燈盞花素注射劑質(zhì)量控制研究進(jìn)展

李響明，孫勝斌，姜國(guó)志

1.河北省中藥注射液工程技術(shù)研究中心，河北 石家莊 051430; 2.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430; 3.中藥注射劑新藥技術(shù)開(kāi)發(fā)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 051430

燈盞花素收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部[1]402-403植物油脂和提取物項(xiàng)下，由菊科植物短葶飛蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.中提取分離所得，其主要有效成分為野黃芩苷(C21H18O12)。燈盞花素具有廣泛、確切的藥理活性，如抗組織缺血再灌注損傷、抗血栓、增加血流量、改善微循環(huán)、擴(kuò)張血管、降低血黏度、調(diào)節(jié)血脂、抗氧化等[2-3]。作為臨床治療心血管類疾病的常用藥，以燈盞花素為原料的制劑中口服和靜脈注射液是當(dāng)前制劑研究的主流[4]，其中注射劑產(chǎn)品包括燈盞花素注射液、注射用燈盞花素、燈盞花素氯化鈉注射液、燈盞花素葡萄糖注射液，前兩者的臨床應(yīng)用較廣。

燈盞花素注射液、注射用燈盞花素均以燈盞花素為原料，添加適宜輔料，應(yīng)用現(xiàn)代制劑技術(shù)分別制成了注射用濃溶液、注射用無(wú)菌粉末，兩者均有活血化瘀、通絡(luò)止痛的功效。用于中風(fēng)及其后遺癥、冠心病、心絞痛[5]。燈盞花素注射液執(zhí)行《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第二十冊(cè)(WS3-B-3822-98)[6]102，注射用燈盞花素現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部[1]1110-1111，2個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)差異較大。本文對(duì)比分析了以上2個(gè)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不同點(diǎn)，并整理了近20年來(lái)上述2個(gè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究文獻(xiàn)，為規(guī)范和提高產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比分析

2個(gè)產(chǎn)品的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)差異較大，鑒別、檢查、含量測(cè)定均有不同。下面將2個(gè)產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比分析，見(jiàn)表1。

表1 燈盞花素注射液與注射用燈盞花素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比

1.1 鑒別

鑒別是根據(jù)制劑的理化特性制定的用于鑒別藥品真?zhèn)蔚姆椒ǎ虼艘蠓椒▽傩詮?qiáng)。水針劑鑒別共3項(xiàng)：1)采用了黃酮類化合物經(jīng)典的鹽酸-鎂粉還原顯色反應(yīng)，該鑒別專屬性不夠強(qiáng)；2)使用紫外分光光度法確認(rèn)黃酮類成分苯甲?；?284 nm附近)和桂皮?；?335 nm附近)的最大吸收波長(zhǎng)，標(biāo)準(zhǔn)要求的最大吸收波長(zhǎng)為固定值，未兼顧不同設(shè)備廠家、型號(hào)的分析儀器間吸收波長(zhǎng)稍有波動(dòng)的可能性；3)利用黃酮類化合物在365 nm下的熒光特性進(jìn)行薄層色譜鑒別，該鑒別中使用的燈盞花素對(duì)照品在多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)目錄中查詢均無(wú)此標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，有人認(rèn)為燈盞花素即為燈盞花乙素(野黃芩苷)，該處表述有待進(jìn)一步規(guī)范。粉針劑鑒別照“含量測(cè)定”項(xiàng)下的方法實(shí)驗(yàn)，在含量測(cè)定的同時(shí)完成鑒別，方法方便、準(zhǔn)確，節(jié)約對(duì)照品。

1.2 檢查

檢查項(xiàng)目的設(shè)定與制劑的劑型和臨床使用途徑有關(guān)，除了對(duì)制劑中雜質(zhì)、有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制外，pH/酸堿度、溶液的澄清度、不溶性微粒、熱原與無(wú)菌等安全性項(xiàng)目的檢查為臨床的安全使用提供了基礎(chǔ)性的保障，全面的質(zhì)量檢測(cè)是產(chǎn)品上市前質(zhì)量控制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。水針劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已實(shí)施二十多年，粉針劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)自2015年生效，整體來(lái)看，粉針劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求相對(duì)更高，這可能與標(biāo)準(zhǔn)建立時(shí)制劑的分析技術(shù)水平有關(guān)。粉針劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在安全性方面更嚴(yán)格，過(guò)敏試驗(yàn)、降壓物質(zhì)、異常毒性、溶血與凝聚的檢測(cè)保證了上市產(chǎn)品的質(zhì)量。2個(gè)產(chǎn)品均有的項(xiàng)目，也略有不同，比如有關(guān)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹(shù)脂、草酸鹽、鉀離子)和熱原。粉針劑檢查時(shí)溶液中含燈盞花素(野黃芩苷)的濃度更大，其中有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)粉針劑濃度約是水針劑最大濃度的2.5倍，粉針劑熱原檢查家兔注射的劑量是水針劑的1.6倍。

關(guān)于燈盞花素原料相關(guān)物質(zhì)的研究中，已有文獻(xiàn)明確含有6-羥基山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸、燈盞花甲素、野黃芩素和芹菜素4個(gè)相關(guān)物質(zhì)[7-8]；也有研究從注射用燈盞花素原料中分離鑒定出6-羥基芹菜素-6-O-葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸苷、5，7，8，3′，4′，5′-六羥基黃酮-7-O-葡萄糖醛酸苷、5，6，7，3′，4′-五羥基黃酮-7-O-葡萄糖醛酸苷及其異構(gòu)體、patuletin-3-O-葡萄糖醛酸苷、甲氧基燈盞乙素、燈盞甲素、異鼠李素-7-O-葡萄糖醛酸苷、香葉木素-7-O-葡萄糖醛酸苷、野黃芩素、燈盞乙素甲酯、燈盞乙素乙酯、芹菜素13個(gè)雜質(zhì)[9]。因此為了保證臨床用藥安全，進(jìn)行相關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制顯的很有必要。2個(gè)產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)/相關(guān)物質(zhì)的檢查均使用高效液相色譜法(HPLC)，除檢測(cè)波長(zhǎng)相同外，流動(dòng)相、供試品溶液和對(duì)照品溶液的濃度、計(jì)算方法均不同。主成分自身對(duì)照法是目前《中華人民共和國(guó)藥典》等有關(guān)物質(zhì)檢查的常用方法。已有文獻(xiàn)指出在燈盞花素注射液有關(guān)物質(zhì)的色譜條件下主峰峰形拖尾[10]。

1.3 含量測(cè)定

含量測(cè)定是對(duì)目前制劑中已知的活性物質(zhì)、代表性化合物或大類成分的控制，與原料的物質(zhì)基礎(chǔ)、制劑的生產(chǎn)工藝緊密相關(guān)，是保證臨床治療效果的前提。燈盞花素為黃酮類化合物，注射用濃溶液利用其紫外吸收的特性，采用紫外-可見(jiàn)分光度法檢測(cè)，且利用百分吸收系數(shù)計(jì)算，省去了對(duì)照品的使用，降低了檢測(cè)成本。但也有文獻(xiàn)指出該方法專屬性不強(qiáng)，測(cè)定的是總黃酮類化合物[11-14]。粉針劑含量測(cè)定使用以野黃芩苷為對(duì)照品的高效液相色譜法，且色譜條件與相關(guān)物質(zhì)檢查的條件一致，使得分析工作變得簡(jiǎn)便、高效。2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的限度均采用百分標(biāo)示量，水針劑含量的限度范圍明顯窄于粉針劑的范圍。

燈盞花素注射液、注射用燈盞花素均以燈盞花素為原料制成的注射劑，兩者的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在差距，注射用燈盞花素質(zhì)量控制相對(duì)更嚴(yán)格。其中燈盞花素注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步規(guī)范，適當(dāng)增加部分安全性方面的檢查項(xiàng)目并優(yōu)化有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定的方法，提高質(zhì)量控制水平。

2 質(zhì)控研究進(jìn)展

在《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第二十冊(cè)中燈盞花素注射液、注射用燈盞花素[6]174質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)除因制劑存在狀態(tài)不同，而某些檢查項(xiàng)目不同外，大多數(shù)項(xiàng)目的質(zhì)量控制方法類似。注射用燈盞花素在《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版、2009年增補(bǔ)本[15]中有了明顯提高，在2010年版[16]848-849中僅修訂了熱原檢查項(xiàng)注射的溶液濃度，在2015年版[1]1110-1111中未做修訂。筆者查閱了近20年的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)關(guān)于燈盞花素注射液的質(zhì)量研究較多，涉及含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)、指紋圖譜、安全性項(xiàng)目等，還有少量關(guān)于注射用燈盞花素中輔料測(cè)定的研究等，以下將分別綜述。

2.1 鑒別

燈盞花素注射液鑒別(2)中，本品用甲醇稀釋后，要求在284 nm及335 nm處應(yīng)有最大吸收。有文獻(xiàn)[17]指出，不同廠家、不同等級(jí)乙醇對(duì)紫外鑒別的結(jié)果有影響，主要是甲醇溶劑中的雜質(zhì)干擾了供試品的吸收，提示在測(cè)定時(shí)要使用無(wú)干擾的甲醇。

2.2 有關(guān)物質(zhì)/相關(guān)物質(zhì)

雖燈盞花素原料純度已經(jīng)很高，但仍有約2.0%的雜質(zhì)類物質(zhì)，為了保證臨床用藥安全，開(kāi)展相關(guān)物質(zhì)的研究很有必要。鄭金鳳等[10]建立了HPLC測(cè)定燈盞花素注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法，以甲醇-0.1 mol·L-1醋酸銨溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0)(32∶68)為流動(dòng)相，335 nm波長(zhǎng)，柱溫 30 ℃下測(cè)定，主峰和雜質(zhì)峰完全分離，收集的10批樣品中除溶劑峰外，各雜質(zhì)峰峰面積之和占主峰峰面積3.53%～29.19%，這一結(jié)果與使用現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)6[102]中有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法所得結(jié)果相比，明顯要高。申穎等[18]使用HPLC，以甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶1)為流動(dòng)相，335 nm下測(cè)定了不同廠家的3批注射用燈盞花素有關(guān)物質(zhì)，按歸一法計(jì)算后樣品溶液除主成分峰及首峰以外的其他峰面積之和占總峰面積(除首峰外)的0.69%～0.78%。代勇等[14]采用HPLC建立了燈盞花素注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，以甲醇-0.1 mol·L-1醋酸銨(45∶55)(磷酸調(diào)節(jié)pH 2.4)為流動(dòng)相，在335 nm下檢測(cè)，記錄圖譜至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍，主成分自身溶液對(duì)照法計(jì)算，收集的3批樣品各雜質(zhì)峰面積總和占對(duì)照溶液主峰面積7.8%～8.1%。

2.3 特征圖譜

中藥注射劑指紋圖譜技術(shù)可以全面反映所含的化學(xué)成分，圖譜的差別不僅能反映主要成分的差異，還能反映出一些含量較低甚至微量成分的差異，是全面評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量的一種手段。相關(guān)研究[19-20]建立了以甲醇-0.4%磷酸緩沖液梯度洗脫，335 nm波長(zhǎng)下測(cè)定燈盞花素注射液指紋圖譜的方法，選定了7個(gè)共有峰，10批不同廠家的產(chǎn)品相似度為0.754～0.913，差別明顯。耿家玲等[21]使用0.5%甲酸溶液-甲醇-乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm,測(cè)定了13個(gè)廠家89批燈盞花素注射液的特征圖譜和野黃芩苷含量，特征圖譜相似度差距顯著，野黃芩苷含量參差不齊，含量也是造成指紋圖譜相似度低的主要原因。馮子男等[22]使用甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60)等度洗脫，在335 nm下測(cè)定了10批市售燈盞花素注射液的指紋圖譜，不同廠家的指紋圖譜相似度有明顯差異，可能與不同廠家生產(chǎn)工藝的不同關(guān)系更大。

2.4 含量測(cè)定

現(xiàn)在研究中主要以HPLC測(cè)定燈盞花素注射液中燈盞花乙素(野黃芩苷)含量，專屬性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。林泳月等[23]建立了紫外法測(cè)定燈盞花素注射液含量的方法，以燈盞花乙素為對(duì)照品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定供試品溶液吸光度后從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出含量。趙梅等[11]以甲醇-0.05%磷酸溶液(13∶87)為流動(dòng)相，在335 nm下測(cè)得野黃芩苷含量,比紫外法測(cè)得結(jié)果稍低。張世軒等[12]以黃芩苷為內(nèi)標(biāo)加校正因子法測(cè)定燈盞花素注射液中野黃芩苷含量，并測(cè)定了5批樣品的含量，結(jié)果均低于紫外法測(cè)得結(jié)果，與紫外測(cè)定法專屬性不強(qiáng)的說(shuō)法一致。雷灼雨[13]以甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶1)為流動(dòng)相測(cè)定了4個(gè)廠家6批燈盞花素注射液，含量為標(biāo)示量的97.8%～100.2%，結(jié)果準(zhǔn)確。彭金香等[24]建立了以甲醇-水(60∶40)為流動(dòng)相測(cè)定燈盞花素注射液含量的方法，操作方便，可作為該產(chǎn)品含量控制的方法。還有研究者建立了燈盞花素注射液野黃芩苷含量和相關(guān)物質(zhì)在同一色譜條件下測(cè)定的方法[10，14]，使得分析工作變更簡(jiǎn)便、高效，可作為生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量控制的方法。

燈盞花素中黃酮類化合物為主要活性成分，因此總黃酮含量也有必要控制?？傸S酮含量測(cè)定多選擇蘆丁為對(duì)照品，使用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定。方崇波[25]建立了以野黃芩苷為對(duì)照，采取離子絡(luò)合方法測(cè)定注射用燈盞花素總黃酮含量的方法，測(cè)定的6批產(chǎn)品總黃酮含量為標(biāo)示量的100.1%～105.1%。

2.5 輔料

注射劑在生產(chǎn)中，往往會(huì)根據(jù)藥物的性狀，適當(dāng)?shù)靥砑右欢ㄝo料來(lái)調(diào)節(jié)主藥的溶解度、穩(wěn)定性、酸堿性等。注射劑是一種直接注射進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的劑型，對(duì)其質(zhì)量要求更高，安全性更好。輔料也是注射劑的一個(gè)重要組成部分，其質(zhì)量與制劑的質(zhì)量直接相關(guān)，因此也很有必要控制輔料的質(zhì)量，目前文獻(xiàn)中對(duì)輔料的研究有精氨酸和甘露醇。王先然等[26]建立了HPLC測(cè)定注射用燈盞花素中精氨酸含量測(cè)定的方法，以50 mmol·L-1磷酸二氫鉀-乙腈(95∶5)為流動(dòng)相，波長(zhǎng)206 nm下檢測(cè)，方法專屬性好、準(zhǔn)確，測(cè)定了4批注射用燈盞花素，精氨酸平均含量為11.79 mg。李金蘭[27]使用不同的方法分別測(cè)定了注射用燈盞花素中甘露醇含量，參考《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版甘露醇[16]87含量測(cè)定的碘量法，測(cè)定了注射用燈盞花素中甘露醇含量，操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，但滴定需在碘量瓶中進(jìn)行，避免碘蒸發(fā)影響結(jié)果；建立了紫外分光光度法測(cè)定甘露醇含量，以甘露醇為對(duì)照品，與試劑反應(yīng)顯色后在412 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，顯色反應(yīng)受外界pH、溫度、光照等影響；還建立了使用氨基柱、蒸發(fā)光檢測(cè)器，以乙腈-水(83∶17)為流動(dòng)相測(cè)定甘露醇含量的高效液相色譜法，該方法專屬性高、結(jié)果準(zhǔn)確；上述3種測(cè)定方法相比，HPLC優(yōu)于另外2種，可作為注射用燈盞花素中甘露醇含量測(cè)定的方法。

2.6 其他

郭紅麗等[28]建立了注射用燈盞花素中13種金屬元素的測(cè)定方法，HNO3和H2O2作為消解體系，采用微波消解法前處理樣品后，以Sc、In、Rh、Re作為內(nèi)標(biāo)測(cè)定Pb、Cd、Hg、As、Cu、Fe、Mn、Ba、Zn、Al、Co、Cr、Ni 13種金屬元素的含量，方法準(zhǔn)確、靈敏度高，可作為該中藥注射液質(zhì)量監(jiān)控的方法。

2.7 安全性研究

細(xì)菌內(nèi)毒素：目前燈盞花素注射液使用家兔法檢查熱原，具有成本高、時(shí)間長(zhǎng)、影響因素多、靈敏度低的缺點(diǎn)，目前有研究使用鱟試劑檢查細(xì)菌內(nèi)毒素以代替熱原的檢查。燈盞花素注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查，凝膠法和動(dòng)態(tài)比濁法在文獻(xiàn)中都有報(bào)道。中藥注射劑由于成分復(fù)雜和工藝的特殊性，往往對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查有干擾。高濃度燈盞花素可抑制細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑的凝膠形成，通常采用稀釋若干倍數(shù)的方法，排除干擾。同樣使用膠凝法，不同文獻(xiàn)中稀釋倍數(shù)也不盡相同[29-34]，這除了與鱟試劑靈敏度、產(chǎn)品規(guī)格有關(guān)外，還可能與不同廠家生產(chǎn)工藝不同有關(guān)。勞海燕等[35]、王璐等[36]均采用了動(dòng)態(tài)比濁法測(cè)定燈盞花素注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素，細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀波長(zhǎng)分別選擇了405、660 nm。所以無(wú)論選取哪種方式測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素均需先開(kāi)展方法學(xué)驗(yàn)證。

過(guò)敏反應(yīng)：中藥注射劑成分多且復(fù)雜，產(chǎn)品在上市前采用豚鼠進(jìn)行過(guò)敏實(shí)驗(yàn)，因種屬與人類存在一定差異，可能在當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)條件下未能達(dá)到足以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生陽(yáng)性癥狀的劑量，以此動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)推測(cè)人致敏的可能性時(shí)存在較大的風(fēng)險(xiǎn)。譚夢(mèng)暉等[37]使用注射用燈盞花素誘導(dǎo)F344、SD、Wistar 3種品系大鼠產(chǎn)生被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)，3種品系大鼠隨機(jī)分組后給藥，大鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)和大鼠-小鼠異種被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)結(jié)果均顯示3種品系大鼠對(duì)燈盞花素的敏感性存在差異，其中以F344大鼠最為敏感，得出選擇不同品系的動(dòng)物至少2種以上進(jìn)行過(guò)敏性安全評(píng)價(jià)，可提高檢測(cè)方法的靈敏度及結(jié)果的可靠性的結(jié)論。其研究團(tuán)隊(duì)還用注射用燈盞花素誘導(dǎo)了豚鼠及大鼠的主動(dòng)全身過(guò)敏反應(yīng)[38]，燈盞花素對(duì)兩者均未表現(xiàn)出明顯的全身過(guò)敏反應(yīng)癥狀，反應(yīng)幾乎一致，BN大鼠表現(xiàn)出燈盞花素潛在的過(guò)敏反應(yīng)，為中藥注射劑過(guò)敏性評(píng)價(jià)使用不同品種的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供了參考依據(jù)。李黎明等[39]使用注射用燈盞花素比較研究了F344、BN、SD、Wistar 4種品系大鼠皮下注射后被動(dòng)皮膚過(guò)敏及其致敏血清中Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的抗體總IgE水平的差異，與譚夢(mèng)暉等[37]的結(jié)果一致。谷舒怡等[40]采用腹腔致敏靜脈激發(fā)、口鼻霧化致敏激發(fā)2種途徑給予豚鼠燈盞花素注射液，燈盞花素注射液高、低劑量組動(dòng)物均未出現(xiàn)明顯過(guò)敏反應(yīng)，高劑量組動(dòng)物血清中組胺含量較陰性對(duì)照組升高，經(jīng)口鼻吸入燈盞花素注射液1 mg·kg-1可能存在潛在過(guò)敏反應(yīng)。譚夢(mèng)暉等[41]給KM種小鼠足跖皮下注射燈盞花素，發(fā)現(xiàn)燈盞花素處理側(cè)腘窩淋巴結(jié)質(zhì)量和細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著高于對(duì)側(cè)，可知KM小鼠對(duì)燈盞花素具有一定的過(guò)敏性。

毒性研究：注射劑型燈盞花素制劑具有生物利用度高、起效快等特點(diǎn)，在危疾病證急救及感染性疾病治療上具有一定的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)，臨床使用該制劑的劑量有加大的趨勢(shì)，為了確定增加用藥劑量的安全性，觀察其毒性反應(yīng)癥狀和毒性作用靶器官，已有研究者探索性地使用不同動(dòng)物開(kāi)展毒性研究，發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)，更好地指導(dǎo)臨床用藥。謝琛靜等[42]觀察了注射用燈盞花素對(duì)比格犬呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)以及ICR小鼠協(xié)調(diào)功能和自發(fā)活性的影響，比格犬按體質(zhì)量隨機(jī)分成3種不同劑量組和溶媒對(duì)照組，分別給藥后測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)心電圖、呼吸、血壓和肛溫，單次靜脈給予注射用燈盞花素對(duì)比格犬的呼吸、心血管系統(tǒng)及體溫?zé)o明顯影響；ICR小鼠按個(gè)體質(zhì)量分成不同劑量3組和溶媒對(duì)照組，分別尾靜脈給藥后觀察機(jī)體協(xié)調(diào)能力，單次給予注射用燈盞花素對(duì)小鼠協(xié)調(diào)功能無(wú)明顯影響，500 mg·kg-1注射用燈盞花素對(duì)雌性小鼠在2 min時(shí)會(huì)產(chǎn)生一過(guò)性的輕度軀體運(yùn)動(dòng)障礙或中樞抑制作用。劉向云等[43]探討了注射用燈盞花素對(duì)SD大鼠和比格犬的毒性病理學(xué)差異，大鼠、比格犬分別給予不同劑量注射用燈盞花素3個(gè)月，每天1次，恢復(fù)期觀察1個(gè)月，麻醉采血后，取大鼠或犬大腦、小腦、骨髓、甲狀腺、唾液腺、腎上腺、胰腺、氣管、心肺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、脾、淋巴結(jié)，病理制片后觀察，大鼠各臟器均無(wú)明顯異常改變，比格犬給藥期分別在肝、胃、肺、腎、脾和淋巴結(jié)出現(xiàn)不同程度的損傷，損傷情況因劑量而不同，注射用燈盞花素對(duì)臟器的毒性反應(yīng)存在中樞差異。梁玉記等[44]比較了比格犬和食蟹猴在使用了注射用燈盞花素后的體內(nèi)毒性，2種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)注射用燈盞花素的耐受性、敏感性和毒性反應(yīng)均存在種屬差異，兩者的表現(xiàn)差異明顯。王蓉蓉等[45]比較了不同廠家燈盞花素注射液的體外細(xì)胞毒性，不同廠家的產(chǎn)品細(xì)胞毒性差別較大，輔料聚山梨酯80也有細(xì)胞毒性，降低聚山梨酯80用量可提高安全性。

2.8 質(zhì)量評(píng)價(jià)

注射劑型燈盞花素的生產(chǎn)廠家較多，不同的生產(chǎn)工藝、不同供應(yīng)商的原料都可能影響產(chǎn)品的質(zhì)量，為了評(píng)價(jià)不同產(chǎn)品的質(zhì)量狀況，也為進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考，開(kāi)展了同品種的質(zhì)量評(píng)價(jià)。何玉川等[46]使用紫外分光光度法測(cè)定了3個(gè)不同廠家的7批燈盞花素注射液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.75%～103.3%，差異不大，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。甄健存等[47]對(duì)比研究了不同廠家燈盞花素注射液、注射用燈盞花素的質(zhì)量，建立了HPLC測(cè)定上述產(chǎn)品中野黃芩苷含量和有關(guān)物質(zhì)的方法，發(fā)現(xiàn)有3批產(chǎn)品含量不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求；不同廠家產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)存在顯著差異；注射用燈盞花素小規(guī)格產(chǎn)品的裝量差異大，說(shuō)明生產(chǎn)廠家小規(guī)格產(chǎn)品裝量控制能力稍弱；顏色檢查均大于標(biāo)準(zhǔn)比色液黃色10號(hào)和黃綠色10號(hào)，甚至不同批次產(chǎn)品的溶液顏色存在明顯差異；不溶性微粒均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。芮菁等[48]比較了不同廠家生產(chǎn)的含量測(cè)定合格的燈盞花素注射液在小鼠腦血栓形成實(shí)驗(yàn)和小鼠腦循環(huán)障礙實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)情況，在同樣的檢測(cè)限值下，Ⅰ號(hào)樣品對(duì)小鼠腦血栓形成有顯著對(duì)抗作用，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號(hào)樣品則未見(jiàn)對(duì)抗作用；Ⅲ、Ⅳ號(hào)樣品對(duì)小鼠急性腦循環(huán)障礙改善有明顯作用，而Ⅰ、Ⅱ號(hào)樣品則差異不顯著；Ⅰ號(hào)樣品無(wú)細(xì)胞毒性反應(yīng)的濃度與其他3個(gè)樣品無(wú)明顯差異。不同廠家生產(chǎn)的不同規(guī)格、不同批次的燈盞花素注射液雖然含量測(cè)定均符合規(guī)定，但生物活性卻存在明顯差異，說(shuō)明“生物活性測(cè)定”與理化分析控制反映的產(chǎn)品質(zhì)量結(jié)果可能不一致。葛建華等[49]在檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)1批燈盞花素注射液紫外吸收波長(zhǎng)產(chǎn)生了漂移，通過(guò)理化鑒別、薄層色譜法、紫外分光光度法、HPLC等對(duì)燈盞花素注射液中非法添加物進(jìn)行了定性與定量分析，添加物呈維生素C鑒別的陽(yáng)性反應(yīng)，質(zhì)量濃度為8.085 8 mg·mL-1。

3 結(jié)語(yǔ)

燈盞花素注射液、注射用燈盞花素均以燈盞花素為原料制成的供靜脈注射使用的注射劑。通過(guò)對(duì)比上述2個(gè)產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可知兩者存在一定差距，注射用燈盞花素質(zhì)量控制相對(duì)嚴(yán)格。燈盞花素注射液水針劑建議結(jié)合現(xiàn)階段質(zhì)量研究進(jìn)一步提高質(zhì)量控制水平，可適當(dāng)增加溶液的顏色、總固體、熾灼殘?jiān)?、過(guò)敏反應(yīng)、降壓物質(zhì)、異常毒性等項(xiàng)目的檢查，優(yōu)化鑒別、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定的方法。水針劑、粉針劑均有的項(xiàng)目(如蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹(shù)脂、草酸鹽、鉀離子、熱原)可對(duì)比研究不同濃度的燈盞花素(野黃芩苷)對(duì)檢查結(jié)果的影響，從而確定最優(yōu)的檢查方法，真實(shí)準(zhǔn)確地反映產(chǎn)品質(zhì)量；2個(gè)產(chǎn)品還可考慮建立指紋圖譜(特征圖譜)和關(guān)鍵輔料的質(zhì)量控制方法，整體提高該產(chǎn)品的質(zhì)量控制水平。本文質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)比分析為今后同品種產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究提供了參考，也為以燈盞花素為原料的中藥注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高指明了研究方向。

燈盞花素注射劑劑型的產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中顯示，不同廠家的產(chǎn)品質(zhì)量存在一定差距。這一現(xiàn)狀可能主要與不同制劑企業(yè)的原料來(lái)源、生產(chǎn)設(shè)備、工藝參數(shù)控制等有關(guān)，最終在產(chǎn)品質(zhì)量中表現(xiàn)出來(lái)。針對(duì)這一現(xiàn)狀，建議制劑企業(yè)在固定原料來(lái)源的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步提高工藝控制能力，把影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵參數(shù)、關(guān)鍵生產(chǎn)環(huán)節(jié)精細(xì)化管控，保證批間產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定，為臨床用藥的有效性、安全性做好基礎(chǔ)。