.2 試藥和動(dòng)物

菊花（批號(hào)：20180424）、山楂（批號(hào)：20180607）、決明子（批號(hào)：20180738）（國(guó)藥控股商洛大藥房）；橙黃決明素對(duì)照品（批號(hào)：B W B 5 0 1 7 9）、大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：BWB50252）（北京世紀(jì)奧科）；復(fù)方地芬諾酯片（批號(hào)：20191102，長(zhǎng)春長(zhǎng)江制藥）；麻仁丸（批號(hào)：200606，湖北諾得勝制藥）。SPF級(jí)昆明小鼠，體重20～30 g，共70只[西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證：SCXK（陜）2008-001]。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同炮制規(guī)格決明子的制備

生決明：取決明子凈制去雜，即得。

炒決明：取9份生決明，每份約200 g，分3組。分別于160，180，210 ℃下炒制12 min，取出，放涼，即得。

2.2 菊楂決明飲中有效成分含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil Gold十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1 %磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～15 min，40 %A；15～30 min，40 %～90 %A；30～40 min，90 % A）；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm。進(jìn)樣量：10 μl；流速：1.0 ml/min[5]。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃酚8.4 mg、橙黃決明素5.33 mg，用乙酸乙酯-無(wú)水乙醇（1:2）混合溶劑溶解、定溶至25 ml，精密量取上述溶液1 ml用相同溶劑定溶至10 ml，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取菊花、山楂、決明子藥材適量，粉碎后過(guò)50目篩。分別精密稱取上述藥材粉末，菊花1.0 g 、山楂1.5 g、決明子1.5 g，置入具塞三角瓶中，精密加入80 %乙醇100 ml，塞密，稱定重量，于65 ℃超聲提取50 min，再次稱定重量，以80 %乙醇補(bǔ)足失重，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液2，4，8，10，16，20 μl注入液相色譜儀，按2.2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。得大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=1×106X+19387，R2=0.9991，表明大黃酚在濃度4.26～42.6 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。橙黃決明素的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=7×106X+6170.7，R2=0.9999；表明橙黃決明素在濃度為6.72～67.2 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 含量測(cè)定及結(jié)果分析 按照2.2.3項(xiàng)下方法，分別用生決明、炒決明制備菊楂決明飲供試品溶液，照2.2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同處理菊楂決明飲中有效成分含量

由表1可見(jiàn)，炒決明中橙黃決明素及大黃酚含量明顯比生品高，其中180 ℃炒決明樣品的橙黃決明素含量最高，210 ℃炒決明的大黃酚含量最高。分析原因可能是決明子中所含蒽醌苷在炒制過(guò)程中受熱分解為苷元所致。

2.3 決明子炮制規(guī)格對(duì)菊楂決明飲瀉下作用的影響

2.3.1 受試藥物的制備

2.3.1.1 稱取菊花10 g、山楂15 g、決明子（搗碎）15 g置入容器，加水煎煮3次。前兩次液料比為8:1，煎煮時(shí)間30 min；最后1次為液料比為6:1，煎煮時(shí)間20 min。過(guò)濾，合并3次濾液，減壓濃縮至含決明子原藥0.375 g/ml的藥液，即得菊楂決明飲藥液，冷藏備用。

2.3.1.2 取復(fù)方地芬諾（每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg）研磨成粉后加水配制成混懸液。

2.3.1.3 麻仁丸研磨粉碎加水制得所需濃度的混懸液。給藥前先將藥液配成含2 %墨汁的受試藥物。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組給藥方案 取SPF級(jí)昆明小鼠70只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為7組，每組10只。第一組為復(fù)方地芬諾酯模型組（10 mg/kg灌胃）；第2組為麻仁丸陽(yáng)性對(duì)照組（4 g/kg灌胃）；第3～6組分別為生決明組、160 ℃炒決明組、180 ℃炒決明組、210 ℃炒決明組，給藥量為相當(dāng)于原藥7.5 g/kg；第7組為生理鹽水組，給藥與生決明組等量，苦味酸標(biāo)記。

2.3.3 小鼠便秘模型的制備 各組小鼠禁食不禁水24 h后，除生理鹽水組給予生理鹽水（0.02 ml/g體重），其他各組灌胃10 mg/kg的復(fù)方地芬諾酯，計(jì)時(shí)30 min后建立便秘模型。模型組與生理鹽水組小鼠的首次排黑便時(shí)間和黑便數(shù)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則說(shuō)明小鼠便秘模型建立成功[6]。

2.3.4 瀉下排便實(shí)驗(yàn)方法 造模成功后，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天小鼠禁食4 h，各給藥組分別灌胃含2 %墨汁的受試藥液，生理鹽水對(duì)照組和模型組灌胃含2 %墨汁的生理鹽水，給藥體積為0.2 ml/10g體重。灌胃后小鼠均單籠飼養(yǎng)，并恢復(fù)正常飼料和飲水，然后觀察瀉下情況。連續(xù)記錄6 h內(nèi)每只小鼠開(kāi)始排出黑便的時(shí)間及6 h黑便總數(shù)量。比較生決明與炒決明子的菊楂決明飲對(duì)便秘型小鼠排便的影響差異性[7]。

2.3.5 菊楂決明飲瀉下作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 觀察、記錄首次排黑便時(shí)間和黑便數(shù)至給藥6 h后。采用SPSS19.0（中文版）軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和均值分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)（±s）表示，各組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05具有顯著統(tǒng)計(jì)意義，P＜0.01表示差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表2～4。

表2 不同處理菊楂決明飲對(duì)小鼠排便的影響

表3 不同處理組實(shí)驗(yàn)小鼠首次排黑便時(shí)間對(duì)照表

表4 炮制前后不同組6 h黑便點(diǎn)數(shù)對(duì)照表

由表2可見(jiàn)，模型組首次排黑便時(shí)間最晚，6 h后黑便點(diǎn)數(shù)最少；麻仁丸組明顯比模型組的首次排黑便時(shí)間最早，6 h后黑便點(diǎn)數(shù)最多；由表3和表4可見(jiàn)，模型組與生理鹽水對(duì)照組比較，黑便總點(diǎn)數(shù)和開(kāi)始排黑便時(shí)間有明顯差異（P＜0.01），表明便秘模型建立成功。炒決明組與生決明組比較，首次排黑便時(shí)間明顯更晚、6 h黑便點(diǎn)數(shù)明顯更少（P＜0.01），且炒制溫度越高，實(shí)驗(yàn)小鼠首次排便時(shí)間越晚、排便量越少，表明以炒制決明子制備菊楂決明飲，可顯著降低其瀉下作用。分析原因可能是炒制高溫時(shí)，決明子中的瀉下成分蒽醌苷受熱分解，同時(shí)決明子中油脂也會(huì)部分破壞，造成瀉下作用減弱。

3 結(jié)論與討論

本文研究發(fā)現(xiàn)，以炒決明子制備的菊楂決明飲中大黃酚、橙黃決明素含量較生決明有明顯增加，同時(shí)其瀉下的作用也得到明顯緩和，表明炒制有助于具有瀉下作用的蒽醌苷類成分分解為游離蒽醌，有助于降血壓、降血脂類有效成分的溶出。有鑒于此，臨床應(yīng)用菊楂決明飲時(shí)，應(yīng)視患者辨證情況選用不同炮制規(guī)格的決明子組方。辨證論治是中醫(yī)獨(dú)有特色，中藥藥味不變時(shí)，可通過(guò)中藥炮制來(lái)調(diào)整或者糾正藥物的偏性、緩和藥性[8-9]。決明子經(jīng)過(guò)炒制后瀉下作用緩和，用于菊楂決明飲中，使該方的瀉下作用相應(yīng)減弱。因此對(duì)于高血脂人群，脾虛便溏者，在服用菊楂決明飲時(shí)應(yīng)選用炒決明，以避免出現(xiàn)腹瀉等不良反應(yīng)。